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（求助）4%多聚甲醛固定一天后需要水冲才能脱水吗？
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这个帖子发布于12年零77天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
做免疫组化，用4%多聚甲醛固定一天组织后打算进行脱水，是不是要将组织块先用水冲洗几小时后才能进行乙醇剃度脱水呀？看了好几个protocol好象都有这个步骤，但问了2个周围做过的人都说没经过冲洗，到底要不要进行这步啊？
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我做的时候是用流水冲洗24h的这个是听老师说的呵呵具体怎么样，你最好再查查文章。呵呵
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如果你的组织标本固定时间很久了，比如几个礼拜以上，这时在组织内部容易行程福尔马林渣子，在切片上表现为杂质样苏木素深染物，对免疫组化、拍照都有一定的影响。所以，此时才需要用流水冲洗24h。你的标本才固定一天，则不用冲洗。如果不放心，可以先包一块组织，切片染HE染色，然后镜下观察有没有苏木素渣子就好。如有就冲洗，没有则不冲。GOOD LUCK!
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野原主任说得好！我觉着要补充一点，冲洗时间要根据组织大小来判定。组织块大要冲洗24h，组织块小冲洗2-10h即可，对于小动物组织则用完全换液方式冲洗数次，每次数分钟即可。祝实验顺利！
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豁然开朗啊，多谢3位！！！！！！！！
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我觉得我用冲洗，我做得是脑组织，心脏灌注后固定3－5小时，有的时候会固定２４小时，不用冲洗，直接修好块，放到脱水机中就可以了
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我做的是脑组织，一般固定四到六小时再直接脱水即可，不用冲洗。
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&&4%的多聚甲醛配成了0.4%的多聚甲醛固定后组织还能用吗
4%的多聚甲醛配成了0.4%的多聚甲醛固定后组织还能用吗
将多聚甲醛配错了，后来换成了4%的继续固定，但是组织迟迟没有变硬，但是也没有腐烂，组织还能用吗
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【求助】4%多聚甲醛固定组织可以保存多久
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这个帖子发布于2年零159天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
1. 导师手里有有一批标本泡在4%多聚甲醛里一年了，请问这样的组织还能用吗？主要做免疫荧光的2.我们学校平台的老师，有的说新鲜组织一般泡4%多聚甲醛24后，放75%酒精保存，有的老师说泡4%多聚甲醛24后，放30% 蔗糖里保存。请问用那种方法更好，最长可以保存多久？
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首先可以明确这批组织免疫学的实验基本不能做了，无论是免疫组化还是免疫荧光。甲醛、多聚甲醛这些固定液的固定时间是不能太久的，一般24-48小时足够了。如果固定时间超过1星期，固定液中的醛类物质会与蛋白形成共价结合，这种结合会导致无论你用什么修复方法，蛋白的抗原表位都无法暴露（也就是说你在做组化或者免疫荧光时抗原修复这一步骤没有用了）。这种组织做出来的结果，要么得不到阳性，要么各种假阳性。但是做HE或者其他不涉及抗原抗体结合的染色还是可以的。
