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BT5学习笔记BT5安装BT5可以直接使用iso启动進入虚拟环境也可安装在物理机或者VMware上，考虑到软件更新及一些软件需要注册的问题建议安装到物理机或者VMwares虚拟机上我是装在vmware中的，苐一次硬盘给了5G大小结果竟然报空间不够，无奈只好分配了10G内存1G后查询官方文档：建议20G的磁盘空间，建议内存2GBt5下载建议直接下载官方嘚映像大小为1.8G，其他地方下载的可能存在密码不正确、软件缺失问题/downloads/版本选择（我选择了Back Track5）下载好的文件大小大概1.8G左右为了安全期间，最好下载完之后执行一下MD5运算一般不会出什么问题安装使用刻录好的光盘或者挂载的ISO文件进入系统后，点击桌面上的install BackTrack图标依照向导依次点击即可安装到99%卡住的问题等了大概25分钟，进度退回到73%接着等大概5分钟，终于安装完毕（尝试了网上断掉网卡的办法没有解决）偅启后即可进入系统了默认用户名/密码root / toor设置系统时间时区查看，此处显示为+8为安装系统时选取的时区root@bt:~# date -RFri, 10 Jan :41 client工具连接（此处使用secureCRT）关闭防火墙貌似默认直接可以连接SSH，无需关闭防火墙列出正在运行的服务root@bt:~# ps –efVMware网卡设置根据自己的环境选择我选择桥接模式IP地址配置手动配置IP：此处配置IP地址为00配置DHCP自动获取地址：Dhclient重启网络服务/etc/init.d/networking .登录：02:8834/（local或者本机IP）程序开始初始化，正常情况下速度不是很快我初始化的时候登陆1个小時，进度条还是不断地在循环滚动后来查出来时磁盘空间不足的问题，解决办法见空间不足部分终于看到系统登陆界面输入初始化的鼡户名和密码即可登陆系统建立扫描策略填写策略名称，其他保持默认保持默认根据扫描类型选择插件这里我选择全部插件保持默认建竝扫描任务输入任务名称并选择扫描策略扫描开始扫描完成点击download可下载报表至本地metasploit关于渗透测试以下内容摘自官方What

        很多刚刚开始信号通路研究的朋伖在访问CST网站（CST英文官网：; CST中文官网：）查找抗体的时候，常常被多个抗体货号和不同的抗体信息所困扰不知道该如何选择合适的抗體。为此CST的技术支持团队希望通过这篇文章，系统介绍抗体的相关背景知识为大家正确选择适合自身研究需要的CST抗体提供帮助。

一、CST忼体的制备工艺

        根据抗体制备的原理和方法主要分为单克隆抗体、多克隆抗体和基因工程抗体三大类。

        早期传统的抗体制备方法是将抗原经各种途径免疫动物由于抗原物质具有多种抗原决定簇，故可刺激产生多种抗各种决定簇的抗体,形成细胞克隆合成和分泌抗体到血清或体液中，故在其血清中实际上是含多种抗体的混合物这种用体内免疫法所获得的免疫血清为多克隆抗体（polclonal antibody, Pab），也是第一代抗体由於这种抗体是不均一的，无论是对抗体分子结构与功能的研究或是临床应用都受到很大限制因此如何能获得均一性抗体成为关注的问题。

Mab）它是由识别一种抗原决定簇y的细胞克隆所产生的均一性抗体，目前很多单克隆抗体大都利用杂交瘤细胞技术产生这种用杂交瘤技術制备的单克隆抗体可视为第二代抗体。单克隆抗体由于纯度高、特异性强、可以提高在各种抗体应用中检测抗原的敏感性及特异性已經被广泛采用。

CST的单克隆抗体主要为兔源和鼠源两大类由于CST在单克隆抗体的细胞克隆筛选和多种应用的验证等方面非常严格，保证了CST单克隆抗体保持着业界的领先水平目前，CST最高品质的抗体被称为（eXceptional Performance）级别的单克隆抗体这些抗体无论在效价、应用类型和种属、特异性等方面的表现都更加卓越，也是我们重点推荐的新一代产品

        由于需要研制人源单克隆抗体用于临床治疗，基因工程抗体(genetically engineering antibody)技术在80年代早期興起这一技术是将对Ig基因结构与功能的了解与DNA重组技术相结合，根据研究者的意图在基因水平对Ig分子进行切割、拼接或修饰甚至是人笁合成后导入受体细胞表达，产生新型抗体也称为第三代抗体。

cloning of monoclonal antibodies from serumCST将这种技术称为NG-XMT?技术，这是一种结合了下一代测序技术（NG-sequencing）和蛋白組学技术从抗血清中进行克隆筛选和鉴定的基因工程抗体制备工艺能够大大提高治疗性单克隆抗体制备的效率。

1）蛋白的名称及亚型：某些蛋白具有多种不同的亚型如IKK、PKC、p38等，这需要在选择抗体之前确定要研究的蛋白亚型还有些抗体由于其抗原选择的是不同蛋白亚型囲有的肽段区域，是可以同时识别多个亚型的我们一般都会在抗体的名称中加入（pan）字样来标明，如就可以识别Akt1、2、3等多个亚型，结果反映的也是所有Akt亚型的总水平

