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一个饺子多少克 一个饺子多重
饺子是有一种面食小吃，用薄薄的面皮包裹各种馅料，制成美味的饺子，市面上有专门的饺子皮，因此，饺子的大小一般也差不多。那么，一个饺子多少克？一个饺子多重？一个饺子多少克一般饺子的重量大概20克左右。饺子现在已经成为了北方人不可或缺的过年食品。在包饺子时，人们常常将金如意、红糖、花生、枣和栗子等包进馅里。吃到如意、吃到红糖的人，来年的日子更甜美，吃到花生的人将健康长寿，吃到枣和栗子的人将早生贵子。饺子的种类中国各地饺子的名品甚多，如广东用澄粉做的虾饺、上海的锅贴饺、扬州的蟹黄蒸饺、山东的高汤小饺、沈阳的老边饺子、四川的钟水饺等，都是受人欢迎的品种。西安还创制出饺子宴，用数十种形状、馅心各异的饺子组成宴席待客。饺子的做法羊肉馅：原料：净羊肉500克韭黄250克姜末50克葱末50克花椒5克鸡蛋2个精盐5克胡椒粉3克料酒15克酱油20克香油25克花生油25克制法：1、羊肉洗净剁成细粒；韭黄洗净切细末；花椒用开水泡成花椒水。2、羊肉末用姜末、葱末、精盐、胡椒粉、料酒、酱油、花椒水、鸡蛋液拌匀，再加入香油、花生油拌匀，最后加入韭黄末和匀即成。注意事项1、羊肉的膻味较重，故须加入花椒水以去膻，同时还应加大姜末的用量。2、韭黄末应最后加入。如无韭黄，亦可用芹菜、香菜代替。
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你可能喜欢往一个桶里倒入四杯水,连桶重3千克,倒入6杯水,连桶重4000克,每杯水有多少克!
往一个桶里倒入四杯水,连桶重3千克,倒入6杯水,连桶重4000克,每杯水有多少克!其实我知道答案,但是就是不知道算式该怎么列!
（）÷（6-4）=500（克）
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与《往一个桶里倒入四杯水,连桶重3千克,倒入6杯水,连桶重4000克,每杯水有多少克!》相关的作业问题
不用方程,给出一种算术解法如下：先将乙桶倒出 40 千克,则甲桶是乙桶的 2 倍；此时乙桶占两桶总数的 1/(2+1) = 1/3 ；再将甲桶倒入乙桶 20 千克,则甲桶是乙桶的 4 倍；此时乙桶占两桶总数的 1/(4+1) = 1/5 ；则两桶总数为 20÷(1/3-1/5) = 150 千克,原来两桶总数是 150
假设一杯水X（14－5）X＝6.6－3X＝0.4
9杯水的重量＝6.6－3＝3.6千克所以,1杯水的重量＝3.6÷9＝0.4千克桶的重量＝3－5×0.4＝1千克
1、60-2*（120-60）/5=36千克2、列方程解出甲有40,乙有1703、（8*15+9*20+12*25）/(15+20+25)=104、总共卖出3/5,一天卖出2/5,第二天就卖出1/5,故36*5=180本
四,六级就别规划了吧,年年都去考呗,就当练习了,又不贵.把四六级考好也不是那么容易的.基础薄弱的话,先考托再考G.托福呢,你最好先报名,考位挺紧张的,每年12月初开放第二年的考位,要是北京的学生那就更严峻了.报名之后再看复习时间.托福需要大概半年时间复习,GRE呢报名应该比较容易,老GRE准备也需要至少半年时间,现在新
16只 再问： 请写出计算过程 再答： 四个角，每个角上有一只，那就是四只，每只猫前有三只，那就四乘三，得十二只，十二加四，那不就是十六只么，难道这是脑经急转弯？
一红另一个不是红概率是（2*2）/6=2/3两个红是1/6于是另一个是红概率是（1/6）/（2/3）=1/4
5钟可能 3 4 5 6 75的可能最大 出现的可能性是1/3
由于问题里面没有限制,要让俩个盘子的杯子一样多有好多种方法,像前面所说的,可以在两边盘子加杯子或者减杯子,只要一样多的话就ok了.
一个盒子放4个玻璃球,剩下的一个盒子放一个玻璃球,最多可以放13个盒子.希望我的回答能对你有帮助.
21个.因为最少要一个盒子有4个球,所以能放进86÷4=21.5（个）盒子,但因为盒子不能是小数,而22个盒子又超出了底线,所以用去尾法,21.5≈21（个）
3,总数28,苹果14,梨子7,香蕉4
两次是放回还是不放回若放回：P=2/4*2/4=25%、若不放回：P=2/4*1/3=1/6 再问： 为啥子要乘起来撒？ 再答： 因为第一次摸到红球的可能性为2/4，两次都摸到红球是基于第一次摸到红球的基础上的，我们说第二次摸到红球的可能性为2/4（这是放回的情况下），是把第二次摸球这个事件看成单位1，但现在第二次摸球
第一次摸红球的概率是2/4=1/2第二次也是1/2所以两次都摸的概率是 1/2*1/2=1/4题是不是写错了啊,什么叫两次摸出红球都是红球,红球是红球的概率是1嘛
设椅子有X个,则凳子(16-X)个,4X 3(16-X)=60
凳子（16x4-60）÷（4-3）=4椅子16-4=12
条件概率,P(另一球为红色)=P(两球均为红色)/P(一球为红色）=1/6/1/2=1/3
设原来桶里有水X千克.（1-1/2）X+10=3/5X1/2X+10=3/5X3/5X-1/2X=100.1X=10X=100答：原来桶里有水100千克.扫二维码下载作业帮
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算式中O和囗各代表一个数.己知（o＋囗）X0.3=4.2,囗除以0.4=12.那么o=多少,囗＝多少
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o等于9.2 口等于4.8
你是数学老师吗
你是几年级的啊
那你怎么会
啊，我五年级的
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1 .植物生理学实验指导
2 .分子生物学实验指导
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部分自编教材（讲义）电子文件目 录1． 植 物 生 理 学 实 验 指 导 2． 分 子 生 物 学 实 验 指 导 3． 基 因 工 程 实 验 指 导 4． 生 物 化 学 实 验 指 导植物生理学实验指导张明生 编贵州大学生命科学学院 2006 年 8 月内容简介本实验指导主要介绍了植物的水分代谢、矿质营养、光合作用、呼吸作用、 生长发育、 植物生长物质及抗性生理等方面的实验技术。 附录部分列出了植物生 理学实验常用仪器的使用方法， 以方便读者查阅。 本实验指导可供高等院校生物 类、农林类、环保类等专业的本科生使用，也可供其他植物生理学工作者参考。目录学生实验守则………………………………………………………………………… 1 实验一 实验二 实验三 实验四 实验五 实验六 实验七 实验八 实验九 实验十 实验十一 实验十二 实验十三 实验十四 实验十五 植物组织水势的测定……………………………………………………… 2 植物蒸腾强度的测定……………………………………………………… 3 钾离子对气孔开度的影响………………………………………………… 4 植物根系活力的测定……………………………………………………… 5 植物的元素缺乏症………………………………………………………… 7 叶绿体色素的提取、分离、性质鉴定及含量测定……………………… 9 植物组织中蛋白质含量的测定…………………………………………… 11 植物光合强度的测定……………………………………………………… 14 植物呼吸强度的测定……………………………………………………… 15 植物组织中糖含量的测定………………………………………………… 16 过氧化物酶活性的测定………………………………………………… 18 IAA 的生物鉴定………………………………………………………… 20 种子活力的快速测定…………………………………………………… 22 植物体内游离脯氨酸含量的测定……………………………………… 23 不良环境对植物的伤害………………………………………………… 25附：植物生理学实验常用仪器的使用方法………………………………………… 26学生实验守则一、严格遵守贵州大学农业生物实验教学中心的各项规章制度，遵守实验 课课堂纪律。按时进入实验室并在指定位置就座，不得无故迟到缺席。 二、实验前必须接受实验教学中心统一组织的安全教育及规范化实验基本 操作培训，自觉遵守“实验室安全管理制度” 。实验中涉及的仪器必须 在教师指导下或经教师准许后方可使用，并严格按照仪器操作规程进 行操作。使用仪器过程中如有损坏、丢失或发生异常时，必须将其原 因和经过立刻呈报任课教师，并详细登记，以待处理。 三、爱护公物，讲究卫生，保持良好的实验环境，与实验课无关的物品一 律不准带入实验室。实验室内严禁饮食、吸烟、喧哗，不得随地吐痰 和乱扔杂物，严禁在实验室公物上涂画，违者按有关纪律论处。 四、实验开始前必须认真核对所分配的物件清单并签字确认，如有缺损应 立即报告实验教师，并进行登记。实验过程中必须爱护和保管好所属 物件，不得随意乱拿或转借。实验结束后立即洗净、整理、交还所属 物件，报任课教师检查、签字确认。 五、实验课前应认真预习并写出实验预习报告。实验课上专心听讲、积极 思考、认真操作、详细记录，不得做与实验内容无关的事。实验结束 后，认真撰写并按时提交实验报告。 六、每次实验完毕后，必须立即清洁实验仪器和用具，清扫实验台面，出 示实验记录，经任课老师检查并签字认可后方可离去。值日生必须做 好实验室的整理和清洁，并认真填写“实验课情况登记表”。实验中 所用器具和生物材料等，未经任课教师允许不得私自带出实验室。-1-实验一【实验目的】植物组织水势的测定掌握小液流法测定植物水势的方法。【实验原理】溶液中放一植物组织， 如果组织的水势小于溶液的水势 （即渗透势） 则组织吸水， ， 反之组织失水。若两者相等，水分交换保持动态平衡。组织的吸水或失水会使溶液的 浓度、比重、电导以及组织本身的体积与重量发生变化。根据这些参数的变化情况可 确定与植物组织等水势的溶液浓度。然后依据公式计算植物组织的水势。 Cψw = Cψs = CRTiC = 0.083×105 ×（273+t）×1×C ψw：组织的水势；ψs：外液的渗透势；i：范托荷夫系数或等渗系数（解离系数，蔗糖 T： 单位为K， 273℃+t， 即 为 1） R： ； 理想气体常数， R=0.083×105 L?Pa/mol?K； 绝对温度， t为实验温度；C为等渗溶液的浓度，单位为mol/L。【器材与试剂】器材：电子天平，试管架，试管，移液管，毛细移液管（出口处弯成直角） ，解剖 针，镊子，打孔器（或剪刀） ，试剂瓶。 试剂：1 mol/L 蔗糖溶液，次甲基蓝（甲烯蓝） 。【实验材料】叶片或块根块茎。【方法与步骤】1．蔗糖溶液的配制：配制一系列不同浓度的蔗糖溶液（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、 0.7、0.8 mol/L）各 10 ml。 2．蔗糖溶液分装：取 8 支具塞试管，分别注入 0.1～0.8 mol/L 的蔗糖溶液各 5 ml，并 编号后作为对照组；另取 8 支具塞试管，分别注入 0.1～0.8 mol/L 的蔗糖溶液 4 ml， 编号后作为试验组。 3．在试验组试管中加入植物材料：用剪刀（或打孔器）将植物组织切成大小一致的小 块数十片，向试验组各试管中投入相等数目的组织小块（尽量多加一些） ，塞好塞 子，放置 20～30 min，其间摇动试管数次。 4．确定等渗溶液浓度：浸泡时间到后，用解剖针挑少许甲烯蓝粉末放入试验组的每个 试管中，并振荡，使溶液染成蓝色。用 8 支毛细移液管分别吸取试验组 8 支试管中 的着色溶液少许，伸入对照组与其蔗糖浓度相同的试管中部后缓慢地放出一滴蓝色 试验溶液，观察该蓝色小液流移动的方向，找到等渗溶液浓度。 5．植物组织水势计算： （依前公式）-2-实验二植物蒸腾强度的测定【实验目的】掌握用纸样-称重法快速测定植物叶片蒸腾强度的技术。【实验原理】植物在一定时间内，单位叶面积或单位鲜重散失的水量，称为蒸腾强度，单位一 般用g/dm2?h或g/100g FW?h表示。