我们做阴离子聚丙烯酰胺胺凝胶电泳经常出现一条粉红色条带，跑得比溴酚蓝还快？请问是什么杂蛋白？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-09-19 06:44 标签： 聚丙烯凝胶电泳
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【求助】溴酚蓝在跑电泳时会一直再样品前面吗
大家好，最近我跑了一个聚丙烯酰胺凝胶电泳，样品是分子量大约为四五千的多糖，用溴酚蓝上样，发现很多条带都跑到溴酚蓝下面去了，溴酚蓝作用主要是指示电泳跑到什么位置，但这样一来溴酚蓝就起不到作用了，所以想请教一下各位高手这种现象是可以有的吗，另外有没有其他对我的样品来说真正起到指示电泳位置的染色剂呢？谢谢!
期待高手解答 这个要看你的样品大小比溴酚蓝的分子大还是小了 溴酚蓝分子量是670，我的样品有在600左右，大部分分子量大于600，但我跑的图很多条条带在溴酚蓝以下，觉得这个有点奇怪 ，没虫子解释下吗 一看分子量，二看电荷数，虽然你的样品分子量比溴酚蓝略大，但是如果样品电荷数多的话，一样跑的比溴酚蓝快的。所以溴酚蓝最好还是用于指示具有一定分子量的蛋白质的SDS-PAGE为佳。 : Originally posted by platto at
一看分子量，二看电荷数，虽然你的样品分子量比溴酚蓝略大，但是如果样品电荷数多的话，一样跑的比溴酚蓝快的。所以溴酚蓝最好还是用于指示具有一定分子量的蛋白质的SDS-PAGE为佳。 请问，我最近跑的时候溴酚蓝一直跑的比蛋白慢，过去没问题，最近出现的，换了电极液、溴酚蓝，都没变，电压和过去一样，难道是最近样品都小于670？可我用的是一样的样。是什么原因呢？谢谢 跑蛋白质时用SDS了没有？ : Originally posted by platto at
跑蛋白质时用SDS了没有？ 用 我最近也遇到相同的问题啦，大侠，你的问题解决了没有？什么原因啊？琼脂糖凝胶电泳_百度文库
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琼脂糖凝胶电泳
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4%PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）250bp处条带出现扭曲，求助！
如图，我用的是4%非变性聚丙烯酰胺凝胶，跑的是SRAP-PCR程序，两张图的marker都是DL2000，两张图里DLbp条带均已跑出，故扭曲/压缩处对应的分子量是250bp。
请问这种统一而有规律的条带扭曲是怎么形成的，如何避免？
是不是胶有问题啊 跑时溴酚蓝成一条很浓的直线，没有分开。
电压低点，还有把你用的溴酚蓝换啦，重新配。 有低电压慢慢跑，底部的溴酚蓝是你自己切下去的吧，要等它自己从胶中跑出来
胶的底部气泡是否排出干净，这个很重要 1、请更换你的缓冲液，缓冲液浓度不均匀会引起电场不稳，很容易导致胶边缘的核酸出现变形
2、核酸的定性要做好，时间做足··
3、灌胶应一次成型，避免漏胶跟二次补胶。
4、TEMED别过量 1，调低电泳电压。
2，电泳前确保胶下部没有气泡。
3，夹夹子时两面过紧或过松也容易出现类似现象。
此外,楼主PCR条件还需要调整，你的整个泳道几乎都是SMEAR. 溴酚蓝可能已经过期了，重新配一下看看。 : Originally posted by 霹雳光 at
是不是胶有问题啊 没有问题，上面就跑的很正常。 : Originally posted by wu_shiyong at
跑时溴酚蓝成一条很浓的直线，没有分开。
电压低点，还有把你用的溴酚蓝换啦，重新配。 嗯，我用的是自配的loading buffer（0.25%溴酚兰，40%蔗糖），上样前每份样品添加1/2体积的loading buffer，跑电泳时溴酚兰的确是呈一条直线（有些粗而淡），但这不是很正常吗？