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前面那个方法有个老师教过我。。。说是可以永久保存但是不知道能不能做免疫荧光
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丁香园助理版主
一般泡4%多聚甲醛24后，放75%酒精保存！
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同学，那泡了1个月的甲醛 组织标本是不是没办法补救了，我是新手，感觉这批标本要废了，师兄师姐做的少，因为切片真的很难做的漂亮
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天宝物华 一般泡4%多聚甲醛24后，放75%酒精保存！您好，请问多聚甲醛固定完后，放75%的酒精内保存时间可以较长，是什么原理哈，谢谢
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首先可以明确这批组织免疫学的实验基本不能做了，无论是免疫组化还是免疫荧光。甲醛、多聚甲醛这些固定液的固定时间是不能太久的，一般24-48小时足够了。如果固定时间超过1星期，固定液中的醛类物质会与蛋白形成共价结合，这种结合会导致无论你用什么修复方法，蛋白的抗原表位都无法暴露（也就是说你在做组化或者免疫荧光时抗原修复这一步骤没有用了）。这种组织做出来的结果，要么得不到阳性，要么各种假阳性。但是做HE或者其他不涉及抗原抗体结合的染色还是可以的。
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Serapy-Yang 首先可以明确这批组织免疫学的实验基本不能做了，无论是免疫组化还是免疫荧光。甲醛、多聚甲醛这些固定液的固定时间是不能太久的，一般24-48小时足够了。如果固定时间超过1星期，固定液中的醛类物质会与蛋白形成共价结合，这种结合会导致无论你用什么修复方法，蛋白的抗原表位都无法暴露（也就是说你在做组化或者免疫荧光时抗原修复这一步骤没有用了）。这种组织做出来的结果，要么得不到阳性，要么各种假阳性。但是做HE或者其他不涉及抗原抗体结合的染色还是可以的。请问，固定后放到乙醇中存放的切片还能用来做免疫荧光吗？我们实验室没人做过，马上有一大批样，肯定不能一次性做完，所以想问怎样保存组织或者组织切片才能对免疫荧光没有影响。谢谢！
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dxy_ymtdkn62 请问，固定后放到乙醇中存放的切片还能用来做免疫荧光吗？我们实验室没人做过，马上有一大批样，肯定不能一次性做完，所以想问怎样保存组织或者组织切片才能对免疫荧光没有影响。谢谢！同问
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dxy_ymtdkn62 请问，固定后放到乙醇中存放的切片还能用来做免疫荧光吗？我们实验室没人做过，马上有一大批样，肯定不能一次性做完，所以想问怎样保存组织或者组织切片才能对免疫荧光没有影响。谢谢！同问！
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dxy_ymtdkn62 请问，固定后放到乙醇中存放的切片还能用来做免疫荧光吗？我们实验室没人做过，马上有一大批样，肯定不能一次性做完，所以想问怎样保存组织或者组织切片才能对免疫荧光没有影响。谢谢！如果是冰冻标本，不能用OCT包埋后放-80℃吗？
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Serapy-Yang 首先可以明确这批组织免疫学的实验基本不能做了，无论是免疫组化还是免疫荧光。甲醛、多聚甲醛这些固定液的固定时间是不能太久的，一般24-48小时足够了。如果固定时间超过1星期，固定液中的醛类物质会与蛋白形成共价结合，这种结合会导致无论你用什么修复方法，蛋白的抗原表位都无法暴露（也就是说你在做组化或者免疫荧光时抗原修复这一步骤没有用了）。这种组织做出来的结果，要么得不到阳性，要么各种假阳性。但是做HE或者其他不涉及抗原抗体结合的染色还是可以的。请问您有什么好办法？?急需保存一批组织
拜托您帮忙解答
