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桥梁工程专业工程师，硕士学历，擅长桥梁设计，结构有限元分析，岩土分析计算。
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人参美容护发功效研究现状
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人参美容护发功效研究现状
关注微信公众号4被浏览1,338分享邀请回答microarrays.org/software）。伴有多聚酶链反应的反转录将总RNA接受反转录及连续PCR（光电导继电器）验证被检测的细胞中HAS2的mRNA变化情况。将4μgRNA在25μl的混合反应物中转录，混合反应物内含有Superscript Ⅱ反转录酶（2.5U,Invitrogen,Carlsbad,CA），核糖核酸酶抑制剂（1U），5mM的MgCl2，50mM的KCl，10mM的Tris-HCl，2.5μM的DT低聚合引物，1mM的dNTPS。这些混合物是在42℃下孵化60分钟，然后在85℃下变性5分钟。随后提取5μl混合物进行PCR。每次PCR需要检测50μl反应物，这些反应物包括AmpliTaq DNA 多聚合物（0.04U/ll,PerkinCElmer,Shelton,CT），50mM的Tris（PH8.3），以及0.25mg/ml的牛血清蛋白（BSA），3mM的MgCl2,0.25mM的dNTPs, 以及0.25lM的正反义引物。引物用的是Perkin-Elmer Cycler 9600循环器（(Perkin-ElmerApplied
Biosystems,Foster,CA）将HAS2向前转录成5′-TTTCTTTATGTGACTCATCTGTCTCACCGG-3′，反转录成5′-ATTGTTGGCTACCAGTTTATCCAAAGGG-3′。设定循环条件：首先95℃下变性5分钟，然后做95℃变性45秒，60℃变性45秒以及72℃变性1分钟的循环各30到35次。PCR产物在电泳之后溴化乙啶染色可见。GAPDH（甘油醛磷酸脱氢酶）并联扩大，其结果用于标准化研究。HA测量24个完好平皿中培养出了高密度的角质化细胞（HaKaT）。实验之前用不含血清的介质溶液冲洗了两次以便完全移除细胞生长时堆积的HA。等分溶液成两份，在0.5ml不含血清的介质溶液中一份加入化合物K，另外一份不加化合物K，培养24小时。在设定的时间，将等份的介质溶液滤掉，以15，000g的转速离心5分钟，最后用酶联免疫吸附实验（ELISA）分析上清液中的HA。免疫组织化学腔式载玻片上培养角质化细胞（HaKaT）。这些细胞都经过PBS硫化铅冲洗，并在固定配比的2%的多聚甲醛和0.5%的戊二醛溶液中常温放置20分钟。细胞凝固之后用0.1M的磷酸钠盐缓冲液（PH7.4）冲洗，再加入1%的BSA溶液常温阻断30分钟。用特殊探针为HA染色，这种探针是生物素酰化的HA合成蛋白（bHABP）（Seikagaku,Tokyo,Japan提供）。bHABP探针在5lg/ml
的3%BSA中溶解后加入到凝固的细胞上，在4℃下孵化过夜。冲洗之后加入亲和荧光同位素（FITC）。所成图像在荧光显微镜下分析。动物实验本实验符合实验动物伦理委员会以及太平洋公司研发部管理委员会的有关政策和条例。局部施药：用标准啮齿动物饲料和无限量水供应喂养从韩国汉城Biogenomics公司购买的30周大的hr-l白化病无毛小鼠。充分适应24±2℃和55±10%的相对湿度一周后，将200μl，1%的化合物K溶液加如介质（丙二醇比乙醇7：3）对小鼠背部局部用药两天一共两次。24小时后再给药，最后收集所有用药皮肤样本。HA的组织化学检测：用bHABP（Seikagaku）给HA染色。在PBS中用2%的甲醛和0.5%的戊二醛混合溶液凝固皮肤样本后切片。用0.3%的H2O2的甲醇溶液将切片在室温下去石蜡化30分钟，然后加入1%的BSA阻断。之后将切片放在PBS中加入5mg/ml的bHABP在4℃下孵化过夜，冲洗后再用链球生物素的过氧化物（在1/300的PBS溶液中）常温孵化30分钟。冲洗后常温下在每一边加入3,3-二氨基联苯-四氢化氯反应剂，5分钟后用水反复冲洗再用Mayer的苏木精染色。表1：经化合物K处理后的基因血清变化倍率大于2基因名称
