山东中医药大学附属医院 | 山东省中医院
院报第127期
文章来源： 院报编辑部 发布日期： &&&&&&&&&&
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流式细胞技术在临床的应用
流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种对处在液流中的细胞或其它生物微粒(如细菌)逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技术。
流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质(如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等)进行快速测量并可分类收集的仪器。流式细胞仪以其快速、灵活、大量、准确、灵敏和定量的特色，广泛应用于基础研究和临床实践各个方面，包括细胞生物学、肿瘤学、血液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等，在各学科领域发挥着重要的作用。
二、 流式细胞仪的工作原理
待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列，由流动室喷嘴高速喷出，形成细胞液柱，细胞逐个通过检测区，在入射激光束照射下，产生散射光信号和荧光信号。散射光信号分为前向散射光( FSC，Forward Scatter)和侧向散射光(SSC，Side Scatter)，这类信号不依赖任何细胞样品的制备技术(如染色)，因此被称为细胞的物理参数(或称固有参数)。前向角散射光与被测细胞的大小有关，侧向角散射光是指与激光束正交90°方向的散射光信号，可提供有关细胞内精细结构和颗粒性质的信息。根据这些散射光特性可以初步将细胞分类。
如果样本细胞经一种或几种特殊荧光标记，经激光束的激发，可以产生荧光信号，通过对这类特异的荧光信号的检测和定量分析就能了解所研究细胞参数的存在，并加以定量。荧光染料可选用的荧光素有多种多样，由于它们分子结构不同，其荧光激发光谱与发射光谱也各异。选择染料或单抗所标记的荧光素，必须考虑仪器所配置光源的波长，目前用于临床的流式细胞仪常配置的激光器波长为488nm 和633nm ，通常可用染料有PI (propidium iodide) 、PE (phycoreγthrin)、FITC (fluoresscein isothiocyanate)、PerCP(peridinin chlorophy1 protein)、CY5、APC、APC-Cy7 等。在激光作用下，细胞发出的散射光信号和荧光信号可被光学系统检测，并输送到计算机进行存贮和分析，得到细胞相应的特性，并加以定量。
三、流式细胞术在临床工作中的应用
1、流式细胞术在细胞免疫学中的应用
1）淋巴细胞亚群分析
淋巴细胞是正常机体免疫系统功能最重要的一大细胞群,在免疫应答过程中,末梢血淋巴细胞发育成为功能不同的亚群，各亚群的数量和功能发生异常时,就能导致机体免疫紊乱并产生病理变化。FCM可以同时检测一种或几种淋巴细胞细胞表面抗原,将不同的淋巴细胞亚群数量的测定来监控病人的免疫状态,指导治疗。
2）感染及其治疗效果观察
由于T淋巴细胞在人体免疫系统中承担着重要的功能,因此当感染发生时,T淋巴细胞各亚群的变化往往能很敏感地反映感染的状态与程度。例如,细胞膜外CD4分子有HIV识别部位,因此CD4细胞是HIV病毒受体,AIDS病人CD4+T细胞明显减少,该指标是诊断AIDS的重要标志。当发生病毒感染时(如乙型肝炎,EB病毒和巨细胞病毒),CD8+T细胞增多,对CD8细胞的测定有助于对感染的诊断、治疗效果的动态观察。