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医学生小周94 请问您有什么好办法？?急需保存一批组织
拜托您帮忙解答新鲜组织先用配好的甲醛（或者多聚甲醛）固定液固定24-48小时（具体时间根据你以往的组织固定经验选择），固定时间到了之后，用PBS浸洗组织，然后流水（自来水）冲洗组织过夜，最后将组织置于0.1%叠氮钠水溶液中保存即可。需要包埋的时候冲洗一下，梯度酒精脱水就行了，后面跟常规步骤一样。
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关于丁香园啥都能用多聚甲醛固定吗？
我们实验中，标本中大多数神经激素、肽类物质,以及蛋白质为水溶性，在用于研究之前，常需固定,即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能与蛋白质的氨基反应，使蛋白质凝固，因此在医药上可做检验时的组织固定剂、以及防腐剂等。而在固定剂中，最常用的是多聚甲醛。
做实验的过程中，因为排不上实验仪器、希望标本能够较长时间存放等等原因，很多实验人员习惯性都会用4％多聚甲醛预先固定标本。也有为了灭活标本里面可能存在的微生物（细菌、病毒等），起到安全保障作用；或者是做胞内染色前的准备，进行固定细胞
然而，可能很多人忽视了一点，就是如果在染色之前用多聚甲醛固定标本，细胞表面有些位点在固定后构象发生改变，使得抗体无法结合产生假阴性，也可能由于固定作用，导致其它位点产生非特异性结合（假阳性）。
因此，知道哪些抗体染色前不能预固定，十分重要。贴心的技术人员帮我们做了一系列测试，下面两张表，可以看的出来，大多数不能固定的抗体都是趋化因子受体类目的，这类抗体，大家在实验中要注意不能先固定后染色。
&是否适合固定
粒细胞. 淋巴细胞
是否适合固定
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
YTS156.7.7
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠骨髓
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
C57BL/6 小鼠脾脏
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多聚甲醛染色后固定
染色后的固定，就与抗原构象关系不大了，更多的是荧光素。以前4色以内的时候，用的荧光素都是非串联的，因此大多数影响不大，但随着各种新型串联染料的出现，多聚甲醛固定就成了问题了。
事实上，当你去搜索串联染色标记（如PE-cy7、APC-cy7等）的抗体时，会发现一些比较详细的描述里面会注明，用多聚甲醛固定过的样本，必须在4小时内检测，否则容易导致串联染料降解，若要长时间保存，还是需要洗涤后，转移到不含多聚甲醛的缓冲液中。
需要注意的是，做GFP荧光检测的同学，也需要注意一下，多聚甲醛固定也会影响GFP，多聚甲醛固定后，并非使GFP荧光淬灭，而是使GFP蛋白构象发生改变，无法产生荧光。有时候你固定后检测到的荧光可能是自发荧光，或剩余的未被改变构象的GFP发出的。
如果检测的是前述表格中容易被多聚甲醛影响的分子，请尽量不要预固定，如需长期保存样本，可以考虑冻存单个核细胞
2、 如果检测的是前述表格中不会受多聚甲醛影响的分子，可用1％多聚甲醛固定保存，但FSC、SSC和荧光强度影响较大。
如果希望在染色后保持较长时间荧光稳定，仍首选建议：避光、4度，如果仍不放心，可考虑购买商品化的适用于串联染料的专用固定剂。
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以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。关注今日：2 | 主题：243429
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HE染色流程+4%多聚甲醛配制