独立基因（血清Hs.）
倍率CD47抗原
2.4β4整合素
2.9羧肽酶A1
2.5组织蛋白酶B
2.7组织蛋白酶K
- 3.1基质金属蛋白酶1
- 2.2基质金属蛋白酶10
- 4.1基质金属蛋白酶13
- 2.1基质金属蛋白酶2
2.0基质金属蛋白酶7
- 2.7蛋白酶抑制剂3（皮肤）
3.8基质金属蛋白酶12
- 2.8基质金属蛋白酶16
3.8α1型信号调节蛋白
3.6α1连环蛋白
- 2.1α8亚基整合素
2.9选择素L
-2.2硫酸软骨素蛋白聚糖5
- 2.0α1型胶原蛋白
2.0细胞外基质蛋白2
2.8硫酸乙酰肝素蛋白聚糖2
- 3.1类硫酸乙酰肝素磺基转移酶
- 3.4透明质酸合成酶2
4.8β8整合素
2.5α4微管蛋白
2.3角蛋白7
- 2.2β多肽微管蛋白
- 2.8肌动蛋白
- 2.1P160ROCK蛋白
- 2.2甲状腺激素受体剂
- 2.1角蛋白14
2.2角蛋白5
2.2周斑蛋白
2.3α1红细胞血影蛋白
2.0α1非红细胞血影蛋白
- 2.6β红细胞血影蛋白
- 2.2角蛋白15
- 3.2主要组织相容性复合物MHC
2.2MHC HLA-DOA1
-2.2MHC HLA-DRA
- 3.2MHC HLA-DRBA1
2.2MHC HLA-DRB1
4.9谷胱甘肽S转移酶A3
2.1谷胱甘肽S转移酶A4
2.1热激蛋白（mortalin-2）
2.1热激蛋白75
3.7热激蛋白HSJ2
2.1热激蛋白转录体4
2.3图像数据分析：通过ImagePro-Plus（Media Cybernetics,Silver Spring,MD）数码成像分析检测染色面的定量特征。用自带微型摄像头（Boyertown,PA）的奥林巴斯BH-2显微镜完成拍摄。从不同切面随机选取10个图像的参数，包括总面积，总染色面积，和染色度，计算出对比统计的平均值。染色度计算公式：染色亮度*（总染色面积/总面积）统计意义：用数理统计软件SPSS（SPSS,Chicago,IL）的SigmaStat处理方差分析。具有显著意义，p&0.05。实验结果化合物K反义基因的鉴定将化合物K处理的角质细胞（HaKaT）中100多种基因表达水平与介质溶液处理的对照组细胞基因进行对比，鉴定化合物K调节程度不同的基因。三重cDNA 微阵列分析表明48个转录体的基因表达有明显差异（见表一，图.2）。一些与细胞粘连以及ECM有关的基因，例如：整联蛋白、胶原，HAS2等经化合物K处理后含量都明显增加。但是，参与ECM修饰的基质金属蛋白酶基因系的基因表达基本都下降。经化合物K处理的细胞中含有谷胱甘肽的s-转移酶和热激蛋白质，这些都是应激以及防御热刺激的基因，其基因表达高于平均水平2 倍多。综上，本实验结果表明化合物K对ECM结构组织中以及防御抵抗热激的角质细胞（HaKaT）中的基因表达有显著影响。通过影响角质细胞（HaKaT）中不规则HAS2基因表达，化合物K加速HA的合成 选取HAS2作进一步功能研究。首先，用半定量RT-PCR测量HAS2的mRNA水平验证化合物K引起HAS2基因表达的变化。这种对比分析显示HAS2的mRNA很难被检测，即便在对照组中也只检测到低水平的基因表达，然而化合物K依据时间和剂量变化 使HAS2基因表达水平显著提高（图3）。然后，进行竞争性的酶联免疫吸附试验，目的是检测能使HAS2的mRNA基因表达提高的化合物K是否也能提高HA生成量。