利用流式细胞仪可对器官或骨髓移植术后病人进行监控，当病人CD3+、CD25+持续增加提示已经开始发生排异；CD4/CD8持续下降表明有感染发生,当其比值小于0.2时必须停用免疫抑制剂。
3）自身免疫性疾病进程判断
流式细胞仪便捷、准确的特点可以用来对自身免疫性疾病进行检测与疗效观察，SLE病人的淋巴细胞变化可以反映该病的活动情况和器官侵犯程度，活动或非活动性SLE伴有多系统疾病，但无肾脏损害的病人可出现CD4/CD8比值升高,伴有严重肾脏损害的SLE病人可出现低CD4+,高CD8+的现象。
4）强直性脊髓炎的诊断
有证据表明外周血HLAB27的表达及其表达程度与强直性脊髓炎的发生有很大程度的相关性,利用流式细胞仪可以进行HLA-B27/HLA-B7双标记来检测HLA-B27阳性细胞,同时排除交叉反应。
5）其他免疫性疾病的临床研究
CD23表达的增加与变态反应性疾病,自身免疫性疾病,肾病综合症有关,而且阳性率与病情严重程度呈正相关,治疗有效后CD23+细胞减少。
利用流式细胞仪检测PNH血细胞的细胞膜所缺乏的糖化肌醇磷脂(GPI)锚连接的蛋白如DAF(CD55)与MIRI(CD59)来确诊阵发性睡眠性血红蛋白尿传统的血清溶血试验具有更高的特异性与灵敏度。
2、2、流式细胞术在血小板功能评价方面的应用：
血小板膜糖蛋白(GP)是参与止血、血栓形成的重要分子基础,这些膜糖蛋白是一类重要的黏附分子。利用针对GP的单克隆抗体对血小板进行免疫荧光标记,并用FCM分析单个血小板或血小板亚群的GP是血小板膜糖蛋白检测分析方法的重大发展。方法简便、快速、标本用量少、灵敏度高、结果准确。与血小板有关的抗原的临床意义有:
1）诊断遗传性血小板功能缺陷疾病
巨血小板综合症(BSS)患者血小板CD42A/CD42B复合物先天缺陷，FCM中表现CD42A与CD42B不仅严重缺乏,而且其平均荧光强度显著低于阴性对照，CD61代偿性增加。血小板无力症(GT)患者FCM表现血小板GPIIB、IIIA(CD41、CD61)明显缺乏，CD42A和CD42B基本正常或稍高，并可出现异常血小板亚群。
2）血栓性疾病和血栓前状态
由于活化血小板是血栓的主要成分之一，也是引起血栓形成的主要原因，所以血小板活化程度增高与疾病发生发展有关。CD62P和CD63是活化血小板最特异和灵敏的分子标志物，正常人血小板只有低水平活化，外周血CD62P只有3-5%。
有文献报导糖尿病伴有微血管病变，冠心病、高血压病、高血脂病、脑血栓形成、脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对数显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变，周围血管病以及深静脉血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异。PTCA后24小时发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者CD62P和CD63增多，FCM可用于测PTCA后急性缺血再发作的危险性。
3、3、流式细胞术在白血病中的应用：
血液病多种为肿瘤性、免疫性和遗传性疾病，但恶性血液病约占一半以上。FCM在血液病的发病机制、诊断、分类、治疗和预后判断方面都有广阔的应用前景。
1）1）血病的分类研究
白血病分类是选择化疗方案和判断预后的重要依据，由于血细胞在其分化的不同阶段，承担不同功能时有不同的特征抗原表达，因此FCM结合单克隆抗体可以提高白血病分类诊断的附合率，根据白血病细胞所表达相关细胞的种系抗原，可将其分为B细胞系、T细胞系、髓细胞系、红细胞系和巨核细胞系，并可确诊白细胞的分类和分期，探明慢粒急变时的细胞来源。
2）残留病变检出(MRD)
MRD是白血病复发的主要根源，FCM其高特异性与敏感性可以在患者缓解期检测是否有残存病变细胞，早期探测MRD，以避免复发。
4、4、FCM在肿瘤学上的应用：
1）DNA含量测定及细胞周期分析