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HE染色各个教程不一致，有些步骤有误导之嫌，今发一贴，经验证效果不错，且较省时二甲苯中脱蜡10分钟*2次。 无水乙醇2分钟*2次。95%乙醇1分钟*2次。80%乙醇1分钟。75%乙醇1分钟。自来水冲洗2分钟。 苏木素染色液染色5分钟（可以根据染色结果和要求调整时间）。自来水中冲洗多余的染色液，约1分钟。1%盐酸乙醇分化1-2秒（以75%乙醇为溶液配制1%盐酸：37%盐酸1ml，75%乙醇99ml）自来水冲洗约30秒。此时片子呈淡蓝色，很浅，但可分辨为蓝色，镜下鉴别见核呈漂亮的蓝色。0.2%氨水返蓝1-2s（26%氨水0.2ml，自来水100ml）自来水冲洗约约30秒。 伊红染色液染色1分钟（可根据染色结果和要求调整时间）。自来水中冲洗去多余的染色液，约30秒。此时片子呈粉红色或浅红色，但不能太浅，镜下鉴别，已成型的核及浆的染色。 脱水、透明、封片：75%乙醇20s。85%乙醇30s。95%乙醇1min*2次。无水乙醇2分钟*2次。 二甲苯透明2分钟*2次。 封片。 注意：1. 片子先烤半小时不易脱片。2．苏木素染色后的分化：分化过度则细胞核染色过浅，分化不足则染色过深，以切片由深蓝变成红色或粉红色时为佳。3．乙醇脱水：低浓度乙醇有分化的作用，故时间宜短，高浓度乙醇脱水效果好，时间宜长，如果脱水不彻底则致切片发雾。4.苏木素和/或伊红染色后如果效果不好，每一步都可重新来过，浅了重染，深了洗掉，镜下满意为止，然后再进行下一步，这叫关键环节的质量控制。二
4%多聚甲醛配制40g多聚甲醛加入0.1M PBS中，热浴至65度，磁力搅拌并加热65度，同时加入1M
NaOH约2ml，测PH值7-7.4，不能用PH计，有损仪器。约2小时后变澄清，0.2um微孔滤膜加漏斗过滤，存4度或负20度(长期）备用。附: 1M
NaOH ：0.4g NaOH加入10ml超纯水0.1M PBS:
NaH2PO4o2H2O 2.964g，Na2HPO4o12H2O
29g，NaCl 0.78g加1L超纯水(所谓0.1M是0.1M磷酸根）。另有不相关的:
用于免疫组化的0.01M PBS配方为：NaH2PO4o2H2O 0.2964g，Na2HPO4o12H2O
2.9g，NaCl 8g。如果用于细胞培养，可以用这个配方：NaCl 8.00，Na2HPO.12H2O 2.90，KCl
0.2，KH2PO4 0.24。偷自3 1M HCl36%的盐酸物质的量浓度是×36%/36.5=11.64mol/L根据c1v1=c2v2v1=c2v2/c1=100×1/11.64=8.6毫升即取8.6毫升36%的盐酸加水、搅拌、定容至100毫升即可.1M NaOH40g NaOH加去超纯水1L4 大鼠多聚甲醛灌注流程麻醉（0.1ml 0.5%阿托品/只, 0.17-0.18ml 3%戊巴比妥钠//100g,自摸剂量，我的药过期了；或者10%水合氯醛，0.4ml/100g）。备新的一次性输液器，4度生理盐水及多聚甲醛。小弯钳提起胸腹部皮肤以组织剪剪除，剑突下剪开上腹壁，沿前胸壁两侧自下向上剪断肋骨直至近锁骨处（先右侧，形成气胸后肺及纵隔塌陷，再剪断左侧肋骨，如此操作不易伤到左侧心脏），大弯钳夹剑突上翻暴露心脏，左手指固定心脏，右手执钝头针自心尖进针，小心进入主动脉，以手感触到位后小弯钳夹持，上齿，固定心尖进针处，剪开右心耳，4度生理盐水灌（可少加肝素阻凝），快速，同时卵圆钳自腹部夹闭。500ml后接4度4%多聚甲醛500ml，先快后慢。灌注&=4h。取脑，泡于4%多聚甲醛中24h，以4%多聚甲醛配制30%蔗糖，继续泡72h。冰冻切片略。5
微波柠檬酸抗原修复0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠（C6H5Na3O7.2H2O）：3g柠檬酸（C6H8O7.H2O）:0.4g。据说配完PH值为6.08,不需调PH值。我有的试剂时间有点长，配完测试偏酸，需加1M NaOH 2.4ml后PH约为6.0柠檬酸,0.01M,PH=6.0,1000ml,中高火或高火,5min，解冻 20min。染片过程中不能有干片情况出现,不操作时泡在染缸内PBS中切片3um,不要超过4um染色过程中,如果玻片上加的液体中有气泡,必须用牙签挑破,否则着色不均.6贴点不相关的：6.1修改win10中的文件夹权限;