【器材与试剂】电子天平，剪刀，直尺，铅笔，白纸。【实验材料】植物叶片。【方法与步骤】1．叶片选取：选取某植物的代表性叶片 3～5 片，称重（WL）后分别平展放置于桌面 。 上，30 min后再称重（WL′） ；将上述代表 2．纸样制作：用白纸、直尺、剪刀制作 1 dm2的标准纸样，称重（W1） 。 性叶片分别平铺于白纸上，用铅笔沿叶缘描边后剪下叶片纸样，称重（W2） 3．求叶面积：S叶＝S纸＝W2/W1。 4．蒸腾强度计算： 根据公式：蒸腾强度（g/dm2?h）= (WLCWL′ ) / S叶×0.5-3-实验三【实验目的】钾离子对气孔开度的影响了解K+对气孔开度的影响，了解K+在气孔运动中的作用及其与光照的关系。【实验原理】保卫细胞的渗透系统可由K+所调节，无论是环式或非环式光合磷酸化，都可形成 ATP。ATP不断供给保卫细胞原生质膜上的K+-H+交换泵作功，支持保卫细胞逆着离子浓 度差而从周围表皮细胞吸收K+，降低保卫细胞的渗透势，从而使气孔张开。【器材与试剂】器材：显微镜，镊子，温箱，载玻片，盖玻片，培养皿。 试剂：KNO3，NaNO3。【实验材料】新鲜蚕豆叶。【方法与步骤】1．配制 0.5% KNO3及 0.5% NaNO3溶液。 0.5% NaNO3 2． 9 个培养皿平均分成 3 组， 3 组培养皿中分别加入 0.5% KNO3、 取 在 及蒸馏水各 15 ml。 3．撕取蚕豆叶下表皮若干，放入上述 3 组培养皿中。 4．培养皿放入 25℃温箱中，使溶液温度达到 25℃。 5．以 3 个盛不同溶液的培养皿为 1 组，将 9 个培养皿分成 3 组，分别置于人工光 照条件下照光 30 min、60 min、90 min。 6．分别在显微镜下观察各处理条件下的气孔开度变化。 7．结果分析。-4-实验四【实验目的】植物根系活力的测定掌握根系活力的测定方法，比较不同年龄根系活力的大小。【实验原理】氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成 为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲 （TTF） ，如下式：生成的三苯甲 （TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛 用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸、延胡 索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以 TTC 还原量能表示脱氢酶 活性，并作为根系活力的指标。【器材与试剂】器材：分光光度计，分析天平（感量 0.1 mg ） ，电子顶载天平（感量 0.1 g） ，温箱， 小烧杯 3 个，研钵 1 个，移液管：0.5 mL 1 支、10 mL 1 支、5 mL 3 支，刻度试管 6 支， 试管架，药勺，滤纸。 ，粉末；1% TTC溶液（准 试剂：乙酸乙酯（分析纯） ；次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯） 确称取TTC 1.0 g，溶于少量水中，定容到 100 mL，用时稀释至需要的浓度） ；磷酸缓冲 液（1/15 mol/L，pH 7.0） mol/L硫酸（用量筒取比重 1.84 的浓硫酸 55 mL，边搅拌边 ；1 加入盛有 500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000 mL） ；0.4 mol/L琥珀酸（称取琥 珀酸 4.72 g，溶于水中，定容至 100 mL即成） ；石英砂适量。【实验材料】水培或砂培小麦、玉米等植物根系。【方法与步骤】-5-1．定性测定 （1） 配制反应液把 1% TTC 溶液、 mol/L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按 1:5:4 比例混合。 0.4 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。将根放入三角瓶中，倒入反应液， 以浸没根为度，置 37℃左右暗处放 1～3 h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧 根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。 2．定量测定 （1） TTC标准曲线的制作取 0.4% TTC溶液 0.2 mL放入大试管中， 9.8 mL乙酸乙酯， 加 则立即产生红色的TTF。 此溶液浓度为每毫升含有TTF 80?g。 再加少许Na2S2O4粉末摇匀， 分别取此溶液 0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置 10 mL刻度试管中，用 乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF 20 ?g、40 ?g、80 ?g、120 ?g、160 ?g的系列标准 溶液，以乙酸乙酯作参比，在 485 nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 （2） 称取根尖样品 0.5 g， 放入小烧杯中， 加入 0.4% TTC 溶液和磷酸缓冲液 （pH 7.0） 各 5 mL，使根充分浸没在溶液内，在 37℃下暗保温 1～2 h，此后立即加入 1 mol/L 硫 酸 2 mL，以停止反应。 （与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，37℃下暗保 温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上） 。 （3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯 3～4 mL，充分研磨， 以提出 TTF。把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤 2～3 次，皆 移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为 10 mL，用分光光度计在波长 485 nm 下比色， 以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出 TTC 还原量。 3．结果计算 根系活力= [mg TTF/ (g?h)]式中：C――四氮唑还原量，?g。 W――根重，g。 h――时间，h。-6-实验五【实验目的】植物的元素缺乏症了解研究植物元素缺乏症的实验设计，了解检索植物元素缺乏症的方法，掌握溶液 培养的基本方法。【实验原理】由于土壤成分复杂，应用溶液培养技术做植物营养试验，可以避免土壤里的各种复 杂因素，以便了解植物正常生长发育所需的矿质元素。【器材与试剂】器材：分析天平、培养缸（瓷质或塑料） 、鱼缸打气泵、量筒、烧杯、移液管等。 试剂：见“方法与步骤” 。【实验材料】玉米、小麦、番茄、大豆、白菜、甘薯、蓖麻等植物种子或幼苗。种子用漂白粉溶 液灭菌 30 min，用无菌水冲洗数次，然后放在洗净的石英砂中发芽（用去离子水或蒸馏 水） ，等幼苗长出第一真叶时待用；若从土中取幼苗作实验材料，则必先用去离子水或 蒸馏水洗净。【方法与步骤】1．贮备液配制：按下表分别配制贮备液，所用药品均需为分析纯。 药品名称 Ca(NO3)2 KNO3 MgSO4?7H2O KH2PO4 NaH2PO4 NaNO3 MgCl2 Na2SO4 CaCl2 KCl EDTA-2NaFe Na2-EDTA FeSO4?7H2O H3BO3 MnSO4 微量元素 CuSO4?5H2O ZnSO4.7H2O H2MoO47用量（g/L） 82.07 50.56 61.62 27.22 24.00 42.45 23.81 35.51 55.50 37.28 7.450 5.570 2.860 1.015 0.079 0.220 0.0902．缺元素培养液配制：按下表用量配制缺元素培养液。 贮备液 完全 Ca(NO3)2 KNO3 MgSO4 KH2PO4 NaH2PO4 Fe-EDTA 微量元素 NaNO3 MgCl2 Na2SO4 CaCl2 KCl 10 10 10 10 ― 1 1 ― ― ― -N ― ― 10 10 ― 1 1 ― ― ― 10 10 4 -P 10 10 10 ― ― 1 1 ― ― ― -K 10 ― 10 ― 10 1 1 10 ― ― ― ― 贮备液（ml） -Ca ― 10 10 10 ― 1 1 10 ― ― ― ― -Mg 10 10 ― 10 ― 1 1 ― ― 10 ― ― -S 10 10 ― 10 ― 1 1 ― 10 ― ― ― -Fe 10 10 10 10 ― ― 1 ― ― ― ― ― 缺微量元素 10 10 10 10 ― 1 ― ― ― ― ― ―配制时先取蒸馏水 900 ml，然后加入贮备液，最后配成 1000 ml，以避免产生沉淀。 培养液配好后，用稀酸、碱调节至 pH 5～6。 3．培养观察 先取大小一致的植株，用泡沫塑料包裹茎部，插入培养缸盖的孔中，每孔一株。将 培养缸移到温室中，经常注意管理并观察，用蒸馏水补充缸中失去的水分。每隔一定时 间（一周左右，随植株大小而定）更换培养溶液，并测定换出溶液的 pH。植株长大后 要通气，通气可用鱼缸打气泵。注意记录植株的生长情况、各种元素缺乏症的症状及出 现的部位。 4．元素缺乏症检索：见《植物生理学》教材。 5．指标测定 待植株症状表现明显后，将缺元素培养液换成完全培养液，留下一株继续培养，观 察植株症状是否减轻以至消失。其余植株测量根、茎的长度，植株重量，叶子数目、大 小和重量，节数和节间长度等。8实验六【实验目的】叶绿体色素的提取、分离、性质鉴定及含量测定掌握叶绿体色素的提取、分离、理化性质鉴定以及叶绿素含量的测定方法。【实验原理】叶绿体色素主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成，它们不溶于水， 而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取，提取液可用色谱分析的原理加 以分离；叶绿素分子中的Mg2+可被H+所取代而形成褐色的去镁叶绿素，后者遇Cu2+则 形成绿色稳定的铜代叶绿素，在光下不易被破坏；叶绿素a、b在红光区的最大吸收峰 分别为 663 nm和 645 nm，据Lambert-Beer定律：D＝kCL求出叶绿素a、b及总量。【器材与试剂】分光光度计，电子天平，酒精灯，剪刀，研钵，漏斗，玻棒，毛细管，试管，试 管夹，软木塞，滤纸，吸水纸，擦镜纸，滴管，四氯化碳，95%乙醇（或 80%丙酮） ， 石英砂，浓盐酸，碳酸钙粉，醋酸铜等。【实验材料】植物绿色叶片（新鲜） 。【方法与步骤】1．材料选取：取新鲜植物叶片，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉） ，混匀。 2．色素提取液制备：称取剪碎的新鲜样品 2 g，分别放入研钵中，加入少量石英砂和 碳酸钙粉及 5 mL 95%乙醇（或 80%丙酮） ，迅速研成匀浆，再分次加入乙醇（或丙 酮）15 mL 后用漏斗过滤之。 3．滤纸条准备：剪取 2×20 cm 的滤纸条并将其一端剪去两侧，中间留一长约 1.5 cm、 宽约 0.5 cm 的窄条。 4．点样：用毛细管吸取色素液点于滤纸条窄条上方（一次不可点太多） ，干后重复 2 次。 5．纸层析：在大试管中加入四氯化碳 3～5 mL 及少许无水硫酸钠。然后将滤纸条固 定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点高于液面，滤纸条边缘不 可贴近管壁） ，盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析，直到完全分离出四条色素带 为止（自上而下依次为胡萝卜素、叶黄素、叶绿素 a、叶绿素 b） 。