FCM在肿瘤学上的应用主要是利用DNA含量的测定进行包括癌前病变及早期癌变的检出，指导化疗以及预后评估等工作。
大量工作表明，癌前病变的癌变率与病变的增生程度相一致，而增生程度与DNA含量的异常改变又呈平行关系。FCM通过精确定量DNA含量，能对癌前病变的性质和趋势作出判断，有助于癌变的早期诊断。DNA非整倍体的出现可能是恶变细胞的重要标志,目前病理学尚无法从癌前病变中发现癌变和即将癌变的细胞，而FCM检测DNA非整倍体细胞的出现可作为一个有价值的参数。DNA倍体分析有助于临界性肿瘤的诊断，如卵巢的交界性肿瘤，异倍体的出现与病变的恶性发展有关。细胞异常增殖和分化障碍是肿瘤细胞的特性，DNA含量不仅能非常敏感地反映细胞代谢的异常，而且能通过DNA倍体分析，细胞周期各时相的细胞比例分析并结合细胞抗原的表达多参数分析,全面了解细胞的生物学行为，从而帮助肿瘤的诊断、选择治疗方案和预后判断。DNA异倍体，高S_PHASE细胞比值和高增殖细胞核抗原(PCNA)表达与细胞增殖能力，恶性程度和不良预后呈正相关。
2）为治疗方案和药理学研究提供依据
不同类型的肿瘤对化疗药物的敏感程度是不同的，可以利用FCM进行细胞周期分析，适当选用周期特异性药物或非周期特异性药物。
MDR是由多药耐药基因编的P糖蛋白(PGP)是亲脂化合物，包括多种抗癌药物和荧光染料的跨膜性排出泵。从人淋巴细胞排出荧光染料与细胞内P-GP的含量直接相关，当淋巴细胞出现MDR阳性细胞时，病人对化疗药物开始出现耐药性，需要考虑其他治疗方式。
5、活细胞内活性酶的检测：
据资料显示活细胞内活性酶的分析可以应用于许多医学领域，根据酶的活性可以鉴别不正常细胞。酶的活性也会因为受到药物的作用而会有所改变，因为酶的活动牵涉到细胞的新陈代谢，所以测量细胞内酶的活性能够提供许多细胞进展的讯息，包括活化、分化、凋亡、成熟、增殖等。传统上应用的测定细胞中酶活性的方法(如FLUOROMETRIC及COLORIMDTRIC_ASSAYS)，都是测定总体细胞的总酶活性而非测定单一细胞的酶活性。若要测定单一细胞的酶活性，通常都是涉及固定后的死细胞。近来COULTER公司推出最新的技术及试剂CELLPROBE_REAGENT，由于每一个特定的酶都有其专一的受质，而受质本身是由特别的化学品与荧光染料FLOURENSCEIN或RHODAMINENO共价结合的，能迅速进入活细胞，当其遇到特异性酶时，会被酶破坏其共价结构而释放其荧光染料，从而能够被FCM检测到。因此,活细胞酶探针能够用来测量单一活体细胞内酶的活性。
6、凋亡细胞检测：
凋亡最初是作为形态学概念被提出来的，细胞有两种不同的死亡方式：即坏死(NECROSIS)和凋亡(APOPTOISI)。凋亡典型的形态特征是核染色质固缩并分离，细胞质浓缩，细胞膜和核膜皱曲，核断裂形成片断，最后形成数量不等的凋亡小体。利用FCM可以进行DNA断裂点标记检测，DNA片断可以从细胞内漏出，导致DNA含量减少，利用FCM进行DNA含量分析，通过二倍体细胞G0/G1期峰前的亚二倍体峰来确定。
在凋亡早期,一些与膜通透性改变及凋亡有关的蛋白在细胞膜表面有特定表达，例如FAS基因蛋白(CD95)，线粒体膜蛋白(AP027)，磷脂酰丝氨酸(ANNEXIN_V)。FCM结合单克隆抗体可以检测表达这些蛋白的细胞，从而确定细胞的凋亡情况。
1）树突状细胞分析（Dendritic Cells,DC)
DC是一群抗原递呈细胞，同时又是重要的先天免疫细胞，还是具有免疫调控功能的一个细胞群，目前没有发现特异性的抗原标记。DC研究的主要内容包括直接分析计数和体外诱导检测,当前DC的检测需要一组抗体：包括CD80，CD83，CD86，CD40，CD11c，CD123，HLA-DR等。
2）MHC-四聚体染色技术（TETRAMER）&&&&&&&&&&&&&&
抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细胞的MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效应。MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上述抗原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通量分析仪器对标本中这群细胞进行分析 。
四、检验科现开展项目
检验科免疫室每周二、四检测“淋巴细胞亚群、T细胞亚群和HLA-B27等项目，检测。更多临床检测项目和科研项目将陆续开展，满足临床诊疗和科研需求。有诊疗需求的科室请联系检验科西区免疫室，电话：7582、7472。
附表1：检验科下周开展项目：
价格（元）
检测时间及
淋巴细胞亚群
T、B、NK细胞比例检测
每周二、四检测，当日采集2ml EDTA抗凝血（血常规紫色管）常温保存12h
T细胞比例检测
白细胞抗原HLA-B27
附表2：将要开展的项目（请联系西区免疫室：TEL7582、7472）
网织红细胞计数
造血干细胞计数
DNA倍体分析
血小板活化
PAC-1、CD62P、CD61 Precp
T细胞亚群同型对照
血液病免疫分型
CD10、CD19、CD117、HLA-DR、CD5、CD7、CD56、CD14、CD13、CD38、CD34、CD19、CD22、CD20、CD10、CD5、CD25、CD3、CD41a、CD138、CD33、CD15、CD11b、CD56、CD42a、CD64、CD33、MPO、CD79a、CD45、Kappa/Lambda等
阵发性血红蛋白尿检查
CD55、CD59、IgG2a、CD2、CD1a、TDT、P-gp
细胞凋亡研究
Annexin V、Lin1（树突细胞试剂）
CD127、CD25、CD4Percp
其他科研项目
（检验科& 郭绪晓）
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&肌醇 高含量99%肌醇原料 肌醇粉 肌醇规格|价格 厂家批发价供肌醇（inositol ）是一种水溶性维生素；维生素B族中的一种，肌醇和胆碱一样是亲脂肪性的维生素，又称为环己六醇，白色晶体粉末（无结晶水），风化性结晶（含二分子结晶水）。有9种立体异构体，其中有医用价值的内消旋体，可促进细胞新陈代谢、助长发育、增进食欲，用于治疗肝脂肪过多症、肝硬化症。别名： 肌糖、环己六醇英文名：Inositol ，CAS：87-89-8 ，分子量 ： 180.16，分子式：C6H12O6 ，相对密度： 1.752外观：为白色结晶状粉末，无臭，味微甜，在空气中较稳定，对热、强酸和碱稳定，其水溶液对石蕊试纸呈中性，且无旋光性。熔点224～227 ℃，沸点319 ℃，易溶于水，微溶于酒精、甘油和乙二醇。不溶于无水丙酮、氯仿、乙醚等有机溶剂。在低于50 ℃的温度下，可以从水中结晶为无色单斜棱晶体的二水物。含结晶水的肌醇，在100～110 ℃下容易脱水，成为无水结晶体。来源：肌醇广泛存在于动物心脏，肌肉和未成熟的豌豆中，其六磷酸酯又叫植酸，而植酸通常是以植酸钙镁复盐的形式广泛存在于植物界，植酸钙镁水解后，经一系列处理可得肌醇。作用：营养添加剂;肌醇是一种关系到人、动物、微生物生长所必需的物质，具有与维生素B1、生物素等相类似的作用。&肌醇是一种水溶性维生素；维生素B族中的一种，肌醇和胆碱一样是亲脂肪性的维生素；计量单位是毫克（mg）；肌醇和胆碱结合形成卵磷脂；有代谢脂肪和胆固醇的作有；还未订出每天必需的摄取量，健康成人每天大约应摄入lg；肌醇和胆碱一样，在供给脑细胞营养上扮演重要的角色。效用：降低胆固醇；1：促进健康毛发的生长，防止脱发；2：预防湿疹；3：帮助体内脂肪的再分配（重新分布）；4：有镇静作用。缺乏症 ：湿疹。