6.2 excel中去掉自动生成另一个备份文件6.1 修改这个文件权限：修改权限方法 : 右键访问文件……属性……安全……高级……所有者：system 更改C（点更改C)……高级……立即查找……在搜索结果（U）选框，点一下自己时给电脑起的名字，也就是一个小人头……确定……确定……在替换子容器和对象所有者前面打挑……应用……是……一路点确定.6.2
文件---另存为----excel工作簿----在“另存为”界面中下缘，中间处选择“工具”----常规选项----清除”生成备份文件“前面的复选框中内容----确定----保存7显微镜高倍镜照片tips用olympus BX63摄片总算照出自己还算满意的片子了，留点小细节在此：高倍镜下图片中央光线太强，调白平衡无效，照片用IPP分析不准确。解决：1 在Olympus软件主界面中，（右上角）布局--还原当前布局；（右下角）显...（全称为显微镜控制)----BX3透射块光阑----最大值（即120%） 2 调整载物台下的聚光镜高度，实时观察界面，达最适位置8 hoechst33258的配制配储存液：25mg+DDH2O 940ul, 震荡混匀溶解，20ul/支（浓度50mM)分装，-20度保存配工作液：储存液20ul+DDH2O 980ul，混匀。浓度为1mM,约532ug/ml。使用时，滴于标本上，3min后PBS漂洗, 15min*3次9 LDZX-50KBS蒸汽灭菌器加待消毒物品，注意水位，纯化水加入至高水位指示灯亮为止（总量约需8L)，设定消毒温度，123度，30min（规定是121度不少于20min)，泄压阀与安全阀关闭状态，开机。10 荧光基础知识可见光相应波长
-----紫蓝青-----绿-----570-----黄-----590----橙----620----赤----（七八九黄，六二零红。570,580,590范围内是黄色，620以上是红色，另外450-475是蓝色）Ex e
Em emission wavelength激发波能量大，波长短；发射波能量低，波长长。常用荧光染料颜色：1Alexa Fluor 488 绿色荧光Ex: 488nm, Em: 519nm （注意， Em并非488，而是Ex是488，因此，名称与其颜色无关，实际颜色向红色端偏移，因发射波长能量小，波长更长，但488仍在绿色范围内）2Cy3
1.Ex(nm)：555
2.Em(nm)：5653Mcherry 红色
587nm和610nm11 漂染步骤4度平衡2h----PBS漂洗10min*3----0.3%triton100 30min----PBS漂洗10min*3次----二抗封闭血清室温（23度）30min----勿洗，加一抗，摇床，24h----洗3次----二抗1h----洗3次----hoechst 5min----洗3次-----封片12大鼠麻醉3%戊巴比妥钠（10ml双蒸水+0.3g戊巴比妥钠）0.18ml/100g，加0.1ml阿托品（25mg/5ml). 腹腔注射。体型较小者比如200-300g，0.17ml/100g即可，体型较大者如400-500g，0.19ml/100g仍效果欠满意。注意：A动物称重一定要准确，精确到克；B起效可能有点慢，约10-15min后才达手术要求；C如仍不能达手术要求，比如上耳杆等刺激性较大的操作时，可加予乙醚辅助一下，方法如下：棉签蘸乙醚，放入50ml离心管中，离心管底部钻通，棉签尾杆自底穿出，离心管口套于鼠嘴，约1-2分钟后无挣扎即可，如果将离心管中段截除，头尾两段以胶布粘成一体，减小空间，则效果更好；D戊巴比妥钠过量动物易死亡，且其死亡多发于2小时以后，因此术后需观察动物至苏醒，注意保温，如果呼吸不好，则可多刺激避免呼吸抑制过度而死，在呼吸较弱时也可人工胸廓挤压帮助呼吸同时刺激可对抗过度抑制；E体温过低可空调升室温，但类似电热毯之类的东西 ，好像效果不好，易呼吸抑制而死（太舒服，忘记呼吸了？）10%水合氯醛麻醉普通成年大鼠，400mg/Kg，麻醉效果好，但须注意，醒后当天禁食，次日喂水及食物，否则肠梗阻易死亡。13免疫组化步骤注意：脱蜡要充分，二甲苯20min*3次，余略；PH6.0柠檬酸微波修复（1L)，高火7min，低火20min；透膜：0.3% Triton-100 10min，5%血清封闭1h，37度。