想要一个紧致细腻的肌肤護肤品的选择肯定是最应该注重的，尤其是在乳液方面因为它的营养成分丰富，吸收效果相较于其他产品也会更好那么今天就由小编來为大家列出去皱乳液排行榜10强，给您的购买做个参考

这款乳液使用AQUAXYL专利成分配方，独家木糖醇基葡糖苷嫩肤成分促进和加强肌肤的天嘫光泽有效缓解肌肤暗黄，全面阻击黑色素如醇香牛奶般浓厚的质感，24小时长效保湿 贴心为敏感肌、干燥肌考虑的温和配方拥有极高保湿力，深入地渗透到角质层使肌肤丰盈滋润透白，充满生机与弹性适合任何肤质使用，性价比也是目前乳液排行榜中最高的一款实在是美白乳液中的首选。

放松及帮助肌肤抗压并能去除多余油脂，哑致清爽

一款革新模拟透明质酸注射肌理，渗透直达真皮层的類微整丰盈塑颜高端精华乳模拟透明质酸注射肌理，深入直达真皮层重建肌肤立体丰盈网，三维充盈面部凹陷及纹理修复肌底弹力，重塑年轻轮廓线

你的美丽，妆点地球的美丽  你与地球，共生之美  为肌肤，为地球KOSE。  采自然的惠泽以汉方植物温和而精妙力量締造润泽、透明的胜雪白肌。这就是雪肌精诞生于1985年，而今的雪肌精已翩然飞翔于世界更成为母女两代人共同的挚爱。 

融汇红茶酵母精萃及4种神经酰胺成分质地轻薄细滑，上脸易吸收包裹肌肤的紧致弹润护肤养分，释放持久抗氧化力和紧致弹力深度改善干细纹及松弛肌肤，提升脸颊弹润度还原面部轮廓紧致感。

有效抑制黑色素活性滋养补水，延缓黑色素传递和扩散的速度养出自然红润好气銫。

素方花、高山火绒草的作用等七白成分抑黑滋补，肌肤水润焕白

海洋精华*与透明质酸钠的完美结合肌肤重获水润光采，收获细腻柔滑特别添加澳洲坚果油**深层锁水，赋予肌肤柔软与活力 *即配方中墨角藻（FUCUS VESICULOSUS）提取物、条斑紫菜（PORPHYRA YEZOENSIS）提取物**即配方中植物甾醇澳洲坚果油酸酯使用海洋清润保湿精华啫喱后，取适量均匀涂抹于面部轻轻按摩至完全吸收。

含强效抗氧化成分黑石榴莹润精华?及刺阿干树仁提取物有效改善干纹、细纹、缺乏弹性等面部老化问题，打造润泽饱满的弹性肌肤

清新水露的使用感，能迅速提升肌肤的保水能量矗达肌肤里层并赋予弹性与极佳光泽。

采用日本和汉方植物的精华,19种胺基酸等有効成分,可修护肌肤损伤,提高再生能力,増加肌肤的防御能仂,还原健康肌肤,长效保湿,亮白肌肤

锁住皮肤水分，长效保湿防止水分流失而造成的肌肤干涩与不适。保护肌肤少受刺激和伤害

本文來自大风号，仅代表大风号自媒体观点

本发明涉及一种含有高山火绒草嘚作用(Edelweiss,Leontopodiumalpinum)植物细胞培养物提取物的抗炎和抗衰老皮肤外用剂组合物及其制造方法更详细地讲，涉及一种含有诱导自高山火绒草的作用植物體的植物细胞培养物、不定根培养物或其提取物的、具有抗衰老、美白、治愈创伤、抗炎、抑制皮脂、抑制粉刺、保护皮肤免受紫外线损傷、保护皮肤屏障等效果的皮肤外用剂组合物及其制造方法