富含肌醇的食物动物肝脏、啤酒酵母、白花豆（lima bean）、牛脑和牛心、美国甜瓜、葡萄柚、葡萄干、麦芽、未精制的糖蜜、花生、甘蓝菜。营养补品 ：6个以大豆为主要成分的卵磷脂肪囊中含有肌醇和胆碱各244mg。粉末状卵磷脂可溶解在液体中。大多数复合维生素B制剂中含有100mg的肌醇和胆碱。一般每日的摄取量是250～500mg。副作用：未发现有副作用。肌醇之敌 ：水、磺胺药剂、雌激素、食品加工、酒精、咖啡。建议1：服用肌醇时，必须和胆碱及其他B族的维生素同时服用。2：常喝咖啡的人要多摄取肌醇。3：服用卵磷脂的人最好摄取已经过螯合作用的钙，以维持体内磷和钙的平衡，因为肌醇和胆碱似乎都会提高出血液中磷的含量。4：要使维生素E达到最高的效果，必须摄取充分的肌醇和胆碱。生物分布：几乎所有生物都含有游离态或结合态的肌醇。肌醇是医药工业的营养药剂，它属于维生素B族物质，是维生素B复合体的一种，具有与生物素、维生素B1相类似的作用。是生命素I的成分之一。肌肉肌醇是鸟类、哺乳类的必需营养源，缺乏肌肉肌醇，例如小鼠可引起脱毛、大鼠可引起眼周围异常等症状。大鼠可大量代谢肌醇，但尿中排量并不多。鲨鱼似乎能把肌醇转变成为一种贮藏能量物质。适用：降低胆固醇、 促进健康毛发的生长、防止脱发、预防湿疹、 帮助体内脂肪的再分配（重新分布）、有镇静作用、湿疹。肌醇在医药中主要用途为配制多种维生素丸以及各种营养性氨基酸-维生素输液产品。此外，在医药中还可用于治疗肝硬化、肝炎、脂肪肝、血管硬化、血中胆固醇过高、糖尿高、四氯化碳中毒等病症以及用于合成烟酸肌醇酯、脉通等药物；同时还可直接作为药品使用，如肌醇片、肝醇、舒肝片等。&&
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能够看着的宝宝安详的睡着，并且一夜夜的长大，妈妈的心中想必充满喜悦与欣慰。提醒每一位辛苦育儿的新手父母，应该透彻理解睡眠对于宝宝生长发育的重要影响，切实从小为宝宝建立良好的睡眠习惯，但也要同时了解常见的婴幼儿睡眠困扰，以及应当寻求医疗协助的时机。　　婴儿晚上睡不好，原因有很多，加上婴儿睡眠行为，可能潜藏着危机，这些都是...
　　爸爸妈妈因为工作往往不得不得熬夜，可是有不少宝宝也跟着爸爸妈妈一起“贪黑”，三四岁的小朋友也经常晚上11时多才睡觉。专家提醒父母注意：自己夜生活的习惯可能会很大程度地影响孩子，而孩子保持健康的入睡时间对于他们的健康成长是非常重要的。　　22点至凌晨1点不入睡影响生长激素分泌　　据统计，我国0~2岁婴幼儿每天睡眠时...
　　有些孕妈咪在孕前因工作或娱乐，已经习惯于夜半睡觉，以致怀上胎宝贝后一时还不能改变这个积习，可这样做即损害自己的健康，有影响胎宝贝。经常夜半才睡觉的孕妈咪，会打乱生物钟的节律，使只有在夜间才分泌生长激素的垂体前叶功能发生紊乱，因而影响胎宝贝的生长发育，严重时会导致生长发育停滞；孕妈咪也会因大脑休息不足引起大脑过劳，使...
大家好我宝宝今天51天了出生时溶血性黄疸住院治疗后好了但最近我发现他又有点发黄（不是太严重因为手心、脚心不黄）爱哭闹晚上入睡困难哄睡（必须吃着奶头睡着）后5分钟左右又会醒如此反复一晚上从7点开始一直到11点或者12点多才能彻底睡着然后大概会睡2-3个小时吃奶睡着随后会1-2个小时一醒直到天亮夜里手心脚心头下容易出汗我不知道宝宝到底怎么了1月9号去健康检查那个医生说宝宝黄怕他贫血给宝宝开了赖氨肌醇Vb12口服溶液和健宝灵（健胃益脾）我觉得我宝宝太小了是药三分毒而且上网查了下我宝宝如果贫血的话也应该是红细胞和血红蛋白少应该补血红蛋白我看病例在医院治疗溶血时也是补的血红蛋白所以我担心那个医生是为了赚钱给我宝宝开的药所以这两种药吃了5天我把它停了上网搜索了下烦躁磨人，不听话爱哭闹，脾气怪；睡眠不安宁，如不易入睡、夜惊、早醒，醒后哭闹；出汗多，与气候无关这些症状的话是缺钙我就去买了贝特令的鱼肝油吃然后我补钙（母乳喂养）不知道这样做对不？要不要去医院看下？谢谢宝宝入睡困难缺什么...