96．Cu2+对叶绿素分子中Mg2+的取代作用：取叶绿体色素提取液 2 mL，逐滴加入浓盐 酸，直至溶液出现褐绿色（叶绿素分子遭破坏，形成去镁叶绿素） 。然后加入醋酸 铜晶体一小块，加热溶液到产生亮绿色（铜代叶绿素）为止。 7．叶绿素含量测定：将叶绿体色素提取液倒入比色杯内，以 95%乙醇（或 80%丙酮） 为空白，在波长 645 nm 和 663 nm 下测定消光度，按下列（1）～（3）式计算叶 绿素的浓度，按（4）式计算叶片中各色素的含量（用每克鲜重或干重所含叶绿体 色素的毫克数表示） 。 Chl a (mg/L)=12.7D663C2.69D645……………………………………………（1） Chl b (mg/L)=22.9D645C4.68D663……………………………………………（2） Chl T (mg/L)= Chl a+Chl b=20.2D645+8.02D663……………………………（3） 式中：D663、D645――叶绿素溶液在波长 663 nm和 645 nm时的消光度； Chl a、Chl b、Chl T――叶绿素 a、叶绿素 b 和总叶绿素的浓度（mg/L） 。（mg/g）…… ……（4）10实验七【实验目的】植物组织中蛋白质含量的测定学习蛋白质含量测定的考玛斯蓝染料结合法， 利用所学方法测定不同植物材料的蛋 白质含量。【实验原理】考马斯亮蓝 G-250（Coomassie brilliant blue，G-250）法是利用蛋白质-染料结合的 原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法。 考马斯亮蓝 G-250 存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。它和蛋白质通过范 德瓦尔键结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律。此染料与 蛋白质结合后颜色由红色形式转变成蓝色形式，最大光吸收由 465 nm 变成 595 nm，通 过测定 595 nm 处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。 蛋白质和染料结合是一个很快的过程，约 2 min 即可反应完全，呈现最大光吸收， 并可稳定 1 h， 之后， 蛋白质C染料复合物发生聚合并沉淀出来。 此法灵敏度高 （比 Lowry 法灵敏 4 倍） ，易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法。其缺点是在蛋白质含 量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。【器材与试剂】器材：分光光度计，离心机，研钵，烧杯，量瓶，移液管，试管等。 试剂：1．标准蛋白质溶液（100 ?g／mL 牛血清白蛋白） ：称取牛血清蛋白 25 mg， 加水溶解并定容至 100mL，吸取上述溶液 40mL，用蒸馏水稀释至 100 mL 即可。 2．考马斯亮蓝试剂：称取 100 mg 考马斯亮蓝 G-250，溶于 50 mL 90%乙醇中，加 入 100 mL 85%（W／V）的磷酸，再用蒸馏水定容到 1000 mL，贮于棕色瓶中。常温下 可保存一个月。【实验材料】植物材料（自备） 。【方法与步骤】1．标准曲线的绘制 取 6 支试管，按下表加入试剂，摇匀，向各管中加入 5 mL 考马斯亮蓝试剂，摇匀， 并放置 5 min 左右，以 0 号试管为空白对照，在 595 nm 下比色测定吸光度。以蛋白质 含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 2．样品测定 （1）称取鲜样 0.25～0.5 g，用 5 mL 蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000 r/min 离心1110min，上清液备用。 （2）吸取样品提取液 1.0 mL（视蛋白质含量适当稀释） ，放入试管中（每个样品重复 2 次） 加入 5 mL 考马斯亮蓝试剂， ， 摇匀， 放置 2 min 后在 595 nm 下比色， 测定吸光度， 并通过标准曲线查得蛋白质含量。 表 试 剂 绘制标准曲线的各试剂加入量 管 0 0 1.00 0 1 0.20 0.80 20 2 0.40 0.60 40 号 3 0.60 0.40 60 4 0.80 0.20 80 5 1.00 0 100标准蛋白质（mL） 蒸馏水量（mL） 蛋白质含量（?g） 3．结果计算（mg/g） 式中： V T――提取液总体积，mL。 W F――样品鲜重，g。 V S――测定时加样量，mL。 C――查标准曲线值，?g。12实验八【实验目的】植物光合强度的测定掌握改良半叶测定叶片净光合速率、总光合速率的原理与方法；比较不同植物和同 一植物不同叶龄叶片的光合强度。【实验原理】同一叶片的中脉两侧，其内部结构，生理功能基本一致。将叶片一侧遮光或一部分 取下置于暗处，另一侧留在光下进行光合作用，过一定时间后，在这叶片两侧的对应部 位取同等面积，分别烘干称重。根据照光部分干重的增量便可计算光合速率。 为了防止光合产物从叶中输出，可对双子叶植物的叶柄采用环割，对单子叶植物叶 片基部用开水烫，或用三氯乙酸（蛋白质沉淀剂）处理等方法来损伤韧皮部活细胞，而 这些处理几乎不影响水和无机盐分向叶片的输送。【器材与试剂】器材：电子分析天平，烘箱，称量皿（或铝盒） ，剪刀，刀片，金属（有机玻璃也 可）模板（或打孔器） ，热水瓶或其他可携带的加热设备，有盖搪瓷盘，夹子，纱布等。 试剂：三氯乙酸，石蜡。【实验材料】双子叶植和单子叶植物。【方法与步骤】1．选择测定样品 实验可在晴天上午 8～9 点钟开始，预先在田间选定有代表性的叶片（如叶片在植 株上的部位、叶龄、受光条件等）10 张，挂牌编号。 2．叶子基部处理： （1）双子叶植物，可用刀片将叶柄的外皮环割 0.5 cm 左右，切断韧皮部运输。 （2）单子叶植物，可用刚在开水中浸过的用纱布或棉花包裹的夹子将叶片基部烫 20 s 左右，伤害韧皮部。也可用 110～120℃的石蜡烫。 （3）5～10%的三氯乙酸进行化学环割，杀伤筛管活细胞。 为了使烫后或环割等处理的叶片不致下垂影响叶片的自然生长角度，可用锡纸、橡 皮管或塑料管包绕，使叶片保持原来的着生角度。133．剪取样品 叶基部处理完毕后，即可剪取样品，记录时间一般按编号次序分别剪下对称叶片的 一半（中脉不剪下） ，并按编号顺序将叶片夹于湿润的纱布中，将叶置于暗处。4～5 h 后（光照好、叶片大的样品，可缩短处理时间） ，再依次剪下另外半叶，同样按编号夹 于湿润纱布中。两次剪叶的次序与所化时间应尽量保持一致，使各叶片经历相同的光照 时数。 4．称重比较 用适当大小的模板和单面刀片（或打孔器） ，在每个半片叶的中部各切（打）下同 样大小的叶面积，将光暗处理的叶块分别放在两个称量皿（或铝盒）中（必要时放在 20 个称量皿中，每一样品放入一个称量皿） ，在 80～90℃下烘至恒重（约 5 h） ，在电子分 析天平上称重（或分别称重）比较，记录有关数据。 5．结果计算 光合强度（mg干物?dm-2?h-1） =(光下叶片干重增量-暗处叶片干重增量) mg/叶面积dm-2×光合时间 h由于叶片内光合产物主要为蔗糖与淀粉等碳水化合物，而 1 摩尔量的CO2可形成 1 ，故将干物质重量乘系数 1.47（WCO2／W（CH2O）= 44/30=1.47） 摩尔量的（CH2O） 便得CO2同化量，光合速率单位转化为mg CO2?dm-2?h-1。14实验九【实验目的】植物呼吸强度的测定掌握用小篮子法测定呼吸强度的方法。【实验原理】利用Ba(OH)2溶液吸收植物呼吸过程中释放的CO2， 实验结束后， 用草酸溶液滴定残 留Ba(OH)2， 从空白和样品二者消耗草酸溶液之差， 即可计算出呼吸过程中释放的CO2量。【器材与试剂】器材：电子天平，广口瓶及塞子，温度计，酸式滴定管，尼龙网制小篮等。 试剂：0.05 mol/L Ba(OH)2，0.1%麝香草酚酞酒精溶液（指示剂） ，1/44 mol/L草酸 溶液。 饱和Ba(OH)2溶液配制方法：在 500 ml,聚乙烯瓶中，称取 42 g含 8 个结晶水的氢氧 化钡[Ba(OH)2?8H20]，加人 196 g无离子水，把聚四氟乙烯磁力搅拌子放人瓶中，在电热 磁力搅拌器上加热至完全溶解，冷却后，待结晶析出，倾去母液，用 120 ml无离子水分 多次洗涤结晶物，再加入 196 g无离子水，加热搅拌至完全溶解，取出搅拌子，冷却至 室温，密封待用，也可分装在带有塑料滴管的 25ml或 50ml聚乙烯瓶中使用。【实验材料】发芽种子。【方法与步骤】1．种子称取及装瓶：称取萌发种子 15 g，装在小篮中，在广口瓶内精确加入饱和 Ba(OH)2溶液 20 ml，把小篮子挂在瓶塞上，放入广口瓶内并塞紧瓶塞。记录测定 开始时间，每过 5 min轻摇广口瓶 1 次，破坏溶液表面的BaCO3薄膜，以利CO2的 吸收。 2．滴定：30～60 min 后，小心打开瓶塞，迅速取出小篮，加入 2 滴指示剂，立即重 新盖紧瓶塞，然后拔出小橡皮塞，把滴定管插入小孔中，用 1/44 mol/L 的草酸滴 定，直至蓝绿色转变成无色为止。记录滴定碱液所耗的草酸溶液的毫升数。 3．对照滴定：另取一广口瓶测呼吸装置，在广口瓶内也放 20 ml 碱液，不放测定材 料（或放入用沸水煮死的种子） ，以此作为对照。 4．呼吸强度计算： 根据公式：呼吸强度（CO2，mg/g?h）= (V1CV0)/种子鲜重×时间 （V1为萌发的种子所耗用草酸的ml数，V0为对照所耗用草酸的ml数）15实验十【实验目的】植物组织中糖含量的测定了解用蒽酮比色法测定植物组织中糖含量的原理和方法， 比较不同植物材料的可溶 性糖含量差异。【实验原理】糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠 醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物， 在一定范围内， 颜色的深浅与糖的含量成正比， 故可用于糖的定量测定。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm，故在此波长下进行比色。【器材与试剂】器材：分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液 管（5、1、0.5 mL） ，剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。 试剂：1．80%乙醇。 2．葡萄糖标准溶液（100 ?g/mL） ：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸 馏水并定容至 100 mL，使用时再稀释 10 倍（100 ?g/mL） 。 3．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80%浓硫酸（将 98%浓硫酸稀释，把浓硫酸 缓缓加入到蒸馏水中）1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使 用 2～3 周。【实验材料】植物鲜样或干样。【方法与步骤】1．样品中可溶性糖的提取 称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5～1.0 g（或干样粉末 5～100 mg） ，放入大试管中，加 入 15mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min，取出冷却，过滤入 100 mL 容量瓶中，用蒸 馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2．标准曲线制作 取 6 支大试管，从 0～5 分别编号，按下表加入各试剂。