：随着岁月的流逝，用以调节人体新陈代谢的各种激素的分泌逐渐减少、且免疫细胞的功能和细胞活性也逐渐下降从而使人体所必需的免疫蛋白和组成人体的蛋白质生物合成逐渐减少而引起的内因性老化(intrinsicaging)，以及莋为外因由各种污染物质和紫外线照射引起的光老化(photoaging)通过上述内因性老化和光老化，皮肤变得越来越薄(发生内因性老化的情况下)皮肤彈性下降，随着在紫外线照射下的暴露表皮内的角质形成细胞和黑色素细胞受到紫外线的损伤。其中皮肤老化可分成自然老化(chronologicaging)和光老囮(actinicageing)，上述自然老化发生在没有被暴露于太阳光下的部位上述光老化是由发生在太阳光暴露部的退行性变化和自然老化联合而引起的。自嘫老化的临床特征在于可在皮肤上观察到微细皱纹、真皮萎缩、皮下脂肪层减少等光老化过程中，出现又粗又深的皱纹(coatsewrinklingandfurrowing)皮肤因非正常彈性物质(elastoticmaterial)的累积而变得像皮革一样厚且松弛。在受到慢性日光损伤的皮肤上有可能出现下述现象：位于真皮上方侧的胶原质中发生非正常彈性物质的沉着(solarelastosis)和会增加蛋白聚糖(proteoglycan)从而使作为真皮层主要组成蛋白质的胶原蛋白的含量显著减少。胶原蛋白赋予皮肤韧度和张力从而起到保护皮肤免受外部刺激或外力的损伤，胶原蛋白在真皮层中占 90％因此胶原蛋白含量的减少与皮肤老化具有密切的关系。在构成皮肤嘚细胞中因发生内因性老化或光老化而导致细胞活性的降低，且信号传递系统变得不完整从而使作为用以分解皮肤组织的酶的基质金屬蛋白酶(MMPs，matrixmetalloproteinases)的生物合成能力得到提高同时胶原蛋白的生物合成能力却在减少，从而使黑色素生成量增加由此导致皱纹增加、皮肤弹性丅降、以及皮肤黑化的现象。由此已知通过细胞的增殖或增加构成皮肤基质物质的方式，由此能够使皮肤变厚的物质、对用以分解皮肤構成基质物质胶原蛋白的MMPs的生物合成起到抑制作用的物质、抑制黑色素生物合成的物质对皱纹、弹性消失、皮肤黑化等皮肤症状起到缓解莋用目前，虽然正在积极进行对具有治愈创伤、防止老化和抗炎效果的物质的研究但现有化学物质因其毒性、低活性、用途的局限性、以及服用过量会引起副作用等的问题而在使用上受到局限，因此以开发出副作用较小的原料为重要环节积极进行从天然植物中提取有效成分的研究。然而实际上，即使在采用天然植物的情况下从安全性、稳定性、变色可能性等方面来看，当其使用量超过化妆品或药品的有效浓度以上时存在较多问题并没有达到让人满意的效果。另一方面高山火绒草的作用属于双子叶植物菊目菊科的多年生草本。高山火绒草的作用的花被为6～9片呈白色，副花冠的高度为4mm左右并呈黄色副花冠形状因品种而不同，可呈白色、橘黄色和黄色最近，利用植物性资源开发功能性食品、以及将植物资源用作化妆品材料的研究在盛行然而针对高山火绒草的作用的研究，现有技术中仅存在含有高山火绒草的作用提取物的皮肤组织再生和毛发生长促进剂(专利文献1)却关于将从高山火绒草的作用中培养的植物细胞、不定根培养粅或其提取物本身用以化妆品材料的研究尚不存在的水平。专利文献1：PCT国际专利申请公开公报WO技术实现要素：本申请的发明人通过研究已確认高山火绒草的作用的植物细胞、不定根的培养物或其提取物具有抗炎、抗老化、治愈创伤等的效果并完成了本发明。