溴酚兰是这周刚配的，但是没过滤。 : Originally posted by wq123good at
有低电压慢慢跑，底部的溴酚蓝是你自己切下去的吧，要等它自己从胶中跑出来
胶的底部气泡是否排出干净，这个很重要 溴酚兰是跑出的。玻璃板下面的缺失部分是用来封胶（封槽子）的琼脂糖，显影前我就剥掉了。
胶的底部无气泡，由图可见。 : Originally posted by q at
1、请更换你的缓冲液，缓冲液浓度不均匀会引起电场不稳，很容易导致胶边缘的核酸出现变形
2、核酸的定性要做好，时间做足··
3、灌胶应一次成型，避免漏胶跟二次补胶。
4、TEMED别过量 嗯，缓冲液的确有过好几次了，是个问题。但是电场不稳不会导致如此有规律的扭曲（全部在250bp左右，基本呈一条直线）。
我这个是非变性PAGE，样本不用变性。
这点没问题，是一次成型的。
TEMED用量每50ml胶液加50微，应该没过量，我灌完胶后管中所剩胶液还是呈水流状。 : Originally posted by chenguestc at
1，调低电泳电压。
2，电泳前确保胶下部没有气泡。
3，夹夹子时两面过紧或过松也容易出现类似现象。
此外,楼主PCR条件还需要调整，你的整个泳道几乎都是SMEAR. 10cm长的胶，用DYY-6C型电泳仪，加120V电压（相当于6V/cm），应该不算高吧？
下部无气泡，玻璃板下面的缺失部分是用来封胶（封槽子）的琼脂糖，显影前我就剥掉了。
槽子受力不均可以部分解释第一张图，但是第二张图没这个问题，另外再提一下，我关注的问题是：为什么扭曲会如此有规律地出现在在250bp左右，且基本呈一条直线。这一点受力不均可解释不了。 : Originally posted by mlanqiang at
溴酚蓝可能已经过期了，重新配一下看看。 溴酚兰这周刚配，但没过滤。
另外我溴酚兰的添加量是样本的1/2体积。 最近试了下6%的非变性胶（1L用的是4%），发现扭曲线（即在该直线上所有泳道统一发生扭曲和压缩，由图可见）转移到了100bp左右。
现在我也开始怀疑这个现象是溴酚兰（其中的蔗糖）导致的，因为4%的胶中扭曲出现在250bp，而6%的胶中出现在100bp，跟溴酚兰的浓胶中的等效片段小于稀胶这个现象相一致。
不知各位还有什么高见，这个问题又该如何解决？
6%非变性胶，SRAP 你啥都不要怀疑，是你的电压出了问题，你下面封胶时没有封好！导致电压不均一才出现这种情况。 有结果了，的确是溴酚兰的问题，有图为证。
以下两板来自同一个电泳槽（所以跟电压和缓冲液无关），跑的是SRAP分子标记，两板的marker都是DL2000，可以发现用旧溴酚兰上样的那板扭曲依旧，且扭曲线（略小于250bp）下方的条带已经模糊不清；而用新溴酚兰的那板不仅没有扭曲线，100bp处的条带照样清晰可见。
wu_shiyong和mlanqiang说得没错，在此特别感谢二位！
另外说明一下旧溴酚兰是用楼上组培用的廉价蔗糖配的，而新溴酚兰是用分析纯级蔗糖配的，看来分子实验果然不能用便宜货啊。
旧溴酚兰，6%非变性胶
新溴酚兰，6%非变性胶 : Originally posted by
嗯，我用的是自配的loading buffer（0.25%溴酚兰，40%蔗糖），上样前每份样品添加1/2体积的loading buffer，跑电泳时溴酚兰的确是呈一条直线（有些粗而淡），但这不是很正常吗？
溴酚兰是这周刚配的，但是没过滤 ... 你换用别人的试试！不用过滤，关键得全部溶解！ : Originally posted by wu_shiyong at
你换用别人的试试！不用过滤，关键得全部溶解！... 谢谢，我问题已经解决了，的确是溴酚兰不对。 你可以试试低电压，降低一下溶液的温度

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