16表蒽酮法测定可溶性糖制作标准曲线的试剂量试剂 0 1 0.2 0.8 5.0 20 0 1.0 5.0 0管 2 0.4 0.6 5.0 40号 3 0.6 0.4 5.0 60 4 0.8 0.2 5.0 80 5 1.0 0 5.0 100100 ?g/mL 葡萄糖溶液（mL） 蒸馏水（mL） 蒽酮试剂（mL） 葡萄糖量（?g）将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮 10 min，取出冷却，在 620 nm 波长下，用 空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（?g）为横坐标绘制标准曲线。 3．样品测定 取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。 4．结果计算式中：C――从标准曲线查得葡萄糖量，?g。 VT――样品提取液总体积，mL。 V1――显色时取样品液量，mL。 W――样品重（g） 。17实验十一【实验目的】过氧化物酶活性的测定了解过氧化物酶活性的测定的原理和方法， 比较不同植物材料的过氧化物酶活性的 差异。【实验原理】过氧化物酶催化过氧化氢氧化酚类的反应，产物为醌类化合物，此化合物进一步缩 合或与其他分子缩合，产生颜色较深的化合物。本实验以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚） 为过氧化物酶的底物，在此酶存在下，H2O2 可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的 4-邻甲 氧基苯酚，其反应为：红棕色的物质可用分光光度计在 470 nm 处测定其消光值，即可求出该酶的活性。【器材与试剂】器材： 分光光度计，离心机（4000r/min），移液管，天平，秒表，研钵。 试剂： 1．0.1 mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH 8.5） ：取 12.114 g 三羟甲基氨基甲烷（Tris） ，加 水稀释，用 HCl 调 pH 8.5 后定容 1000 mL。 2．0.2 mol/L 磷酸缓冲液（pH 6.0） 。 ① 贮备液A：0.2 mol/L NaH2PO4溶液（27.8g NaH2PO4?H2O配成 1000mL） （53.65g Na2HPO4?7 H2O或 71.7 g Na2HPO4?12 ② 贮备液B： mol/L Na2HPO4溶液 0.2 。 H2O配成 1000 mL）18分别取贮备液 A 87.7 mL 与贮备液 B 12.3 mL 充分混匀并稀释至 200 mL。 3．反应混合液 取 0.2 mol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）50 mL，过氧化氢 0.028 mL，愈创木酚 0.019 mL 混合。【实验材料】植物新鲜根系或块茎等。【方法与步骤】1．酶液提取 取不同水稻根系（根系表面水分吸干）1 g，剪碎置于研钵中，加 5 mL 0.1 mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH 8.5） ，研磨成匀浆，以 4000 r/min 离心 5 min，倾出上清液，必要 时残渣再用 5 mL 缓冲液提取一次，合并两次上清液，保存在冰箱（或冷处）备用。 2．光密度测定 取光径 1 cm 比色杯 2 个， 向其中之一加入上述酶液 1 mL （如酶活性过高可稀释之） ， 再加入反应混合液 3 mL，立即开启秒表记录时间；而向另一比色杯中加入 0.2 mol/L 磷 酸缓冲液（pH 6.0） ，作为零对照。用分光光度计在 470 nm 波长下测定反应 5 min 时的 光密度值。 3．结果计算 以每分钟光密度变化（以每分钟 OD 470 nm 变化 0.01 为 1 个活力单位）表示酶活 性大小，即 过氧化物酶活力 =△ OD470nmmin?mg（FW）19实验十二【实验目的】IAA 的生物鉴定掌握以小麦芽鞘切段伸长法测定 IAA 含量的原理和方法， 利用所学方法对不同植物 材料的 IAA 进行生物鉴定。【实验原理】将小麦胚芽鞘的延长部分切成段， 漂浮在含有生长素的 IAA 的溶液中， 这些切段可 以继续伸长，在一定浓度范围内，芽鞘切段的伸长与生长素浓度的对数成正比，因而可 通过测定切段伸长的多少来测定生长素的含量。【器材与试剂】器材：分析天平、25℃暗室、滤纸、旋转器、小瓷缸、大瓷缸、培养皿、具塞试管、 移液管、青霉素瓶、刀片、小镊子、尼龙网、刻度尺、半对数座标纸、饱和漂白粉溶液。 试剂： 100 ppm IAA母液 （称 10mgIAA深于少量无水酒精中， 再用水稀释至 100 ml。 此溶液在冰箱中可保存一个月） 、缓冲液（称取K2HPO4 1.794 g，柠檬酸 1.019 g，AR级 蔗糖 20 g溶于 1000 ml重蒸馏水中，pH为 5.0） 。【实验材料】小麦种子。【方法与步骤】1．种子萌发：挑选大小均匀的小麦种子（必须用前一二年的种子，因当年新收的种 子发芽不整齐） ，用饱和漂白粉溶液灭菌 30 min 后，用自来水冲洗半天，放在盛有 湿润滤纸的培养皿中，腹沟朝下，在 25℃黑暗条件下萌发 24 h。 2．幼苗培养：当第一胚根出现后，移于用尼龙网覆盖的小瓷缸中，胚根插入尼龙网 眼中，如右图 A 所示。小瓷缸放入盛水 的大资缸中，以保持湿度或在小瓷缸上 罩上烧杯保湿。 3．黑暗下培养：继续在 25℃黑暗培养，约 40 h 后， 当胚芽鞘长达 3 cm 左右时， 选 取 2.8～3.0 cm 幼苗作为生物鉴定的材 料（因这样大小的芽鞘对 IAA 最敏感） 。- 20 -4．切段及内源激素去除：切去芽鞘尖端 3 mm，取下面 5 mm 切段作试验，如右图 B 所示。将 5 mm 切段漂浮在重蒸馏水中浸洗 2～3 h，除去切段中内源激素。 5．IAA 系列标准溶液配制：配制 0.001、0.01、0.1、1.0、10 ppm 的 IAA 的系列标准 溶液（配在具塞试管中） 。①吸取 100 ppm IAA 1 ml+9 ml 缓冲液→10 ppm IAA； ②吸取 10 ppm IAA 1 ml+9 ml 缓冲液→1 ppm IAA；③吸取 1 ppm IAA 1 ml+9 ml 缓冲液→0.1 ppm IAA；④吸取 0.1 ppm IAA 1 ml+9 ml 缓冲液→0.01 ppm IAA；⑤ 吸取 0.01 ppm IAA 1 ml+9 ml 缓冲液→0.001 ppm IAA。 6．切段培养：在具塞青霉素瓶中分别吸入上述 IAA 系列标准溶液(0.001、0.01、0.1、 1.0、10 ppm IAA) 2ml，另外吸取 2 ml 缓冲液作为对照。用滤纸吸干芽鞘切段表面 水分后，在上述各瓶中分别放入 10 段，加塞，每一浓度重复 3 次。将青霉素瓶置 于旋转器上（旋转速度为 16 r/min）在 25℃暗室中旋转培养。 （上述操作均需在暗 室中绿光下进行） 7．芽鞘切段长度测定：旋转培养 20 h 后取出芽鞘切段，在滤纸上吸干，测量芽鞘切 段的长度。在半对数坐标纸上，以芽鞘切段增长%*为纵坐标，IAA 浓度为横坐标， 作出标准曲线。在生长素浓度为 0.001～1.0 ppm 范围内，切段的伸长与生长素浓 度的对数成正比，如需鉴定某一植物提取液中生长素含量，必须与标准的 IAA 作 对照。- 21 -实验十三种子活力的快速测定【实验目的】了解几种快速测定种子活力的方法，掌握红墨水染色法。【实验原理】凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力， 而死的种胚细胞原生质膜丧失 这种能力，于是染料便能进入死细胞而染色。【器材与试剂】恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，5%红墨水。【实验材料】玉米、小麦等种子。【方法与步骤】1．浸种：将待测种子在 30～35℃温水中浸种（大麦、小麦 6 h，玉米 5 h 小时左右） ， 以增强种胚的呼吸作用。 2．染色：取已吸胀的种子 200 粒，沿胚的中线切为两半，将一半置于培养皿中，加 入 5%红墨水（以淹没种子为度） ，染色 10～15 min（温度高时间可短些） 。 3．观察：染色后倒去红墨水，用水冲洗多次，至冲洗液无色为止。检查种子死活， 凡种胚不着色或着色很浅的为活种子；凡种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。 可用沸水杀死的种子作对照观察。 4．计算：种子活力（%）＝种胚不着色种子数/供试种子总数×100%- 22 -实验十四 植物体内游离脯氨酸含量的测定【实验目的】掌握测定植物体内游离脯氨酸含量的原理和方法， 了解不同逆境对植物体内游离脯 氨酸含量的影响。【实验原理】采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减小了其他氨基酸的干扰， 快速简便，而且不受样品状态（干或鲜样）限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应 生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长 520 nm 处有一最大吸收峰。 脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。【器材与试剂】器材：分光光度计；水浴锅；漏斗；20 ml 大试管数支；20 ml 具塞刻度试管 9 支； 5～10 ml 注射器或滴管。 试剂：3%磺基水杨酸水溶液；甲苯；2.5%酸性茚三酮显色液（冰乙酸和 6 mol/L 磷 酸以 3U2 混合，作为溶剂进行配制，此液在 4℃下 2～3 日有效）；脯氨酸标准溶液（称 取 25 mg 脯氨酸，蒸馏水溶解后定容至 250 ml，其浓度为 100 ?g/ml。再取此液 10 ml 用蒸馏水稀释至 100 ml，即成 10 ?g/ml 的脯氨酸标准液。【实验材料】正常条件与逆境处理下的植物叶片。【方法与步骤】1．标准曲线制作表 管 号 0 0 2 2 3 0 各试管中试剂加入量 1 0.2 1.8 2 3 2 2 0.4 1.6 2 3 4 3 0.8 1.2 2 3 8 4 1.2 0.8 2 3 12 5 1.6 0.4 2 3 16 6 2.0 0 2 3 20标准脯氨酸量(ml) H2O(ml) 冰乙酸(ml) 显色液(ml) 脯氨酸含量(μg)（1）取 7 支具塞刻度试管按上表加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热 40 min。 （2）取出冷却后向各管加入 5 ml 甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后- 23 -吸取甲苯层以“0”管为对照在波长 520 nm 下比色。 （3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。 2．样品测定 （1）脯氨酸提取：取不同处理且剪碎混匀的植物叶片 0.2～0.5 g（干样根据水分含 量酌减） ，分别置于大试管中，加入 5 ml 3%磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水 浴中浸提 10 min。 （2）显色与比色：取出试管待冷却至室温后，吸取上清液 2 ml，加 2 ml 冰乙酸和 3 ml 显色液，于沸水浴中加热 40 min，下一步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和 比色。 （3）结果计算：从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨 酸含量的百分数。