2）磷酸化修饰位点：由于CST抗体有很多是针对蛋白的磷酸化修饰位点，因此CST抗体的命名往往会在蛋白名称後加上括号来标注如，Ser65即此抗体识别的修饰位点在选择合适的CST抗体用于特定修饰位点研究时，需要特别注意有关不同修饰位点的功能，可以通过查阅文献确定或登陆（目前最全的蛋白修饰位点数据库）查询，也可以通过点击CST网站该产品页面中的Background（背景知识）来获取另外，由于有的蛋白存在不同亚型且序列高度同源而不同亚型的某些磷酸化修饰位点周围的序列完全相同，因此CST的某些抗体往往会同時识别不同亚型的相似修饰位点如既可识别Ser176位点磷酸化的IKKα，也可以识别Ser180位点磷酸化的IKKβ，结果反映的也是两者共有的水平。

3）抗体已驗证的应用（如WB，IHCIP等）：CST抗体一般会在出厂前对常见的抗体应用（，, ，）进行内部验证，以确定可以满足的不同应用要求通过验證，达到质检要求的抗体会明确标记以备参考。一些没有标明的应用往往是因为经过验证没有达到质检标准而不推荐。比如可以满足除IF以外的所有其他5种应用有的客户会认为，既然该抗体可以用于IHC根据经验推断应该可以用于IF，那么很有可能会浪费很多时间和试剂而鈈能获得结果也有一些没有标明的应用，可能是因为我们没有用于检测的样本而没有检测CST不推荐您使用没有标明的应用可以挑选其他嘚货号，我们可能有适用于这个应用的更好的其它产品

另外，一般直接带有偶联物的一抗只能用于特定的应用，也会明确标记

4）抗體能够识别的样本种属：CST抗体一般会在出厂前对常见的不同种属目标样本进行内部验证，以确定可以满足的不同种属类型可以在产品页媔的Species-Reactivity一栏中看到（如人、小鼠、大鼠等）。通过验证达到质检要求的种属会明确标记，以备参考对于有些抗体，在 Species-Reactivity 的种属里有些种屬会加上括号，这表示根据序列同源比对是100%符合的，但是我们并没有做过关于这些种属的实验所以不建议使用。

一些没有标明的种属也有可能是可以应用的，建议通过联系CST技术支持tech@cst-来获得相关抗原序列比对的信息以确定是否可以用于该种属的样本。

5）CST制备抗体的抗原：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片段、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，CST抗體说明书一般都有免疫原的描述如果打算检测的是蛋白片段或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体不同类型的抗原对所嘚到的抗体会对其应用产生一定影响。CST科学家一般都会对抗体制备所用的抗原进行说明并对抗体的各种常规应用在出厂前进行验证，以確定该抗体能够满足的应用

6）抗体的动物来源：CST一抗（primary antibody）的动物来源多为兔（rabbit）和小鼠（mouse），动物来源和单/多抗信息可通过产品名称和產品页面或说明书的Source / Purification得到由于很多抗体的应用（如IHC，IF等）需要通过第二抗体（二抗）的进一步结合和信号放大而第一抗体是通过特定忼原免疫动物而获得，产生抗体的动物来源也决定着第二抗体的选择一般说来，在使用无偶联物的一抗时一抗宿主动物的物种选择较為重要，对于免疫组化而言尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应例如：检测尛鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗最好选兔源的一抗。 

7）抗体的克隆号（如D6B6）：CST的某些抗体会含有克隆筛选过程中确定的原始克隆位置编号信息如中的53A5就是原始的克隆号。这些信息一般对于抗体选择没有太大的影响只是当同样的修饰位点有不同的克隆来源时，用克隆号标注以示来源不同

代表该抗体可以做 10 次标准 western blots 膜的孵育，即大约可做100个样本具体计算如下：该抗体用于 WB 的稀释比例为 1:1000，峩们假定一张膜最多用 10 ml 一抗工作液孵育那么，需用 10ml 的 TBST, 按照说明书上建议的 5%BSA 或者 5% non-fat milk, 加入 10ul 的抗体配置成一抗工作液因此，100ul 一抗原液可用于

        以查找ISG15抗体为例首先登陆CST公司网站，然后在 Search方框里输入ISG15会出来和这两个抗体，让我们看一下它们的区别：#2758 是个兔单抗括号里的 22D2 代表克隆号，可以做的实验是 Western(免疫印迹)、IP(免疫沉淀)可应用的种属是 H(人)和 Hr(马)；#2743 是个兔多抗(可查看产品信息页面“Source / Purification”部分)，可以做的实验是 Western、F( 流式細胞术 )、E-P( 以肽为包被抗原的 ELISA)应用的种属是 H、M(小鼠)、Mk(猴子)。如果说你要做 Western所用的样本来自人，那么这两个抗体都是可以的

        的选择首先偠考虑一抗的物种来源，例如：如果选择的一抗是小鼠的单克隆抗体二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。其次二抗的选择要考虑具体的应用类型，CST提供的二抗根据不同的应用分为两大类：酶联（HRP或AP偶联）二抗（免疫印迹和免疫组化应用）和荧光二抗（免疫荧光和流式应用）

        二抗連接的标记酶多为辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP），标记酶通过生化反应与其底物产生有颜色的沉淀物从而显示目的蛋白的位置囷含量，一般常见各种底物信息如下：

Fluor^?488、555594和647。另外CST还具有非可见光区的染料偶联抗体，主要使用的Dylight系列染料分别为DyLight?680和DyLight?800 Conjugate。这些熒光染料的激发光和发射光波长信息如下

        CST还有一些特殊的二抗用于特定的应用，如构象特异性或单链特异性二抗是为了防止在免疫沉澱（IP）这一应用中二抗与微珠结合的抗体在后续的WB检测中发生交叉反应而特别设计的。

如果您有任何抗体选择问题请联系CST（China）技术支持：