多细胞融合合要历经哪些步骤？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-07-30 11:13 标签： 管道泵加在进水还是回水好

融合培养基（无HAT）：

RPMI（500ml）2mM 谷氨酰胺, 1×NEAA（非必需氨基酸），1×丙酮酸钠，15％FBS（胎牛血清）1×青链霉素溶液，1％杂交瘤克隆因子，1×OPI

选择培养基－1（含1×HA T）：

RPMI（500ml）2mM 谷氨酰胺，1×HAT1×NEAA（非必需氨基酸），1×丙酮酸钠，15％FBS（胎牛血清）1×青链霉素溶液，1％杂交瘤克隆因子，1×OPI

选择培养基－2（含2×HA T）：

RPMI（ml）2mM 谷氨酰胺，2×HA T1×NEAA，1×丙酮酸钠，15％FBS1×青链霉素溶液，1％杂交瘤克隆因子，1×OPI

1 应用无菌技术从免疫的兔子身上取出脾

2 在100mm 的培养皿中紦脾浸在10ml 不含血清的RPMI培养基中（培养基需是刚从4℃冰箱拿出），并用筛网分离脾细胞

3 转移所有的脾细胞到一支50ml的离心管中，并用10ml不含血清的RPMI培养基洗培养皿以收取更多的细胞

4 离心使细胞沉下来，弃去上清以20ml不含血清的RPMI培养基重新悬浮细胞，让团块下沉下来并把不下沉的细胞转移至一支新的50ml的离心管中。

5 离心使细胞沉下来以20ml不含血清的RPMI培养基清洗细胞。再离心一次以20ml 不含血清的RPMI培养基重新悬浮细胞，并计数

6 取300×106脾细胞用于一次融合。

同用于融合的骨髓瘤细胞

1 通过离心收集融合同用的细胞

2 弃去上清，并以20ml不含血清的RPMI培养基重悬鉯洗细胞再离心，以20ml不含血清的RPMI培养基重新悬浮细胞并计数。

1 把兔子脾细胞与融合同用的细胞混合在一支50ml的离心管中并加不含血清嘚RPMI培养基至30ml。

2 离心下细胞尽可能地从管壁吸去培养基。轻轻用移液器（最小程度）吹细胞小球块使其松开。

3 加1ml PEG加的过程需大于1分钟。加PEG时旋转50ml的离心管使细胞混合好或轻柔地用枪头混合细胞（不用吹打）。

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