C× W V a脯氨酸（?g/g FW 或 DW）=式中：C―提取液中脯氨酸浓度（?g） ，由标准曲线求得； V―提取液总体积（ml） ； a―测定时所吸取的体积（ml） ； W―样品重（g） 。- 24 -实验十五【实验目的】不良环境对植物的伤害了解不良环境对植物的影响，掌握电导仪测定植物组织外渗液的电导率的方法。【实验原理】植物在遭遇不良环境（如高温、低温等）时，蛋白质结构常受到影响。细胞膜的半 透性丧失，对物质的透性改变，盐类或有机物从细胞中渗出，进入周围环境中，通过电 导度的测定和糖的显色反应，可以测知物质的外渗程度，以此来表明植物受害的情况。【器材与试剂】器材：电导仪、电冰箱、温箱、水浴锅、烧杯、量筒、移液管、试管、镊子。 试剂：蒽酮试剂（取 1 g 经过纯化的蒽酮，溶解于 1000 mL 稀硫酸中即得。稀硫酸 溶液由比重为 1.84 的 760 mL 浓硫酸稀释至 1000 mL 而成） 。【实验材料】玉米或小麦、绿豆幼苗。【方法与步骤】1．材料准备：取玉米或小麦种子，用水吸胀，萌发后移到蒙着塑料窗纱的杯上，杯 中充以水，让根穿过网孔垂直伸入水中（也可以将种子种植于湿砂中） ，当根长至 2―3 cm 时，即可用作实验。 2．逆境处理：取出幼苗，尽量不伤害根系，用镊子除去幼苗上残留的胚乳。用蒸馏 水漂洗数次，以除去伤口上的物质，然后以 10 株为一组，共三组，分别放在盛有 20 ml 蒸馏水的小烧杯中 （务必将根系浸入蒸馏水中） 然后一杯放在 45℃温箱中， 。 一杯放在 0～1℃冰箱中，另一杯留在室温条件下。 3．电导度及糖分测定：经过一定时间后，用电导仪测量每一处理烧杯中溶液的电导 度，另外吸取溶液 0.5 ml 于试管中，加入蒽酮试剂 2 ml，摇匀于沸水浴中加热 15 min，如果溶液变绿，即表明糖类的存在，另以蒸馏水作同样测定作比较。 4．结果记录 不良环境对植物伤害的结果25附：植物生理学实验常用仪器的使用方法一、721 型分光光度计的使用方法操作方法（1）仪器尚未接通电源时，电表的指针必须位于“0”刻线上，若不是这种情况， 则可以用电表上的校正螺丝进行调节。 （2）仪器的电源开关接通（接 220V 交流电） ，打开比色槽暗箱盖，使电表指针处 于“0”位，预热 20 分钟后，再选择需用的单色光波长和相应的放大灵敏度档，用调零 电位器校正电表“0”位。 （3）将仪器的比色槽暗箱合上，比色槽座处于蒸馏水校正位置，使光电管见光， 旋转光量调节器调节光电管输出的光电讯号使电表指针正确处于 100%。 （4）按上述方式连续几次调正“0”位和电表指针 100%，仪器即可进行测定工作。 （5）放大器灵敏度档的选择是根据不同的单色光波长，光能量不一致时分别选用， 其各档的灵敏度范围是：第一档×1 倍，第二档×10 倍，第三档×20 倍。选用的原则是能 使空白档良好的用光量调节器调整于 100%处。 （6）空白档可以采用空气空白，蒸馏水空白或其他有色溶液中性吸光玻璃作陪衬。 空白调节于 100%处，能提高吸光度数以适应溶液的高含量测定。 （7）根据溶液中的被测物含量的不同可以酌情选用不同规格光程长度的比色槽， 目的是使电表读数处于 0.8 消光之内。26二、722 型光栅分光光度计的使用方法操作方法722 型光栅分光光度计能在近紫外，可见光谱区域内对样品物质作定性和定量的分 析。其色散元件为衍射光栅，波长精度比 721 好，且数字显示读数。1.数字显示器；2.吸光度调零旋钮；3.选择开关；4.吸光度调斜率电位器；5.浓度旋钮；6.光源室；7.电源 开关；8.波长手轮；9.波长刻度窗；10.式样架拉手；11.100%T 旋钮；12. 0%T 旋钮；13.灵敏度调节旋钮； 14.干燥器操作方法及注意事项：（1）将灵敏度旋钮调整“1”档（放大倍率最小） 。27（2）开启电源，指示灯亮，仪器预热 20 分钟，选择开关置于“T” （3）打开试样室盖（光门自动关闭） ，调节“0%T”旋钮，使数字显示为“00.0” 。 （4）将装有溶液的比色皿放置比色架中。 （5）旋动仪器波长手轮，把测试所需的波长调节至刻度线处。 （6）盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率&100%T&旋钮，使数字 显示为“100.0T” （如果显示不到 100%T，则可适当增加灵敏度的档数，同时应 重复“3” ，调整仪器的“00.0”。 ） （7）将被测溶液置于光路中，数字表上直接读出被测溶液的透过率（T）值。 （8）吸光度 A 的测量，参照“3”“6”调整仪器的“00.0”和“100.0” 、 ，将选择开关 置于 A 旋动吸光度调零旋钮，使得数字显示为“0.000” ，然后移入被测溶液，显 示值即为试样的吸光度 A 值。 （9）浓度 C 的测量，选择开关由 A 旋至 C，将已标定浓度的溶液移入光路，调节浓 度按钮， 使得数字显示为标定值， 将被测溶液移入光路， 即可读出相应的浓度值。 （10）仪器在使用时，应常参照本操作方法中“3”“6”进行调“00.0”和“100.0” 、 的工作。 （11）每台仪器所配套的比色皿不能与其它仪器上的比色皿单个调换。 （12）本仪器数字显示后背部，带有外接插座，可输出模拟信号，插座 1 脚为正，2 脚为负接地线。 （13）如果大幅度改变测试波长时，需等数分钟后才能正常工作。 （因波长由长波向短 波或短波向长波移动时，光能量变化急剧，光电管受光后响应较慢，需一段光响 应平衡时间。28三、阿贝折射仪的使用方法1．准备和校正 将折光仪置于光线充足的地方， 与恒温水 浴相连接，使折光仪棱镜的温度为 20℃。然 后将下棱镜（反光镜 18）打开，向后扭转约 180℃，把上棱镜（折射棱镜）和校正用的标 准玻璃用丙酮洗净烘干，将一滴 1-溴代苯滴 在标准玻璃的光滑面上，然后贴在上棱镜面 上， 用手指轻压标准玻璃的四角， 使棱镜和标 准玻璃之间辅有一层均匀的溴代苯， 转动反光 镜， 使光射在标准玻璃的光面上， 调节棱镜转 动手轮 2，使目镜望远视野分为明暗两部分， 再转动阿米西棱镜手轮 10，消除虹彩并使明 暗分界清晰，使明暗分界线对准在十字架上，若有偏差，可调节示值调节螺钉 9，使明 暗分界线恰处在十字架上， 此时由读数视野读出折光率， 在与标准玻璃上所刻数值比较， 二者相差不大于+0.0001，校正就此结束，也可用纯水校正。 在阿贝折光仪的望远目镜的金属筒上，有一个供校准仪器用的示值调节螺钉，通常 用 20℃的水校正仪器（其折光率 ND20=1.3330） 。也可用已知折光率的标准玻璃校正。 2．测定 将进光棱镜和折射棱镜用丙酮或乙醚洗净，用擦镜纸擦干或吹干注入数滴样品，立 即闭合棱镜，使样品与棱镜于 20℃保持数分钟，然后按前述方法调节，记录读数，读数 应准确至小数点后第四位（最后一位为估计数字） ，轮流从一边再从另一边将分界线对 准在十字架上，重复记录读数 3 次，读数间差不大于+0.0003，所得读数平均值即为样 品的折光率。 测定完毕后，打开棱镜，用擦镜纸轻轻擦干，不论在任何情况下，不允许用擦镜纸 以外的任何东西接触到棱镜，以免损坏它的光学平面。29四、电热恒温鼓风干燥箱（一）使用方法 1．当物品放进箱内后，将玻璃门与外 门关上，并将箱顶上的风顶活门适当旋 开。 2．接通电源，开启选温开关，档次一 般为，使用温度为 100℃以下开一档， 100℃以上开二档，150℃以上开三档， 200℃以上开四档， 达到使用温度后开一 档或二档。 3． 开启鼓风机开关， 鼓风机开始工作。 4．将温度调节器旋转钮顺时针方向转动至所需设定温度（调节刻度牌上之刻度仅作 参考）红色指示灯亮，表示加热，待红灯灭，绿灯亮，表示加热停止。待红，绿灯自动 继息，表示恒温，视风顶温度计温度高低将调节器反复调整至所需温度。 （二）注意事项和维修原理 1．此箱工电压系 220V、50HZ，使用前必须注意所用电源电压是否相符，使用时， 必须将电源插座接地极按规定有效接地。按接线指示牌所指示的相线，中线正确接线， 并将外壳上的接地，标志按规定有效接地。 2．在通电使用时，切忌用手触及箱左侧空间的电器部份或用湿布揩抹及用水冲洗。 检修时应将电源切断。 3．电源线不可缠绕在金属丝上，不可放置在高温或潮湿的地方、防止橡胶老化以致 漏电。 4．放置箱内物品切勿过挤，必须留出空气自然对流的空间、使潮湿空气能在风顶上 加速逸出。 5．应定期检查温度调节器之银触点是否发毛或不平、如有，可用细砂布将触头砂平 后再使用，并应经常用清洁布擦净，使之接触良好，（注意必须切断电源）室内温度调 节器之金属管切勿撞击以免影响灵敏度。 6．本干燥箱无防爆装置，请勿放易燃物品。 7．每次使用完后，应将电源全部切断，经常保持箱内外清洁。30五、FA1004 型电子天平的使用方法1．开机，轻按“ON”键，天平进行自检， 最后显示“0.0000 g” 。 2．置容器于称盘上，显示出容器质量。 3．轻按“TAR”清零、去皮键，随即出现 全零状态，容器质量显示值已去除，即 去皮重。 4．放置被称物于容器中，这时显示值即为 被称物的质量值。 5．累计称量：用去皮重称量法，将被称物 逐个置于称盘上，并相应逐一去皮清零， 最后移去所有被称物，则显示数的绝对 值为被称物的总质量值。 6．加物：按住 INT 键不松手，可调置 INT-0 模式，置容器于称盘上，去皮重。将称 物（液体或松散物）逐步加入容器中， 能快速得到连续读数值。当加物达到所 需称量，显示器最左边“0”熄灭，这时 显示的数值即为用户所需的称量值。当加入混合物时，可用去皮重法，对每种物质计 净重。 7．读取偏差：置基准砝码（或样品）于称盘上，去皮重，然后取下基准码，显示其质 量负值。再置称物于称盘上，视称物比基准砝码重或轻，相应显示正或负偏差值。 8．下称：拧松底部下盖板的螺丝，露出挂钩，将天平置于开孔的工作台上，调正水平， 并对天平进行校准工作，就可用挂钩称量挂物了。 天平的维护与保养： 天平必须小心使用。称盘与外壳须经常用软布和牙膏轻轻擦洗。切不可用强溶介剂 擦洗。31六、TGL-16G 高速台式离心机使用说明（一）操作程序 1． 使用前必须先检查面板上的各旋钮是否 在规定的位置上（即电源在关的位置 上，电位器及定时器在零的位置上） 。 2． 每支试管中放置等量的样品， 然后对称 放入转头内， 以免由于重量不均， 放置 不对称， 而使整机在运行过程中产生震 动。 3． 试管放入后拧紧螺帽， 盖好有机玻璃盖， 接通电源，打开电源开关，指示灯亮。 4． 使用 12×1.5 mL 转头时， 将选择开关打 向“1”位置，使用 10×5 mL 转头时， 将选择开关打向“2”位置 5．用定时旋钮选择所需时间。然后将调速旋钮调至所需的转速。转速表将显示转子的 实际转速。 6．时间到后，必须先将调速旋钮旋至零位，待停机后方可取出试管进行分析。 （二）注意事项 1．仪器使用前请详阅此说明书，以免误操作。 2．将仪器安放在坚固平整的台面上，以免运转时产生不必要的麻烦。 3．有机玻璃盖上面不能堆物，以免压坏或出现高低不平，影响仪器的使用效果。 4．仪器在高速旋转时切不随意打开有机玻璃盖门。 5．电源线的插头，一端插入仪器背面的插座内，另一端与外电网插座连接。 注：仪器不用时，请将与外电网相连的一端卸下。 6．仪器在操作时必须遵守操作程序中第 5 条的规定，否则会使电机烧坏，无法使用。 7．使用前必须经常检查离心管是否有裂纹，老化等现象，如有应及时更换。 8．使用完毕，将转头和仪器擦干净，以防试液玷污而产生腐蚀。 9．如样品比重超过 1.2 g/cm3，最高转速必须按下式修正： n=nMax×1.2÷样品比重 nMax……极限转速 10．当电机碳刷长度小于 6 mm 时必须及时更换。32七、PHS-3C 型精密 pH 计的操作步骤1．开机前准备 a、电极梗旋入电极梗插座（5） ，调节电极夹到适当 位置。 b、复合电极夹在电极夹上拉下电极前端的电极套。 c、用蒸水清洗电极，清洗后用滤纸吸干。 2．开机 a、电源线插入电源插座（11） 。 b、按下电源开关（12） ，电源接通后，预热 30 min， 接着进行标定。 3．标定 仪器使用前，先要标定，一般来说， 仪器在连续使用时，每天要标定一次。 a、在测量电极插座（15）处拨去短路 插座。 b、在测量电极插座（15）处插上复合 电极。 c、把选择开关旋钮（9）调到 pH 档。 