从图4可以看出，检测到经化合物K处理的细胞生成的HA的基因表达水平高出未经化合物K处理的细胞基因表达水平。未处理的细胞介质溶液中HA含量为72.6ng/ml(STD9.4)，分别用0.01,0.1,和1μM的化合物K处理的细胞介质溶液中HA水平分别达到112.8(STD4.9),142.5ng/ml(STD6.0),and238.7(STD30.9)。这些结果和在半定量RT-PCR实验中观测到的mRNA变化相吻合。HA特殊探针（bHABP）对角质细胞（HaKaT）染色显示出HA分布（图5的A和B）。化合物K增加了细胞层的HA含量。总荧光度进一步验证观察到的化合物K培养的高数值（图5的C）。结果发现HAS2的mRNA 水平与HA染色相关性显著。A细胞骨架（3，6，12，24，48小时）α1非红细胞血影蛋白 甲状腺激素受体剂P160ROCK蛋白角蛋白15角蛋白7β多肽微管蛋白α4微管蛋白肌动蛋白β红细胞血影蛋白fascin肌动蛋白角蛋白5α4微管蛋白periplakin蛋白角蛋白14 层粘蛋白加里宁，转录变体α1红细胞血影蛋白B细胞外基质和细胞粘连（3，6，12，24，48小时）α1连环蛋白类硫酸乙酰肝素磺基转移酶基质金属蛋白酶2硫酸乙酰肝素蛋白聚糖2基质金属蛋白酶1选择素L基质金属蛋白酶10透明质酸合成酶2基质金属蛋白酶12组织蛋白B基质金属蛋白酶7组织蛋白K细胞外基质蛋白2α1型胶原蛋白α1羧肽酶β4整合素β8整合素α8整合素α1型信号调节蛋白蛋白酶阻断剂3CD47抗原基质金属蛋白酶16解聚素8硫酸软骨素蛋白酶5基质金属蛋白酶13C应激热激反应（3，6，12，24，48小时）热激蛋白转录体4 热激蛋白HSJ2 谷胱甘肽S转移酶A4MHC HLA-DRB1热激蛋白（mortalin2）谷胱甘肽S转移酶A3主要组织相容性复合物MHC HLA-DOB热激蛋白75MHC HLA-DRB1Bip蛋白血清MHC HLA-DRAMHC HLA-DOA1图2. ECM 成分基因解码，参与ECM修饰的基因，以及应激反应介质的基因的聚类分析。在相同基因表达水平的基础上，这些基因亚群形成层次性聚类。每个基因的表达模式呈带状水平。根据底部的颜色刻度，用不同颜色比较在特点时间段未经化合物K处理和经过化合物K处理的角质细胞（HaKaT）中每个基因mRNA水平比例。灰色表示漏失的数据。化合物K增加HA的含量和无毛小鼠皮肤的表皮厚度用bHABP对HA染色测定化合物K是否对老化的无毛小鼠皮肤中HA含量有影响。广泛分布在表皮和真皮层的HA，经化合物K处理在无毛小鼠皮肤中的含量显著提高（图6）。在化合物K处理的鼠类皮肤里，HA含量大幅度增加集中在细胞外的乳状突起真皮层和活性表皮层（图6的A和B）。定量图像分析说明与未经处理的皮肤相比，经化合物K处理的鼠类皮肤的表皮层和真皮层中的HA含量分别增长了3倍（图6的C）。因为HA有保持水分，维持细胞内间距，和调控细胞繁殖的作用，因此在同一HA染色皮肤切片上测定表皮厚度。如图6的D所示，经过两天化合物K处理，表皮层的厚度加深。HAS2：透明质酸合成酶2GAPDH：磷酸甘油醛脱氢酶图3. 半定量RT-PCR进一步测定微列阵数据。A 表示用设定浓度化合物K处理角质细胞（HaKaT）24小时；B表示在特定时间用1μM化合物K处理角质细胞（HaKaT）。在孵化末期，分离总mRNA并转录。HAS2的cDNA和内部控制的GAPDH都扩大25到35个PCR循环。纵轴：HA含量；横轴：化合物K浓度图4. 化合物K对角质细胞（HaKaT）释放的HA含量的影响。角质细胞（HaKaT）增长达到高密度，然后用不含血清的介质将细胞生长过程中积累的HA完全洗掉。接着用设定浓度的化合物K处理24小时。在孵化末期，移除等量的媒介，在15，000g条件小离心5分钟后做酶联免疫吸附试验分析上清液中存在的HA。