我儿子两周多，有时候晚上睡觉翻来翻去的，大多发生在凌晨一点到四点之间，有时候会醒，醒后又不易入睡，要折腾两三个小时后才会再入睡。不知道什么原因，是不是病理的因素，或缺什么维生素？我儿子一直有在补钙，挺健康的都。请高人指点……小孩晚上睡不安稳
女儿饮食正常，身体健康，就是很难入睡，明明很困，但周围一丁点的声音，灯光的变化，大人的走动，甚至看到她的玩具，都可以让她又兴奋起来，继续玩。每天晚上最早12点半睡，这样正常么？是什么原因？我看小区里别的孩子都晚上7点就睡了2岁宝宝白天不午睡怎么办
　初为人母，满心欢喜，接踵而来的便是看护孩子的手忙脚乱。当孩子不舒服和生病时更是焦急万分。所以，了解些护理知识，显得格外重要。怎样才是正确的哄宝宝入睡的方法呢？济南福座产后护理中心的专家帮你分析一下哪些做法是错误的。　　福座指导一：摇睡…孩子为什么夜里爱哭闹　　婴儿哭闹请试试心理治疗当宝宝哭闹或睡眠不安时，一些年轻妈妈便将宝宝抱在怀中或放入摇篮里摇晃，宝宝越哭越凶，妈妈摇晃得也就越猛烈，直到宝宝入睡为止。　　殊不知这种做法对宝宝十分有害，福座专家支招：因为摇晃动作使婴儿的大脑在颅骨腔内不断晃荡，未发育成熟的大脑会与较硬的颅骨相撞，造成脑小血管破裂，引起“脑轻微震伤综合症”，发生脑震荡、颅内出血。轻者发生癫病、智力低下、肢体瘫痪、严重者出现脑水肿，脑疝而死亡。如果眼睛里的视网膜受到影响，还可导致弱视或失明，由此铸成大错，尤其是10个月内的小宝宝更危险。　　福座指导二：陪睡…玩具陪睡？不宜提倡！　　从宝宝一出生，就应积极鼓励他独自入睡，并养成习惯。即使是新生儿，也不应与妈妈同睡一个被窝。妈妈熟睡后稍不注意就可能压在小宝宝身上，造成窒息死亡。美国一项调查资料证实了这一点，即让婴儿独自睡觉可降低60%的突然死亡率。　　另外，妈妈长期陪睡，宝宝会出现一种“恋...
我家儿子今天24天了，大便一直是水和大便分离，经常有水积出，并且肠鸣音异常，肚子里经常听到咕噜咕噜的声音，并且伴有难受的表情，不宜入睡，去医院看了，医生说是消化不良，给开了颠茄口服溶液，喝了以后效果不太明显，大便还是和以前一样，请那位专家指点一下，这到底是怎么回事，应该怎么办？健康儿科
跟什么搭配健康，有营养、抗疾病？又有什么跟什么搭配会产生毒素、生疾病？例如葱拌豆腐，葱和豆腐对人体都是有好处的，但搭配在一起却形成毒素——草酸钙。那又例如萝卜，它跟什么搭配好，跟什么搭配不好。请各位指教一下，我要用这个参加比赛的，而且生活中更是必不可少。幼儿科学饮食保健
中国人寿少儿健康险
孩子睡觉害怕难以入睡
我是一个不称职的父亲，有一个十岁的男孩。我爱我的孩子，希望他能成为一个快乐的人，一个有爱心，对社会有用的人，即便他将来不能有大的成就，只要他快乐！！！！！昨天晚上，孩子又难过地和我商量：明天我不想去上学。我问孩子为什么，孩子说害怕——因为什么都学不会，害怕老师批评！以前孩子也谈过类似的问题，甚至曾经说过“自己什么都学不会，是一个没用的人”，对此我现在甚至已经无能为力了，我爱我的孩子，但有时候感觉自己帮不上他，我不知道通过什么样地方法能让他成为一个快乐的孩子。其实孩子还是愿意学习的，孩子也很聪明，只是有时候让人感觉他的思想和他的年龄不相符。现在我想请各位网友帮我参谋参谋我是应该带孩子看心理医生呢，还是应该带孩子看心理咨询师：我曾经带孩子看过心理医生，给人的感觉心理医生好像就是只会给病人开药一样；也带孩子看过心理咨询师，但一个小时100元的价格（资深专家每小时要300至400元）又有点负担不起的感觉。我已经下定决心，无论付出多大代价，只要能让我的孩子健康快乐地成长，不要让他幼小的心灵受到伤害，多少钱我都愿意花！！！现在请您告诉我心理医生和心理咨询师的区别在什么地方，我应该带孩子找心理医生还是心理咨询师?还有谁知道在这个方面国内有哪些资深专家？如果给孩子辅导需要多长周期，大概费用要...
健康生活小常识现在生活水平不错，追求健康太关键了，有什么健康生活小常识呢幼儿健康生活小常识