d、调节温度补偿旋钮（8） ，使旋钮白 线对准溶液温度值。 e、把斜率调节旋钮（7）顺时针旋到底（即调到 100%位置） 。 f、把清洗过的电极插入 pH=6.8 6 的缓冲溶液中。 g、 调节定位调节旋， 使仪器显示读数与该缓冲溶液当时温定下降时的 pH 值相一致 （如用混合磷酸定位温度为 100℃时，pH=6.92） 。 h、用蒸馏水清洗过的电极，再插入 pH=4.00（或 pH=9.18）的标准溶液中，调节斜 率旋钮使仪器显示读数与该缓冲溶液中当时温度下的 pH 值一致。 i、重复（f）～（h）直至不用再调节定位或斜率两调节旋钮为止。 j、仪器完成标定。 4．测量 pH 值 经标定过的仪器，即可用来测定被测溶液，被测溶液与标定溶液温度相同与否，测 量步骤也有所不同。 （1）被测溶液与定位溶液温度相同时，测量步骤如下： a、用馏水洗电极头部，用被测溶液清洗一次。 b、把电极浸入被测溶液中，用玻璃棒搅拌溶液，使溶液均匀，在显示屏上读出溶 液的 PH 值。 （2）被测溶液和定位溶液温度不相同时，测量步骤如下： a、电极头部，用被测溶液清洗一次。 b、用温度计测出被测溶液的温度值。 c、调节&温度&调节旋钮（8） ，使白线对准补测溶液的温度值。 d、 把电极插入被测溶液内， 用玻璃棒搅拌溶液， 使溶液均匀后读出该溶液的 pH 值。33八、酶联免疫检测仪的使用为保证测量数据的准确可靠， 开机后应预 热 15 min 以上。 1．波长设定 在开机或复位状态下，按屏幕提示操作即 可。 波长一经设定好， 则全部功能均为在该波 长下的操作。 显示波长应与仪器上安装的滤光 片波长相一致。 2．手动测量 该功能只测样品的吸光度值，按一次测量 键显示一个 OD 值，不打印，用户可人工记录。 3．调零操作 在任一项目正式测量之前，将空白对照孔置于锥体下，按调零键进行调零操作，否 则无法正常测量。反复调零时，调零值以最后一次的调零操作为准。测量过程中，亦可 进行调零操作，且不影响正常的测量进程。 4．OD 值监测 这是一项辅助操作，在某些测量中，操作者想事先了解一下吸光度值的大致范围， 这时可按 0 号键，则在末行显示出“监测 OD=*.***”字样，它亦不影响正常的测量进程。 5．走纸 在复位或测量状态下，按一次走纸键，即可使打印纸空走三点行，用于安装打印纸 或察看测量数据。 6．打印机型及日期 在开机或复位状态下，按回车键即可。 7．功能设定 在开机或复位状态下，按换屏键，则显示出功能 1 至功能 8 的名称，再按换屏键则 显示出功能 9 至功能 13 的名称，继续按换屏键，出现功能 14 至功能 17 的名称，再按 换屏键又回复至初始状态下的显示内容。需选择某项功能时，当该功能名称出现在屏幕 上，按下相应的功能号即可。34分子生物学实验指导李 岩贵州省农业生物工程重点实验室 2006 年实验一1、实验原理农杆菌介导的烟草遗传转化根癌农杆菌携带的 Ti 质粒 T－DNA 区片断能在诱导物的作用下可以进入植物细胞， 整合到植物核基因组中。由于植物细胞的全能性，在无性繁殖的过程中，外源的基因片 断（T-DNA 片断）一般随着植物细胞的增值而在每个细胞的核基因组中保留，最终可以 得到完整的转基因植株。2、实验材料植物材料 烟 草 Nicotiana tabacum cv.xanthin 叶片农杆菌 根癌农杆菌 EHA105 培养基 共培培养基：MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA +3%sucrose+0.7% agar pH5.80筛选培养基：MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+ 3% sucrose + 0.7% agar+ 100mg/L Temetin+100mg/L Km pH5.80生根培养基：MS + sucrose 2%+0.75% agar+100mg/L Temetin+100mg/L Km YEP 培养基：10g/L peptone，10g/L Yeast Extract 及 5g/L NaCl。 pH:7.20实验仪器：超净工作台 摇床 离心机3、实验步骤烟草叶片材料的准备 取无菌烟草叶片，切成约 1cm*1cm 见方的叶盘 农杆菌的培养及活化 (1) 用接种针蘸取-80℃冻存的农杆菌在 YEP（20mg/L rif，50mg/L km，1.5% agar） 固体培养基上划平板，28℃恒温培养 24h 左右，直到长出合适大小的菌斑。 (2)用牙签挑取农杆菌单菌落放入 5ml YEP（20mg/L rif，50mg/L km）培养基中， 200rpm 28℃震荡培养 24 小时.1(3)于 5ml菌液中取 500-1000ul加入到 50ml YEP培养基中，200rpm 28℃震荡培养， 直到OD600值达到 0.4-0.7。将菌液转移到 50ml离心管中，6000rpm，4℃离心 10 min，收 集菌体。 遗传转化 (1) 用MS重悬液重悬离心收集的农杆菌，调节OD600为 0.3～0.4。 (2) 将烟草叶片放入重悬菌液中，浸泡 6min。 (3) 将侵染过的烟草叶片，用滤纸蘸干，紧密排列于共培养基中；25-26℃黑暗条 件下共培养 48-72h。 (4) 将共培养 2-3 天的烟草叶片，转接于筛选培养基中。 (5) 10d 继代一次，4 周后即有愈伤组织的形成和芽的分化。 (6) 待筛选后的绿芽长到 2cm 高左右时，切下绿芽转入生根培养基。4、实验结果分析：1．筛选 4 d 后，观察材料的污染情况。 （各组全部没有污染） 2．筛选 21 d 后，观察材料的愈伤诱导及芽诱导情况，并统计出芽率。 出芽率=接种外植体数/诱导出芽外植体数 共分 4 组，1 组出芽率=48/65*100% 2 组出芽率=52/71*100% 3 组出芽率=43/61*100% 4 组出芽率=46/66*100% 留出位置附照片5、注意事项：1. 留出一部分叶盘做对照，暗处共培养 2d。 2. 叶盘要放平，使其边缘与培养基充分接触，保证未转化的细胞处于选择压力下。 3. 爱护实验室仪器以及药品，实验时不要大声喧哗，保持安静。2实验二转基因植物表型观察及 GUS （β-葡萄糖醛酸糖苷酶）表 达活性分析1、实验原理ipt 基因是农杆菌 Ti 质粒上的一段序列， 编码异戊烯基转移酶。 该基因编码的酶具 有异戊烯基转移酶活性。本实验所用实验材料为，遗传转化 CaMV35S 启动子驱动 ipt 基 因在转化组织中的表达，的转基因矮牵牛植株。由于 ipt 基因的组成型过量表达，转基 因植株表现为细胞分裂素的含量增加，叶片衰老延迟，同时植株的生长发育形态也发生 不正常变化，如叶片变小，叶型变圆，顶端优势丧失，不能形成根或形成的根不能伸长 等。 GUS 表达活性分析是常用的检测转基因植物的方法之一。GUS 基因是个普遍应用的 报告基因，有很多方法检测 GUS 的活性，包括组织化学法、色谱法、荧光法等。 植物切片 GUS 组织化学定位分析是分辨组织的不同细胞个体和不同的细胞类型基因 （GUS）表达差异的一种有效方法，在植物遗传转化中应用较多。首先是采取实验材料、 组织切片，加入 GUS 酶的底物 X-GLUC（5-溴-4 氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） 。在酶活性 部位产生蓝色沉淀，即可观察定位。 有很多因素干扰分析，如溶液中不能有氧化催化物（铁氰化钾/铁氰化物） 、过氧化 物酶等存在2、实验材料1、 植物材料 转基因矮牵牛叶片（本实验室提供） 2、 试剂1)10×Buffer (10ml ) 1M Nacl K3Fe(CN)6 Tris (pH7.5) 10ml 290mg 66mg2)染液(10ml) 10×Buffer Methanol(甲醇) X-Gluc31ml 2ml 5mgWater7ml3、 实验仪器针管、37℃温箱4、实验步骤1、将转基因矮牵牛叶片放入针管中，用力抽针空两次． 2、将叶片放入 1.5ml 离心管，加入 GUS 染液 10?l，37℃培养箱放置过夜． 3、倒掉染液，依次加入各 1ml20％、50％、70％乙醇清洗一次，次日换新的 70％乙 醇重新洗一次。5、实验结果分析：1、转 ipt 基因矮牵牛植株表型观察。 （转 ipt 基因植株的形态学描述，非转基因植株与对照植株进行形态学的比较。 ） 如叶片变小，叶型变圆，叶柄变短，顶端优势丧失，不能形成根或形成的根不能伸长等。 见下图，左为转 ipt 基因植株，右为非转基因对照植株图中左为转 ipt 基因矮牵牛植株，右为非转基因对照植株 2、转 ipt 基因矮牵牛植株的 GUS 染色分析（附每组的染色照片）6、注意事项1. 应同时对未转化的植株作为对照，以尽可能消除本底的影响。 2. 加入染液后，保证样品全部侵入溶液中，颠倒混合数次，盖好盖子防止挥发。 3. 爱护实验室仪器和药品，实验时不要大声喧哗，保持安静。4实验三 λ-DNA 的酶切及 DNA 琼脂糖凝胶电泳1、实验原理：限制性内切酶 (restriction endonuclease， RE) 是由细菌自己产生的能识别双 链 DNA 分子中的特定碱基顺序， 并以内切方式水解核酸中的磷酸二酯键的核酸水解酶。 它可分为三种类型：I、II、III 型，II 型酶就是通常所指的 RE ，能识别双链 DNA 的 特异顺序，并在这个顺序内进行切割。它是基因工程中剪切 DNA 分子的常用工具酶， 被誉为分子生物学家的手术刀。 实验可选用 HindⅢ/ Eco RⅠ对 λ DNA 进行酶切，可产生分子量分别为 560bp， 830bp，940bp，1300bp，1500bp，等 DNA 片段。2、实验材料λ-DNA 限制性内切酶, 10×酶切缓冲液,ddH2O3、试验试剂限制性内切酶 HindⅢ/ Eco RⅠ及其缓冲液， 1 × TAE 为配制琼脂糖凝胶及其电泳 的应用缓冲液。溴化乙锭 (EB，1 mg/ml)存贮于棕色试剂瓶中。4、 实验仪器37℃水浴锅、电泳槽，0.5～10μl 移液枪，紫外线分光光度计5、实验步骤：在 Eppendorf 管中建立如下酶切反应体系： 无菌重蒸水 10×Buffer λ－DNA BamHI EcoRI 总体积 9.5 ?l 1.5 ?l 2?l 1 ?l 1 ?l 15 ?l1、将上列试剂加至 0.5ml EP 管中，加盖，混匀后稍离心， 37 ℃水浴反应 1 h 。 2、制备琼脂糖凝胶 按照被分离 DNA 的大小，决定凝胶中琼脂糖的百分含量 3、称取 0.8g 琼脂糖倒入三角瓶中，加入 1 × TAE 缓冲液 100ml ，置微波炉或 水浴加热至完全熔化，取出摇匀，稍冷却后加 50 μ l EB 染色液，摇匀。 4、灌胶 (1) 取洁净的电泳内槽 ( 又称托盘 ) ， 用橡皮膏或透明胶带将内槽的两端边缘封 好 ( 一定要封严，不能留缝隙 ) 。 (2) 将内槽放置于水平台面，并插好所需齿数和厚度的样品梳子。5(3) 将冷却至 60 ℃左右的琼脂糖凝胶液，缓慢倒入内槽，直至所需厚度，注意不 要形成气泡，特别是梳子下，如有气泡可用牙签挑破。 (4) 待胶凝固后，小心取出梳子，撕去橡皮膏或透明胶带，将带凝胶的内槽放入电 泳槽中，注意凝胶点样端要靠近负极。 (5) 加入 1 × TAE 缓冲液至电泳槽，缓冲液刚没过凝胶表面即可。 5、加样 剪取适当大小的透明胶带 ，取 6 ×上样缓冲液 1 μ l 点于胶带上数点。 取 5 μ l 酶切后的样品， 0.5 ～ 1 μ g 未酶切 λ-DNA ，λ-DNA 分子量标准分别 与上样缓冲液混匀。将其分别加入凝胶的点样孔 ( 记录点样顺序及点样量 ) 。 6、 电泳 接通电源槽与电泳仪的电源(检查正负极， 片段是从负极向正极移动 )。 DNA DNA 的迁移率与电压成正比，电压不超过 5V/cm 凝胶长度。当溴酚蓝染料移动至凝胶前 沿 1～2cm 处，切断电源，停止电泳。6、实验结果分析：1、结果观察：取出内槽，在紫外分析仪的玻璃平板上小心推出凝胶，通过防护屏 观察紫外灯透射的结果，λ-DNA 存在处应显出紫色荧光条带。 2、分析 DNA 酶切片断。 （附，λDNA 酶切产物琼脂糖凝胶电泳照片，并标明每组 PCR 泳道 1-22 组） λ－DNA 酶切产物可作为 MARKER（DNA 标样） ，用于目的 DNA 片段分子量的标定。7、注意事项 1.实验操作，需带手套。 2.实验中所用的各种酶须在取用过后，迅速放回冰上。 3.电泳过程中，避免皮肤直接接触溴乙锭。6实验四1、实验原理：CTAB 法制备植物基因组 DNA基因组 DNA 存在于细胞核中，先将新鲜的植物叶片在液氮中研磨，破碎其组织、 细胞，使 DNA 释放出来。然后加入 CTAB 提取缓冲液，将 DNA 充分溶解于提取缓冲 液中。 再通过苯酚、 氯仿-异戊醇等有机溶剂抽提去除蛋白质， 最终通过乙醇沉淀将 DNA 析出，溶解于 TE 缓冲液中。2、实验材料：1、材料 烟草幼嫩叶片 2、试剂 CTAB 提取缓冲液：1.5% CTAB ，100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl 氯仿/异戊醇(24:1) TE 缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、巯基乙醇、AcNa(pH 5.2 3mol/L)3、实验仪器移液枪，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵， 1.5ml 离心管4、实验步骤：1. 在 1.5ml 离心管中加入 0.7ml 60℃水浴预热的提取缓冲液 CTAB。 2. 取 0.4g 烟草叶片剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧 烈摇动混匀,加入 1.6?l 巯基乙醇, 60℃水浴保温 40 分钟(时间长,DNA 产量高), 每 5 分钟 摇动一次。 3. 加入 0.3ml 饱和酚,混匀,室温下放置 2 分钟。 4. 加入 0.3ml 氯仿/戊醇（24：1）溶液, 颠倒充分混匀，室温下静置 2min, 使水相 和有机相分层。 5. 室温下 10000rpm 离心 5 分钟。 6. 仔细移取上清液至另一 1.5ml 离心管,加入等体积氯仿混匀放置 2 分钟。室温下 10000rpm 离心 5 分钟。 7. 取上清液到 1.5ml 离心管中，加入 1/10 体积 AcNa，加 2 倍体积无水乙醇（－207℃预冷） ，在?20℃下，冷冻 1 小时。室温下 10000rpm 离心 5 分钟,用抽干机抽干。 9．加入 50ul TE 溶液溶解沉淀储存。5、实验结果检测：1．称取 0.8g 琼脂糖倒入三角瓶中，加入 1 × TAE 缓冲液 100ml ，置微波炉或水 浴加热至完全熔化，取出摇匀，稍冷却后加 1 ?l EB 染色液，摇匀。 2、灌胶 (1) 取洁净的电泳内槽 ( 又称托盘 ) ，用橡皮膏或透明胶带将内槽的两端边缘封 好 ( 一定要封严，不能留缝隙 ) 。 (2) 将内槽放置于一水平台面，并插好所需齿数和厚度的样品梳子。 (3) 将冷却至 60 ℃左右的琼脂糖凝胶液，缓慢倒入内槽，直至所需厚度，注意不 要形成气泡，特别是梳子下，如有气泡可用牙签挑破。 (4) 待胶凝固后，小心取出梳子，撕去橡皮膏或透明胶带，将带凝胶的内槽放入电 泳槽中，注意凝胶点样端要靠近负极。 (5) 加入 1 × TAE 缓冲液至电泳槽，缓冲液刚没过凝胶表面即可。 3．加样 剪取适当大小的透明胶带 ，取 6 ×上样缓冲液 1 ? l 点于胶带上数点。取 5 ? l 酶切后的样品，0.5~1? g 未酶切 λ-DNA，λ-DNA 分子量标准分别与上样缓冲液混 匀。将其分别加入凝胶的点样孔 ( 记录点样顺序及点样量 ) 。 4．电泳 接通电源槽与电泳仪的电源 ( 检查正负极， DNA 片段是从负极向正极 移动 ) 。 DNA 的迁移率与电压成正比，电压不超过 5V/cm 凝胶长度。当溴酚蓝染料 移动至凝胶前沿 1～2cm 处，切断电源，停止电泳。6、实验结果分析：附电泳图并标明每组泳道。（1-11 组）（12-22 组）8实验五1、实验原理：PCR 法体外扩增 DNA双链 DNA 在多种酶的作用下可以变性解链成单链， DNA 聚合酶与启动子的参与下， 在 根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA 在高温时也可以 发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制 DNA 的变 性和复性，并设计引物做启动子，加入耐热 DNA 聚合同酶-Taq 酶、dNTP 就可以完成特 定基因的体外复制。标准的 PCR 过程分为三步：1.DNA 变性（90℃-96℃） ：双链 DNA 模 板在热作用下， 氢键断裂，形成单链 DNA。2.退火（25℃-65℃） ：系统温度降低，引物 与 DNA 模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃） ：在 Taq 酶（在 72℃左右最佳的 活性）的作用下，以 dNTP 为原料，从引物的 5′端→3′端延伸，合成与模板互补的 DNA 链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA 含量既增加一倍。PCR 结果可通过琼脂糖凝 胶电泳进行检测。2、实验材料Taq酶, 10×Buffer, dNTP, ddH2O, 引物, 质粒DNA3、 实验仪器PCR 仪, 移液器，离心机4、实验步骤：（一）在 0.5 ml 离心管中按如下体积加入各反应物： ddH2O 10×buffer dNTP（2.5mM） Mgcl2 Primer1（10 pmol/?l） Primer2（10 pmol/?l） 质粒 DNA（约 100 ng/?l） Taq 酶（5 U/?l） 总体积 11.1 ?l 2 ?l 1.6?l 1.2?l 0.8 ?l 0.8 ?l 1.0?l 0.5 ?l 20 ?l（二）充分混匀后将离心管放于 PCR 仪上,按下列程序进行反应：994℃ 94℃ 53℃ 72℃ 94℃ 55℃ 72℃ 72℃ 4℃5 min 30 s 30s 1 min 30 s 30s 1 min 8 min ∞5 个循环25 个循环5、实验结果分析：1、提取的 DNA 采用琼脂糖凝胶电泳进行检测。 （附 PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳照片，并标明每组 PCR 泳道）（1-8 组）M: (λDNA ECORI,HINDIII 酶切)MARKER（9-16 组）（17-22 组）2、对结果进行分析：10（实验所用 PCR 扩增模板为转基因烟草基因组 DNA，转基因烟草中带有 flp 基因，通过 PCR 扩增，能够得到 1270bp 的扩增条带）6、注意事项:1. 操作时要戴一次性 PE 手套 2. 所有所加试剂都要置于冰上,在冰上操作. 3. 每加一次试剂都要重新更换枪头. 4. 20?l 体系加完后瞬时离心，使壁上液滴流至离心管底部。实验六 质粒 DNA 的小量制备（碱裂解法）1、实验原理SDS 是一种阴离子表面活性剂，既可使细菌细胞裂解，又可使一些蛋白质变性，因 此用 SDS 处理细菌，会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒 DNA 以及基因组 DNA 从细胞 中同时释放出来。释放出来的 DNA 在强碱性条件下发生变性。再用酸性乙酸钾来中和， 使溶液处于中性，离心后，质粒 DNA 将在上清中，而细胞碎片一起沉淀至离心管底部。 通过这种方法即可将质粒 DNA 从细菌中提取出来。2、实验材料含带有干扰素基因质粒的大肠杆菌3、实验设备离心机、涡旋振荡器、37℃水浴锅、电泳槽4、实验试剂(1) Solution1:50mmol/L 葡 萄 糖 ， 25mmol/L Tris?Cl(pH8.0),10mmol/LEDTA(pH8.0)高温高压灭菌 15min,4℃保存 (2) Solution2:0.2mol/LNaOH,1% SDS (3) Solution3:0.2mol/L KAC 60mol/L,冰乙酸 11.5ml,ddH2O 28.5ml(pH4.8) (4) Rnase: 100mg Rnase 粉剂，溶于 10ml 10mmol/L Tris?Cl(pH7.5), 15mmol/L NaCl 缓冲液中，水浴煮沸 15min,冷却，－20℃保存。5、实验操作1、菌株准备：111．将 1.5ml 细菌培养物加入微量离心管中，用微量离心机于室温以 5000rpm 离心 5min，倒掉上清液，再加入 1.5ml 细菌培养物，离心，合并两次所得。 2．吸去培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。 2、碱裂解： 1．将细菌沉淀重悬于 150?l 的溶液Ⅰ中，剧烈震荡。须确使细菌沉淀在溶液Ⅰ中完 全分散，将两个微量离心管的管底部互相接触，在振荡器上进心振荡，可使沉淀迅速分 散。 2．加 150?l 新配制的溶液Ⅱ。盖紧管口，快速颠倒离心管数次，充分混合，切忌振 荡。 （溶液Ⅱ0.4mol/L NaOH 与 2% SDS 等体积混合，则 NaOH 终浓度为 0.2mol/L，SDS 终浓度为 1%） 。放于冰上直到溶液变粘稠、清亮，及开盖时有拉丝现象。时间不宜超过 2 分钟，否则 DNA 易降解。 。盖紧管口，颠倒离心管数次，使溶 3．加 250?l 的溶液Ⅲ（溶液Ⅲ要在冰上预冷） 液Ⅲ在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，之后将管置于冰上 10 分钟。 4．用微量离心机于室温以 13,000rpm 离心 10-15 分钟， 将上清液转移到另一离心管 中。 ，颠倒离心管数次以混合，冰箱放置（-20 5．加入 2 倍体积的无水乙醇（约 700?l） °C）20min。 6．13000rpm 离心 10-15min，弃上清液。 7．用 1ml 70%乙醇于室温洗涤 DNA 沉淀。只需浸泡静置 10 分钟，不用将 DNA 沉淀重 新悬浮。 8．去掉上清液，倒扣于吸水纸上几分钟，在空气中使沉淀干燥或真空抽干，干燥的 标志为白色沉淀变为半透明或透明。 ，使 RNA 酶终浓度为 20?g/mg， 9．用 18?l TE 溶解核酸，加 2?l RNase（100?g/ml） 振荡，37℃度保温 40 分钟至一个小时后检测。6、实验结果分析：提取的 DNA 采用琼脂糖凝胶电泳进行检测。 （附质粒电泳照片，并标明每组泳道）121-9 组10-16 组17-22 组7、注意事项溴化乙锭是强诱变剂，与其有关的操作必须带上手套。紫外线对眼睛有伤害，观察 凝胶时也应注意。13实验七1、实验原理：大肠杆菌感受态细胞的制备感受态指受体（或者宿主）最易接受外源 DNA 片段并实现其转化的一种生理状态， 它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。Ca2+可使细 胞膜通透性增加，大大促进转化的作用。细胞的感受态一般出现在对数生长期，新鲜幼 嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。2、实验材料大肠杆菌 DH5α 菌株3、实验仪器制冰机，37℃摇床，高速冷冻离心机，超净工作台4、实验步骤：1. 用牙签挑取少许宿主菌保藏液稀释划线于 LB 固体培养基上，37℃下隔夜培养。 2. 挑取单菌落接种于 30 ml LB 液体培养基中，37℃下隔夜培养。 3. 按 1%的接种量将大肠杆菌菌液接种于 30 ml LB 培养基中。 4. 在 37℃的水浴摇床中培养 1.5 小时，OD600 接近 0.5。 5. 用 1 只 1.5ml 无菌 Eppendorf 管,取上述菌液 2 次共 3ml,4℃，5000 rpm 离心 1 分钟收获菌体。 （ 悬浮 30 分钟， 4℃， 5000 rpm 6. 上述得到的菌体沉淀用 600ul的 0.1M CaCl2 冰冻） 离心 10 分钟。 8. 弃上清,将沉淀用 100ul的 0.1M 管中,备用。 