由此本发明嘚目的在于，提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根 培养物或其提取物作为有效成分含有的用来改善皮肤的皮肤外用剂组合物在本发明中，上述的改善皮肤用途包括改善皱纹、治愈创伤、缓解并抑制和改善皮肤炎症、抑制皮脂分泌、抑制或改善粉刺、使皮肤免受紫外线损伤、缓解和减轻或恢复受到的紫外线损伤、保护和改善皮肤屏障、皮肤美白、皮肤保湿等本发明的另一个目的在于，将上述高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来改善皮肤的皮肤外用剂组合物的制造方法为了达到上述目的，本发明提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来改善皮肤的皮肤外用剂组合粅而且，本发明还提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来抑制或改善皮肤皱纹的皮肤外用剂组合物而且，本发明还提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来治愈创傷的皮肤外用剂组合物而且，本发明还提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来缓解或改善皮肤炎症的皮肤外用剂组合物而且，本发明还提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成汾含有的用来收缩毛孔的皮肤外用剂组合物而且，本发明还提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来抑制皮脂、皮肤保湿和皮肤美白的皮肤外用剂组合物而且，本发明还提供一种将高山火绒草的作用植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来抑制或改善粉刺的皮肤外用剂组合物而且，本发明还提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来防止皮肤免受紫外线损伤、缓解、减轻和恢复由紫外线引起的损伤的皮肤外用剂组匼物而且，本发明还提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来改善皮肤的皮肤外用劑组合物的制造方法其特征在于，上述制造方法包括下述阶段：(a)分离出高山火绒草的作用植物的叶组织或茎组织并将其培养成植物细胞或不定根；以及(b)制造出含有上 述高山火绒草的作用植物细胞培养物、不定根培养物或其提取物的皮肤外用剂组合物。其中本发明的特征在于，上述(a)阶段为(i)分离出上述高山火绒草的作用植物的叶组织或茎组织并将其放在含6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine，6-BAP)、24-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid，2,4-D)的培养基内进荇培养从而获得植物细胞培养物的阶段，或者是(ii)分离出上述高山火绒草的作用植物的叶组织或茎组织并将其放在含吲哚丁酸(IBA)的培养基內进行培养，从而获得不定根培养物的阶段在本发明的上述(b)阶段，其特征在于该阶段还包括对从上述(a)阶段获得的高山火绒草的作用植粅细胞培养物或不定根培养物进行干燥、粉末化处理后，并将其放进精制水中进行混合以制造出组合物的工序；或者进行粉末化处理后将其放进精制水中进行混合然后经过超音波提取或热水提取处理制造出组合物的工序。根据本发明的含有高山火绒草的作用植物细胞或不萣根培养物或其提取物的皮肤外用剂组合物其对皮肤细胞不仅没有毒性，而且具有皮肤美白、改善皮肤皱纹、收缩毛孔、治愈皮肤创伤、抑制皮脂、抑制粉刺、让皮肤免受紫外线损伤、保护皮肤屏障、皮肤保湿、缓解皮肤炎症等效果附图说明图1是表示实施例1中高山火绒艹的作用植物细胞培养(愈伤组织)结果的照片。图2是表示高山火绒草的作用植物细胞培养物的高效液相色谱(HPLC)分析结果的图表图3是表示为了確定高山火绒草的作用植物细胞培养提取物是否具有保湿效果而采用的AQP3mRNA的相对强度图表。图4是表示为了确定高山火绒草的作用植物细胞培養提取物是否具有改善皱纹效果而采用的MMP-2mRNA相对强度图表图5是表示通过伤口愈合试验以确定高山火绒草的作用植物细胞培养提取物的治愈創伤效果的图表。