14 不同PH值的PB配制（这里面个别的验算了一下，答案还可以，另外与百度词条中的一致 0.2M磷酸缓冲液磷酸缓冲液PH5.7--8.0(0.2M)甲液：NaH2PO4·2H2O：Mr=156.03，0.2mol/L溶液为31.21g/L，NaH2PO4·H2O：Mr=138.01，0.2mol/L溶液为27.6g/L。乙液：Na2HPO4·2H2O：Mr=178.05，0.2mol/L溶液为35.61g/L，Na2HPO4·7H2O：Mr=268.13，0.2mol/L溶液为53.624 g/L ，Na2HPO4·12H2O：Mr=358.22，0.2mol/L溶液为71.64g/L。磷酸缓冲液PH5.7--8.0(0.2M)PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml) PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml)5.7 93.5 6.5
6.9 45 555.8 92 8
7.0 39 615.9 90 10
7.1 33 676 87.7 12.3
7.2 28 726.1 85 15
7.3 23 776.2 81.5 18.5
7.4 19 816.3 77.5 22.5
7.5 16 846.4 73.5 26.5
7.6 13 876.5 68.5 31.5
7.7 10.5 89.56.6 62.5 37.5
7.8 8.5 91.56.7 56.5 43.5
7.9 7 936.8 51 49
8.0 5.3 94.7根据要求的PH值,取X毫升甲液与Y毫升乙液,混合均匀即得.1/15M 磷酸缓冲液磷酸缓冲液PH4.49--9.18(1/15M)PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml) PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml)4.4 90 10 6.98 644.9 4 0. 1 9.9 7.71 7 35.29 0.25 9.75 7.58 8 25.59 0.5 9.5 7.75 9 15.91 1 9 8.04 9.5 0.56.24 2 8 8.2 9.7 0.36.47 3 7 8.54 9.75 0.256.64 4 6 8.68 9.9 0.16.81 5 5 9.18 10 0乙液：一水磷酸二氢钠,1/15M溶液含9.2g/L甲液：二水磷酸氢二钠,1/15M溶液含11.864g/L根据要求的PH值,取X毫升甲液与Y毫升乙液,混合均匀即得.15
30%双氧水稀释成3%十倍稀释
比如需要3%的1000毫升，100毫升30%加900毫升水就行
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chliang2006 wenshl2005 这个……新手吧？…说别人误导口气太大。常规的实验操作，每个实验室甚至每个人的操作细节可能千差万别，但只要道理说得通，结果也不错，何来误导之说？何况，在我看来，你的HE染色还说得过去，多甲配制倒真的有误导之嫌了：当然也不能说有错，只能说不太方便。比如我问你一个问题：加NaOH是干嘛用的？老师您真说对了，我是个实验室新手，做点事很费劲，四处找protocol，屡失败，成功了就做个笔记在此，备忘，也共享。我加NaOH也是看别人这么做的，不加NaOH总不溶，磁力搅拌子工作一夜才成。现在2小时搞定。老师您有什么高招，望不吝赐教没高招。只是个人习惯不同而已。把配多甲时加NaOH的步骤放在加PBS之前，也许效果会更好。因多甲易溶于热水和Na、K的碱性溶液，先加PBS缓冲液会把碱中和掉一部分，降低加碱的作用。
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wenshl2005 编辑于
近期准备做HE染色，多谢指导。
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chliang2006 一