CaCl2（冰冻）重新悬浮并转入无菌Eppendorf5、实验结果分析：制备好的感受态细胞，于-80℃冰箱中冻存，并应用于连接及转化。6、注意事项：1 实验中所有酶均需于冰浴溶化后再使用 2 使用离心机前，要严格保证离心物品充分平衡，以免造成离心机损伤14实验八1、实验原理：噬菌体的铺平板培养噬菌体起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。 第一次感染后合成的子代病毒颗 粒吸附和感染邻近细菌。后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培 养基上，这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。噬菌体的连续感染形成一个不断扩大的溶 菌圈。经过几个小时的培养，最终在混浊的细菌中形成一个肉眼可见的相对清亮的圆形 区。2、实验材料LB 下层平板培养基：LB 培养基：胰蛋白胨 1% , 酵母提取物 0.5% , Nacl 1%,琼脂 1.5%,pH 0.75%,pH 7.0 7.0 121℃ 121℃ 高压灭菌 20 分钟 高压灭菌 20 分钟 LB 上层平板培养基：LB 培养基：胰蛋白胨 1% , 酵母提取物 0.5% , Nacl 1%,琼脂 0.1M 的 MgSO4，噬菌体，E.coli XL1-Blue3、实验仪器及用品37℃温箱，分光光度计，超净工作台4、实验步骤1．倒 LB 下层平板。 2．将 LB 上层平板培养基溶解，分装为 3ml 试管置于 45℃水浴保温。 3． 1ul稀释成 10-6的噬菌体中加入 200ul E.coli XL1-Blue 取 （OD600=2.0） 中, 37℃ 温育 30 min，即加入 30ul 0.1M的MgSO4。 4．立即加入到卦『玫 3ml LB 半固体培养基中，混匀。 5．将上述混和物倒于 LB 下层平板上,冷却，形成上层平板 6．待凝固后,将平板倒置 37℃培养过夜。 7．观察噬菌斑形成。五、实验结果分析：经过 24 h 的生长，E.coli X-Blue 在培养基表面形成致密的一层菌体。噬菌体的连 续感染形成一个不断扩大的溶菌圈。 最终在混浊的细菌中形成多个肉眼可见的相对清亮 的圆形区，即为噬菌斑。 附各组照片15基因工程实验指导李 岩贵州省农业生物工程重点实验室 2006 年实验一1、实验原理农杆菌介导的烟草遗传转化根癌农杆菌携带的 Ti 质粒 T－DNA 区片断能在诱导物的作用下可以进入植物细胞， 整合到植物核基因组中。由于植物细胞的全能性，在无性繁殖的过程中，外源的基因片 断（T-DNA 片断）一般随着植物细胞的增值而在每个细胞的核基因组中保留，最终可以 得到完整的转基因植株。2、实验材料植物材料 烟 草 Nicotiana tabacum cv.xanthin 叶片农杆菌 根癌农杆菌 EHA105 培养基 共培培养基：MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA +3%sucrose+0.7% agar pH5.80筛选培养基：MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+ 3% sucrose + 0.7% agar+ 100mg/L Temetin+100mg/L Km pH5.80生根培养基：MS + sucrose 2%+0.75% agar+100mg/L Temetin+100mg/L Km YEP 培养基：10g/L peptone，10g/L Yeast Extract 及 5g/L NaCl。 pH:7.20 实验仪器：超净工作台 摇床 离心机3、实验步骤烟草叶片材料的准备 取无菌烟草叶片，切成约 1cm*1cm 见方的叶盘 农杆菌的培养及活化 (1) 用接种针蘸取-80℃冻存的农杆菌在 YEP（20mg/L rif，50mg/L km，1.5% agar） 固体培养基上划平板，28℃恒温培养 24h 左右，直到长出合适大小的菌斑。 (2)用牙签挑取农杆菌单菌落放入 5ml YEP（20mg/L rif，50mg/L km）培养基中， 200rpm 28℃震荡培养 24 小时. (3)于 5ml菌液中取 500-1000ul加入到 50ml YEP培养基中，200rpm 28℃震荡培养， 直到OD600值达到 0.4-0.7。将菌液转移到 50ml离心管中，6000rpm，4℃离心 10 min，收 集菌体。1遗传转化 (1) 用MS重悬液重悬离心收集的农杆菌，调节OD600为 0.3～0.4。 (2) 将烟草叶片放入重悬菌液中，浸泡 6min。 (3) 将侵染过的烟草叶片，用滤纸蘸干，紧密排列于共培养基中；25-26℃黑暗条 件下共培养 48-72h。 (4) 将共培养 2-3 天的烟草叶片，转接于筛选培养基中。 (5) 10d 继代一次，4 周后即有愈伤组织的形成和芽的分化。 (6) 待筛选后的绿芽长到 2cm 高左右时，切下绿芽转入生根培养基。4、实验结果分析：1．筛选 4 d 后，观察材料的污染情况。 （各组全部没有污染） 2．筛选 21 d 后，观察材料的愈伤诱导及芽诱导情况，并统计出芽率。 出芽率=接种外植体数/诱导出芽外植体数 共分 4 组，1 组出芽率=48/65*100% 2 组出芽率=52/71*100% 3 组出芽率=43/61*100% 4 组出芽率=46/66*100% 留出位置附照片5、注意事项：1. 留出一部分叶盘做对照，暗处共培养 2d。 2. 叶盘要放平，使其边缘与培养基充分接触，保证未转化的细胞处于选择压力下。 3. 爱护实验室仪器以及药品，实验时不要大声喧哗，保持安静。2实验二转基因植物表型观察及 GUS （β-葡萄糖醛酸糖苷酶）表 达活性分析1、实验原理ipt 基因是农杆菌 Ti 质粒上的一段序列， 编码异戊烯基转移酶。 该基因编码的酶具 有异戊烯基转移酶活性。本实验所用实验材料为，遗传转化 CaMV35S 启动子驱动 ipt 基 因在转化组织中的表达，的转基因矮牵牛植株。由于 ipt 基因的组成型过量表达，转基 因植株表现为细胞分裂素的含量增加，叶片衰老延迟，同时植株的生长发育形态也发生 不正常变化，如叶片变小，叶型变圆，顶端优势丧失，不能形成根或形成的根不能伸长 等。 GUS 表达活性分析是常用的检测转基因植物的方法之一。GUS 基因是个普遍应用的 报告基因，有很多方法检测 GUS 的活性，包括组织化学法、色谱法、荧光法等。 植物切片 GUS 组织化学定位分析是分辨组织的不同细胞个体和不同的细胞类型基因 （GUS）表达差异的一种有效方法，在植物遗传转化中应用较多。首先是采取实验材料、 加入 GUS 酶的底物 X-GLUC（5-溴-4 氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） 。在酶活性部位产生蓝 色沉淀，即可观察定位。 有很多因素干扰分析，如溶液中不能有氧化催化物（铁氰化钾/铁氰化物） 、过氧化 物酶等存在2、实验材料3、 植物材料 转基因矮牵牛叶片（本实验室提供） 4、 试剂1)10×Buffer (10ml ) 1M Nacl K3Fe(CN)6 Tris (pH7.5) 10ml 290mg 66mg2)染液(10ml) 10×Buffer Methanol(甲醇) X-Gluc Water31ml 2ml 5mg 7ml3、 实验仪器针管、37℃温箱4、实验步骤1、将转基因矮牵牛叶片放入针管中，用力抽针空两次． 2、将叶片放入 1.5ml 离心管，加入 GUS 染液 10?l，37℃培养箱放置过夜． 3、倒掉染液，依次加入各 1ml20％、50％、70％乙醇清洗一次，次日换新的 70％乙 醇重新洗一次。5、实验结果分析：1、转 ipt 基因矮牵牛植株表型观察。 （转 ipt 基因植株的形态学描述，非转基因植株与对照植株进行形态学的比较。 ） 如叶片变小，叶型变圆，叶柄变短，顶端优势丧失，不能形成根或形成的根不能伸长等。 见下图，左为转 ipt 基因植株，右为非转基因对照植株图中左为转 ipt 基因矮牵牛植株，右为非转基因对照植株 2、转 ipt 基因矮牵牛植株的 GUS 染色分析 （附每组的染色照片）6、注意事项4. 应同时对未转化的植株作为对照，以尽可能消除本底的影响。 5. 加入染液后，保证样品全部侵入溶液中，颠倒混合数次，盖好盖子防止挥发。 6. 爱护实验室仪器和药品，实验时不要大声喧哗，保持安静。4实验三 CTAB 法制备植物基因组 DNA1、实验原理：基因组 DNA 存在于细胞核中，先将新鲜的植物叶片在液氮中研磨，破碎其组织、 细胞，使 DNA 释放出来。然后加入 CTAB 提取缓冲液，将 DNA 充分溶解于提取缓冲 液中。 再通过苯酚、 氯仿-异戊醇等有机溶剂抽提去除蛋白质， 最终通过乙醇沉淀将 DNA 析出，溶解于 TE 缓冲液中。2、实验材料：1、材料 烟草幼嫩叶片 2、试剂 CTAB 提取缓冲液：1.5% CTAB ，100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl 氯仿/异戊醇(24:1) TE 缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、巯基乙醇、AcNa(pH 5.2 3mol/L)3、实验仪器移液枪，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵， 1.5ml 离心管4、实验步骤：1. 在 1.5ml 离心管中加入 0.7ml 60℃水浴预热的提取缓冲液 CTAB。 2. 取 0.4g 烟草叶片剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧 烈摇动混匀,加入 1.6?l 巯基乙醇, 60℃水浴保温 40 分钟(时间长,DNA 产量高), 每 5 分钟 摇动一次。 3. 加入 0.3ml 饱和酚,混匀,室温下放置 2 分钟。 4. 加入 0.3ml 氯仿/戊醇（24：1）溶液, 颠倒充分混匀，室温下静置 2min, 使水相 和有机相分层。 5. 室温下 10000rpm 离心 5 分钟。 6. 仔细移取上清液至另一 1.5ml 离心管,加入等体积氯仿混匀放置 2 分钟。室温下 10000rpm 离心 5 分钟。 7. 取上清液到 1.5ml 离心管中，加入 1/10 体积 AcNa，加 2 倍体积无水乙醇（－205℃预冷） ，在?20℃下，冷冻 1 小时。室温下 10000rpm 离心 5 分钟,用抽干机抽干。 9．加入 50ul TE 溶液溶解沉淀储存。5、实验结果检测：提取的 DNA 采用琼脂糖凝胶电泳进行检测。 1．称取 0.8g 琼脂糖倒入三角瓶中，加入 1 × TAE 缓冲液 100ml ，置微波炉或水 浴加热至完全熔化，取出摇匀，稍冷却后加 1 ?l EB 染色液，摇匀。 2、灌胶 (1) 取洁净的电泳内槽 ( 又称托盘 ) ，用橡皮膏或透明胶带将内槽的两端边缘封 好 ( 一定要封严，不能留缝隙 ) 。 (2) 将内槽放置于一水平台面，并插好所需齿数和厚度的样品梳子。 (3) 将冷却至 60 ℃左右的琼脂糖凝胶液，缓慢倒入内槽，直至所需厚度，注意不 要形成气泡，特别是梳子下，如有气泡可用牙签挑破。 (4) 待胶凝固后，小心取出梳子，撕去橡皮膏或透明胶带，将带凝胶的内槽放入电 泳槽中，注意凝胶点样端要靠近负极。 (5) 加入 1 × TAE 缓冲液至电泳槽，缓冲液刚没过凝胶表面即可。 3．加样 剪取适当大小的透明胶带 ，取 6 ×上样缓冲液 1 ? l 点于胶带上数点。取 5 ? l 酶切后的样品，0.5~1? g 未酶切 λ-DNA，λ-DNA 分子量标准分别与上样缓冲液混 匀。将其分别加入凝胶的点样孔 ( 记录点样顺序及点样量 ) 。 4．电泳 接通电源槽与电泳仪的电源 ( 检查正负极， DNA 片段是从负极向正极 移动 ) 。 DNA 的迁移率与电压成正比，电压不超过 5V/cm 凝胶长度。当溴酚蓝染料 移动至凝胶前沿 1～2cm 处，切断电源，停止电泳。6、实验结果分析：附电泳图并