什么是电渗析淌度?电渗淌度与电泳淌度有什么不同

毛细管电泳的电渗作用
来源/作者:中国标准物质网  日期: 9:40:35
在一定介质中,一个“自由”带电粒子的电泳过程,是从净位移为零的布朗运动状态被电场加速后进入恒速,即电泳稳态的过程。在无限稀释下,除电场E的作用外,粒子还将受到介质的黏滞阻力的作用,其中K-1为德拜半径,与离子强度有关。a为解离度。上式表明介质对淌度的影响程度,是电泳分离及条件选择的根本依据。由此可知,分子半径小,电荷大的离子具有较大的电泳淌度,而分子半径大,电荷小的离子具有较小的电泳淌度。电泳淌度的差异构成了电泳分离的基础。
因为黏滞阻力的存在,离子的电泳会带动溶剂同向运动,设法使某一符号的离子变成不可移动的固定(电荷)粒子,则作用于溶剂的力便失去平衡,溶剂发生单向流动,这就是所谓的电渗现象。
电渗流是指毛细管内溶液在外力电场作用下,由于毛细管内壁带有电荷,使液体朝一个方向运动。CE所用的石英毛细管,在pH&3的情况下,管壁表面的硅羟基si―OH电离成si一0-,使管壁表面带负电,为了保持电荷平衡,溶液中水合离子,一般为阳离子被吸附到表面附近,形成双电层。当在毛细管两端加电压时,双电层中的阳离子向阴极移动,由于离子是溶剂化的,所以带动了毛细管中整体溶液向阴极移动。显然电渗是电泳的反过程,电渗流大小可用电渗速度或电渗淌度表示。电渗流与电场强度、Zeta电位及缓冲液的介电常数有关。
电渗流的一个重要特点是具平面流型,其电渗驱动力沿毛细管均匀分布,电渗速度的径向分布几乎是均匀的,与高效液相中高压泵驱动所产生的层流或抛物线流型速度曲线不同,不会直接引起样品组分区带扩散。其另一个特点是可以使几乎所有的样品组分不管大小,以同样的方向移动。各组分在毛细管中的流出时间取决于电渗流速度和组分电泳速度的矢量和。在一般情况下,电渗流方向从阳极到阴极,且电渗速度一般大于电泳速度,所以阴离子也在阴极流出。因此,CE中不仅可以分离离子,也可以分离中性分子。因此,合理地利用电渗流可以使阳离子、中性分子、阴离子实现同时分离分析。
电渗流是伴随电泳而产生的一种电动现象。一般情况下,电渗流速度约等于一般离子电泳速度的5~7倍,所以能实现所有样品组分的同向泳动。
电渗流在CE的分离中起着极其重要的作用,具体如下:
①在CE中电渗流推动溶液的流动,起到泵的作用,可以同时完成阳阴离子的分离。
②改变电渗流的大小和方向可以改变分离效率和选择性。减缓电渗流延长分离过程,改变电渗流的方向改变出峰顺序和改变峰形,抑制组分在管壁上的吸附。
③电渗流影响各种电性物质在毛细管中的迁移速度。电渗流速度越大,分离时间越短,分析速度也越快,反之亦然。所以电渗流可以控制电泳速度。&&&&仪器分析(郭旭明)
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毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE):以高压电场为驱动力,以电解质为电泳介质,以毛细管为分离通道,样品组分依据淌度和分配行为的差异而实现分离的一种色谱方法。由于毛细管内径小,表面积和体积的比值大,易于散热,因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生,这是CE和传统电泳技术的根本区别。它有多种分离模式,可以采用液相色谱中的各种检测方法。CE既可以分离带电荷的溶质,也可以通过毛细管胶束电动色谱等分离模式分析中性溶质,CE的高分离效率、高检测灵敏度,样品用量极少等特点使它在生物医药样品的分析中显示出突出的优越性。 CE所用的石英毛细管柱,在pH&3.0情况下,其内表面带负电,和溶液接触时形成了一双电层。在高电压作用下,一定介质中的带电离子在直流电场作用下的定向运动称为电泳。单位电场下的电泳速度称为电泳淌度或电泳迁移率。电泳速度的大小与电场强度、介质特性、粒子的有效电荷及其大小和形状有关。而双电层中的水合阳离子引起流体整体地朝负极方向移动的现象叫电渗,单位电场下的电渗速度称为电渗淌度。电渗速度与毛细管中电解质溶液的介电常数和粘度、双电层的ζ电势以及外加直流电场强度有关。粒子在毛细管内电解质中的迁移速度等于电泳和电渗流(EOF)两种速度的矢量和,正离子的运动方向和电渗流一致,故最先流出;中性粒子的电泳流速度为“零”,故其迁移速度相当于电渗流速度;负离子的运动方向和电渗流方向相反,但因电渗流速度一般都大于电泳流速度,故它将在中性粒子之后流出,从而因各种粒子迁移速度不同而实现分离。 电渗是CE中推动流体前进的驱动力,它使整个流体像一个塞子一样以均匀速度向前运动,使整个流型呈近似扁平型的“塞式流”。它使溶质区带在毛细管内原则上不会扩张。但在HPLC中,采用的压力驱动方式使柱中流体呈抛物线型,其中心处速度是平均速度的两倍,导致溶质区带本身扩张,引起柱效下降,使其分离效率不如CE。硝基苯酚是弱酸性物质,其邻、间、对位异构体由于pKa值不同,在一定pH值的缓冲溶液中电离程度不同。因此,它们在毛细管电泳分离过程中表现出不同的迁移速度,从而实现分离。
1.打开毛细管电泳仪,预热至检测器输出信号稳定。2.准确测量毛细管长度。距毛细管一端约15cm处去除约2mm的毛细管聚合物保护层,作为检测窗口,并测量毛细管进样端到检测窗的长度。3.将毛细管的检测窗口对准检测器光路,并安装好毛细管。4.依次用氢氧化钠溶液(1.0mol·L-1)、二次蒸馏水、盐酸溶液(0.1mol·L-1)、二次蒸馏水冲洗毛细管各5min,最后在毛细管注入缓冲溶液,并将毛细管的两端分别插入位于电极处的缓冲溶液瓶中。将直流电压调至20kV。5.待记录仪基线稳定后,关闭高压电源,用压力进样方式进样,并设定进样时间,待样品峰出现后记录其迁移时间,混合样按同样步骤进行操作,并记录图谱。6.改变外加电压(如15kV或25kV)重复步骤4、5。7.实验完毕后,关闭仪器电源,并用二次蒸馏水冲洗毛细管。
1.根据所得到的实验数据,计算电渗速度、电渗淌度、各组分的电泳淌度、间硝基苯酚的理论塔板数。根据分离图计算各组分之间的分离度。2.绘制外加电压与电渗速度的关系图,并给予解释。
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