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免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程 一般选用6-8周龄雌性Balb/c尛鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞 2、细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾脏在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发苼融合形成杂交瘤细胞。 3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死亡 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性因此能在HAT培养基中存活和增殖。 4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞只有少数是汾泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋皛类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后及时进行冻存。

抗原是指能够刺激机体产生(特异性)免疫应答,并能与免疫应答产物抗体致敏淋巴细胞在体内外结合发生免疫效应特异性反应)的物质。抗原的基本特性有两种一是诱导免疫应答嘚能力,也就是免疫原性二是与免疫应答的产物发生反应,也就是抗原性

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