厂没改革草游一生只草一人(打一抗新型肺炎急需药品,2字)

system,T3SS)效应蛋白编码基因,并研究其免疫活性,探讨预测的T3SS效应蛋白重组蛋白在临床Cpn血清学诊断中的应用价值方法:①通过生物信息学分析结合相关文献报道,预测Cpn T3SS效应蛋白编码基因;②以Cpn AR39菌株总RNA为模板,RT-PCR从转录水平分析Cpn T3SS效应蛋白编码基因在感染细胞的表达情况,并筛选出在感染后72小时有表达的基因;③PCR扩增预测Cpn T3SS效应蛋白编码基因,将其亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-2中构建重组质粒pGEX-6P-2/目的片段,经PCR、测序鉴定后将其转化至表达宿主菌E.coli BL21中,IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blot分析和鉴定表达产物;對温度、IPTG和时间等诱导表达条件进行系列的优化后,获得可溶性表达蛋白并大量诱导表达GST纯化树脂纯化重组蛋白,用tris8.0将目的蛋白透析降低谷胱甘肽浓度,BCA法测定蛋白浓度;用重组蛋白包被微孔板,建立间接ELISA法检测临床Cpn患者血清,评价重组蛋白的抗原性;用重组蛋白经皮下注入免疫BALB/c小鼠,检測免疫小鼠血清中重组蛋白多克隆抗体的效价,分析重组蛋白的免疫原性,并以制备的多克隆抗体为一抗,应用间接免疫荧光检测预测蛋白在感染细胞的定位情况,以筛选Cpn分泌性蛋白。结果:通过生物信息学分析结合相关文献报道,预测了14个Cpn

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