HE染色各个教程不一致，有些步骤有误导之嫌，今发一贴，经验证效果不错，且较省时二甲苯中脱蜡10分钟*2次。 无水乙醇2分钟*2次。95%乙醇1分钟*2次。80%乙醇1分钟。75%乙醇1分钟。自来水冲洗2分钟。 苏木素染色液染色5分钟（可以根据染色结果和要求调整时间）。自来水中冲洗多余的染色液，约1分钟。1%盐酸乙醇分化1-2秒（以75%乙醇为溶液配制1%盐酸：37%盐酸1ml，75%乙醇99ml）自来水冲洗约30秒。此时片子呈淡蓝色，很浅，但可分辨为蓝色，镜下鉴别见核呈漂亮的蓝色。0.2%氨水返蓝1-2s（26%氨水0.2ml，自来水100ml）自来水冲洗约约30秒。 伊红染色液染色1分钟（可根据染色结果和要求调整时间）。自来水中冲洗去多余的染色液，约30秒。此时片子呈粉红色或浅红色，但不能太浅，镜下鉴别，已成型的核及浆的染色。 脱水、透明、封片：75%乙醇20s。85%乙醇30s。95%乙醇1min*2次。无水乙醇2分钟*2次。 二甲苯透明2分钟*2次。 封片。 注意：1. 片子先烤半小时不易脱片。2．苏木素染色后的分化：分化过度则细胞核染色过浅，分化不足则染色过深，以切片由深蓝变成红色或粉红色时为佳。3．乙醇脱水：低浓度乙醇有分化的作用，故时间宜短，高浓度乙醇脱水效果好，时间宜长，如果脱水不彻底则致切片发雾。4.苏木素和/或伊红染色后如果效果不好，每一步都可重新来过，浅了重染，深了洗掉，镜下满意为止，然后再进行下一步，这叫关键环节的质量控制。二
4%多聚甲醛配制40g多聚甲醛加入0.1M PBS中，热浴至65度，磁力搅拌并加热65度，同时加入1M
NaOH约2ml，测PH值7-7.4，不能用PH计，有损仪器。约2小时后变澄清，0.2um微孔滤膜加漏斗过滤，存4度或负20度(长期）备用。附: 1M
NaOH ：0.4g NaOH加入10ml超纯水0.1M PBS:
NaH2PO4o2H2O 2.964g，Na2HPO4o12H2O
29g，NaCl 0.78g加1L超纯水(所谓0.1M是0.1M磷酸根）。另有不相关的:
用于免疫组化的0.01M PBS配方为：NaH2PO4o2H2O 0.2964g，Na2HPO4o12H2O
2.9g，NaCl 8g。如果用于细胞培养，可以用这个配方：NaCl 8.00，Na2HPO.12H2O 2.90，KCl
0.2，KH2PO4 0.24。偷自想问下，你说的，40g多聚甲醛加入0.1MPBS中，这个PBS是多少ml呢？
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请问苏木素和伊红需要买哪个厂家的吗？
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这个……新手吧？…说别人误导口气太大。常规的实验操作，每个实验室甚至每个人的操作细节可能千差万别，但只要道理说得通，结果也不错，何来误导之说？何况，在我看来，你的HE染色还说得过去，多甲配制倒真的有误导之嫌了：当然也不能说有错，只能说不太方便。比如我问你一个问题：加NaOH是干嘛用的？
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想问下，你说的，40g多聚甲醛加入0.1MPBS中，这个PBS是多少ml呢？笔误，40g加入1000ml为4%，改原贴，网站提示什么“敏感”改不了。
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wenshl2005 这个……新手吧？…说别人误导口气太大。常规的实验操作，每个实验室甚至每个人的操作细节可能千差万别，但只要道理说得通，结果也不错，何来误导之说？何况，在我看来，你的HE染色还说得过去，多甲配制倒真的有误导之嫌了：当然也不能说有错，只能说不太方便。比如我问你一个问题：加NaOH是干嘛用的？老师您真说对了，我是个实验室新手，做点事很费劲，四处找protocol，屡失败，成功了就做个笔记在此，备忘，也共享。我加NaOH也是看别人这么做的，不加NaOH总不溶，磁力搅拌子工作一夜才成。现在2小时搞定。老师您有什么高招，望不吝赐教
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空白式式 请问苏木素和伊红需要买哪个厂家的吗？我用的中杉金桥的
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chliang2006 空白式式 请问苏木素和伊红需要买哪个厂家的吗？我用的中杉金桥的谢谢了。