所有数值用3到4次独立实验的均值加减标准方差。与介质对照组相比，p&0.05。纵轴：染色度；横轴：对照组，实验组图5. 化合物K对角质细胞（HaKaT）细胞层上HA含量的作用。A是没有化合物K处理的融合性的角质细胞（HaKaT）孵化24小时，B是有1μM化合物K处理的融合性角质细胞（HaKaT）孵化24小时。孵化末期，细胞凝固，用HA特殊探针（bHABP）染色。用计算机辅助数码形态测定分析仪和ImagePro-Plus软件定量分析染色度（C）。染色度计算公式如下：染色亮度*（总染色面积/总面积）。与对照组相比，p&0.05。条状图代表25μm。实验讨论本实验利用cDNA微列阵方法探讨人参皂甙主要代谢物—化合物K在表皮角质蛋白细胞上的作用。研究对象为K处理后角质细胞（HaKaT）的中100个转录体的基因表达水平，在实验中检测到了原假设的结果，即在参与ECM结构组织和人体皮肤应激细胞中的48个基因有显著变化。HAS2 是最重要的调节基因之一，与化合物K转录反应相关。纵轴：染色度；横轴：对照组，实验组
纵轴：表皮厚度；横轴：对照组，实验组
白色：表皮；
黑色：真皮图6. 化合物K对无毛小鼠皮肤上HA含量和表皮厚度的影响。A代表用介质溶液（乙醇：丙二醇=7：3）局部处理的无毛老鼠；B代表用1%容度的化合物K局部处理的无毛老鼠。用HA特殊探针（bHABP）和Mayer的苏木精对无毛小鼠皮肤切片染色。红色代表HA的位置，蓝色复染剂（苏木精）表示细胞核。用计算机辅助数码形态测定分析仪和ImagePro-Plus软件定量分析染色度（C）和表皮厚度（D）。染色度计算公式如下：染色亮度*（总染色面积/总面积）。与对照组相比，p&0.05。条状图代表100μm。人体内的HAS2利用尿苷二磷酸（UDP）供体的糖底物形成二糖，含有D-葡萄糖醛酸（β1，3位连接），N-乙酰氨基葡萄糖（β1，4位连接），这是HA主要成分，也是皮肤中重要的细胞外基质分子。一般来说，HA具有保持水分，维持细胞内间隙的生物医学功能。推测HA在皮肤上还具有维持湿度和弹性，保护真皮结构，以及促进电解离子和养分在体内的流通的作用（21，22）。由于HA的半衰期很短只有半天的时间，HAS2半衰期更短，仅有2到4小时（22），因此在调控HA状态过程中（21）HAS2基因表达的调节起着至关重要的作用。本实验进行了半定量的RT-PCR验证化合物K是否引起HAS2基因表达的变化。结果显示，在化合物K浓度达到0.01μM时，培养的角质细胞（HaKaT）中HAS2的基因表达显著上调。化合物k处理后HAS2的mRNA含量增加取决施药时间和剂量。这项观察与cDNA微列阵分析的结构相吻合。在进行酶联免疫吸附实验（ELISA）分析和bHABP探针的免疫化学实验分析后，经化合物K处理的角质细胞（HaKaT）中HA含量显著提高，并且HAS2的mRNA基因表达一致。在此之前，皮肤中HA的含量和代谢变化（23）已经有病理生理以及药理研究。特别是，在老化的人体皮肤中发现HA含量随着年龄增加而呈直线下降变化（24-26）。HA含量随着年龄增加而下降是已被证实的导致体内老化皮肤不断变质退化的重要原因之一（24-26）。尽管系统活化降解HA或者HAS2活性下降是否导致HA含量随着年龄增加而呈直线下降还没有肯定的答案，但是雌激素、维甲酸等药剂能促进HA合成，防止老龄妇女皮肤衰竭，干燥，产生皱纹（27-30）。因此本实验在老龄无毛小鼠皮肤上局部施药化合物K，检测HA含量是否增加。与未经处理的皮肤相比bHABP的病理分析表明经化合物K处理后的无毛鼠类皮肤的表皮和真皮内HA的含量提高了3倍。与HA含量增多相一致，观测到经化合物K处理后的无毛鼠类皮肤的表皮层厚度明显增加。这些结果都证明局部施药化合物K 可以防止和缓解因老化皮肤中HA含量下降引起的皮肤变质症状。HA还参与细胞繁殖和表皮分化（31）。