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chliang2006 wenshl2005 这个……新手吧？…说别人误导口气太大。常规的实验操作，每个实验室甚至每个人的操作细节可能千差万别，但只要道理说得通，结果也不错，何来误导之说？何况，在我看来，你的HE染色还说得过去，多甲配制倒真的有误导之嫌了：当然也不能说有错，只能说不太方便。比如我问你一个问题：加NaOH是干嘛用的？老师您真说对了，我是个实验室新手，做点事很费劲，四处找protocol，屡失败，成功了就做个笔记在此，备忘，也共享。我加NaOH也是看别人这么做的，不加NaOH总不溶，磁力搅拌子工作一夜才成。现在2小时搞定。老师您有什么高招，望不吝赐教没高招。只是个人习惯不同而已。把配多甲时加NaOH的步骤放在加PBS之前，也许效果会更好。因多甲易溶于热水和Na、K的碱性溶液，先加PBS缓冲液会把碱中和掉一部分，降低加碱的作用。
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chenxiaojiuan chliang2006 一
HE染色各个教程不一致，有些步骤有误导之嫌，今发一贴，经验证效果不错，且较省时二甲苯中脱蜡10分钟*2次。 无水乙醇2分钟*2次。95%乙醇1分钟*2次。80%乙醇1分钟。75%乙醇1分钟。自来水冲洗2分钟。 苏木素染色液染色5分钟（可以根据染色结果和要求调整时间）。自来水中冲洗多余的染色液，约1分钟。1%盐酸乙醇分化1-2秒（以75%乙醇为溶液配制1%盐酸：37%盐酸1ml，75%乙醇99ml）自来水冲洗约30秒。此时片子呈淡蓝色，很浅，但可分辨为蓝色，镜下鉴别见核呈漂亮的蓝色。0.2%氨水返蓝1-2s（26%氨水0.2ml，自来水100ml）自来水冲洗约约30秒。 伊红染色液染色1分钟（可根据染色结果和要求调整时间）。自来水中冲洗去多余的染色液，约30秒。此时片子呈粉红色或浅红色，但不能太浅，镜下鉴别，已成型的核及浆的染色。 脱水、透明、封片：75%乙醇20s。85%乙醇30s。95%乙醇1min*2次。无水乙醇2分钟*2次。 二甲苯透明2分钟*2次。 封片。 注意：1. 片子先烤半小时不易脱片。2．苏木素染色后的分化：分化过度则细胞核染色过浅，分化不足则染色过深，以切片由深蓝变成红色或粉红色时为佳。3．乙醇脱水：低浓度乙醇有分化的作用，故时间宜短，高浓度乙醇脱水效果好，时间宜长，如果脱水不彻底则致切片发雾。4.苏木素和/或伊红染色后如果效果不好，每一步都可重新来过，浅了重染，深了洗掉，镜下满意为止，然后再进行下一步，这叫关键环节的质量控制。二
4%多聚甲醛配制40g多聚甲醛加入0.1M PBS中，热浴至65度，磁力搅拌并加热65度，同时加入1M
NaOH约2ml，测PH值7-7.4，不能用PH计，有损仪器。约2小时后变澄清，0.2um微孔滤膜加漏斗过滤，存4度或负20度(长期）备用。附: 1M
NaOH ：0.4g NaOH加入10ml超纯水0.1M PBS:
NaH2PO4o2H2O 2.964g，Na2HPO4o12H2O
29g，NaCl 0.78g加1L超纯水(所谓0.1M是0.1M磷酸根）。另有不相关的:
用于免疫组化的0.01M PBS配方为：NaH2PO4o2H2O 0.2964g，Na2HPO4o12H2O
2.9g，NaCl 8g。如果用于细胞培养，可以用这个配方：NaCl 8.00，Na2HPO.12H2O 2.90，KCl
0.2，KH2PO4 0.24。偷自想问下，你说的，40g多聚甲醛加入0.1MPBS中，这个PBS是多少ml呢？这是一个浓度单位。物质的量浓度，不是体积啊
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这种东西不能看时间，凭经验，你说组织不同，组织大小不同，用一套方案处理合适吗
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0.1M的PBS配方怎么感觉怪怪的
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