HA合成已被证明能够促使角质蛋白细胞繁殖，增加活性表皮的厚度。并且，最近的研究实验，利用反义HAS2基因转染而阻断HA合成，使得细胞循环延迟进入S阶段（32），这是关于HA合成促使角质蛋白细胞繁殖的一项直接证据。但是很明显HAS2基因上调以及化合物K 刺激HA合成都不是建立在生长刺激的基础上，因为在本实验设定的化合物K 浓度条件下，经化合物K 处理的角质蛋白细胞的显微评价和抗癌药物敏感实验（MTT比色法）没有数据显示细胞繁殖的迹象。高浓度的化合物K（10μM）反而会抑制角质细胞（HaKaT）繁殖。此外，实验的体内观察也证明了局部施药化合物K能增加HA含量，但是并未导致无毛小鼠皮肤的异常增生。所观察到的表皮增厚也可能是化合物K 诱导HA合成增加，水分大量堆积而形成的。综上所述，本实验证实了化合物K诱导转化人角阮细胞（HaKaT）的透明质酸合成酶HAS2基因表达以及增加无毛小鼠皮肤中的透明质酸含量。化合物K还能增加老龄无毛小鼠皮肤中HA含量。本实验结果表明局部施药化合物K 可以防止和缓解因老化的人体皮肤中HA含量下降引起的皮肤变质症状，如干燥病。尽管化合物K是否能应用在人体皮肤上还需要进一步的临床研究，但是化合物K 为治疗老年人皮肤干燥病提供了具有广阔前景的新型治疗方案。01 条评论分享收藏感谢收起写回答人参皂苷的作用有哪些
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人参大家可能都知道是什么，但是了解人参皂苷的人可能很少，它和人参不同，但是同样有治疗疾病的作用，据说它对治疗癌症方面有很大的帮助，但是因为它的提取难度大，固然价格也不会便宜，想要被广泛的使用，可能还需要很长的时间，但是相信有一天，如果提取技术能达到一定的高度，那么它的成本自然会下降，价格很会大幅度的调整，那么，人参皂苷的作用有哪些? 人参皂苷是一种固醇类化合物，三萜皂苷。主要存在于人参属药材中。人参皂苷被视为是人参中的活性成分，因而成为研究的目标。因为人参皂苷影响了多重的代谢通路，所以其效能也是复杂的，而且各种人参皂苷的单体成分是难以分离出来的。 在美国，人参制剂被列为饮食补充剂;但在欧洲，尤其是德国人则把人参当作药品。在几个欧洲国家，人参及其他草药被医生当作处方签，植物医药原理也再次在医学院中被讲授。在设定医疗性草药安全及疗效的E委员会专刊中，德国政府认可人参可作为疲劳和乏力时的补品。国内对人参总皂苷提取的比较多，但提取人参皂苷单体的较少，因为技术难度比较高，目前国内具备生产人参皂苷单体条件的企业极少，如果是购买单体产品一般建议查看该产品说明书上标注的是人参总皂苷或是单体皂苷。 人参皂苷的作用。诱导癌细胞凋亡：细胞凋亡像花开花落一样，是一种主动的生理过程。正常情况下，细胞增殖与细胞凋亡之间始终保持着有增有减的动态平衡状态，这种动态平衡又可维持细胞正常稳定的增殖。当某种因素引起细胞增殖失控和细胞凋亡受阻时，便可导致细胞异常增殖而发生癌症;增强机体免疫力：人体免疫功能失调或低下是癌症发生的主要原因之一。而癌症治疗过程中使用的化疗药物或放射治疗可进一步摧毁人体免疫功能。人参皂甙单独使用能有效调节人体免疫功能。在手术后或放、化疗期间配合使用，可有效的保护免疫器官，增强免疫功能。 提高免疫力：免疫力是自身天然的防御屏障，免疫失调，则免疫监视作用失去作用，不能清除突变的细胞，也是引发肿瘤的原因之一。人参皂苷rh2能通过多种途径调节和增强机体免疫力，对免疫系统具有保护作用;缓解毒素作用：在治疗肿瘤的过程中，发现癌症化疗的失败常与化疗药物产生一定的耐药性有关。一般的化疗药物不易进入癌细胞，癌细胞中的p-糖蛋白可以将化疗药物排出，造成癌细胞对化疗药物产生耐药性差，人参皂苷具有亲水性和亲油性两种特性，可以轻易的进入癌细胞核内杀死癌细胞。
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