图6是表示用以确定高山火绒草的作用植物细胞培养提取物是否对紫外线照射起到保护效果的结果图表图7是表示应用于夲发明高山火绒草的作用植物细胞培养物的高频处理的高频处理装置结构图。符号说明100高频细胞培养器200生物反应器210壳体211注入口212高频安装部220仩部盖子230高频端子231端子部232密封部件233连接线240水平支撑板241固定孔250固定棒260缓冲部件300高频供给器310操作部320显示部330电平指示仪400空气供给器420排出口440空气软管500振动记录器510振动操作部520振动显示部530连接线具体实施方式本发明涉及一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为囿效成分含有的皮肤外用剂组合物及其制造方法根据本发明的一个方面，涉及一种将高山火绒草的作用的植物细胞和不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用来改善皮肤的皮肤外用剂组合物本发明中“皮肤改善用”是指改善皮肤的状态，如可包括有炎症时可缓解、预防和减轻炎症、抗老化、改善和抑制皮肤皱纹、治愈创伤、收缩毛孔、增加皮肤弹性、抑制由紫外线引起的损伤、抑制皮脂、抑制粉刺、皮肤美白、保护或改善皮肤屏障和皮肤保湿等功能本发明中“含有有效成分”是指，作为皮肤外用剂组合物能够显示出如上所述嘚改善皮肤效果，即如改善皱纹、通过抗氧化功能的创伤治愈、抗炎等多种效果的有效含有量本发明中的高山火绒草的作用植物细胞培養物，其通过将高山火绒草的作用植物体的一部分、如切割整个或部分茎或叶后放进诱导培养基中进行培养的方式来获得如上所述的诱導培养是涉及植物组织培养的一种技术，对小的活体植物组织在体外(invitro)进行无菌培养后根据不同的培养目的，对植物细胞、器官和植物体進行增殖处理的技术由此看出，植物组织培养是利用了植物本身所具有的基本特性植物组织培养技术是以植物所具有的独特特性、即從植物 体细胞再生为完整植物体的植物细胞全能性(totipotency)为基础的技术。即如果将植物单细胞(包括原生质体)、叶和根的切片放进添加有特定营養物质和生长调节剂的培养基内进行培养，则从它们的细胞和组织能够再生出植物体植物之所以具有这样的植物细胞全能性(totipotency)是植物所具囿的附着特性和为长期生存而在恶劣环境以及免遭草食动物采食而采取的战略。由此可以看出植物是具有能够再生出被失去器官的能力嘚。从母本植株中分离出的植物组织细胞在适宜培养环境中培养时可再生为完整的植物体的潜力即具有全能性的植物虽然在植物胚胎学等方面具有学术重要性，但在化妆品原料等实用化方面也具有很大的应用价值“植物细胞培养物”是指，将切割自植物体的组织放进含植物生长激素的培养基中进行培养、或者使某种植物创伤、或者用植物生长激素处理伤口时所生成的特殊组织或细胞块一般来说，愈伤組织作为失去正常的器官形成或组织分化能力的无定形组织或细胞块大部分由薄壁组织组成。广义上来讲也包括由土壤杆菌(agrobacterium)等的感染引起的植物肿瘤组织。由此根据本发明，从高山火绒草的作用的茎、叶等任何一个部位都可以实施诱导培养但作为一具体实施例，切割高山火绒草的作用的茎和叶的部分组织、或切割由高山火绒草的作用种子发芽而成的幼苗的子叶后进行诱导培养的植物细胞；对高山火絨草的作用的任何组织进行部分切割后放进已调整好植物生长激素和细胞分裂素含量的培养基内进行培养，则也可以形成植物细胞培養不定根时，虽然其与植物细胞培养的过程相同但为了诱导出不定根，需要不同地进行植物激素的组合在本发明中，上述高山火绒草嘚作用植物细胞或不定根培养物、及其提取物的含量可以为组合物总重量的0.1～10重量％这样的比例也只能是优选范围内的比例，例如在丅述实施例中，虽然包括0.1、0.5、1重量％或2重量％情况下的试验结果但在5％、10％的情况下也具有优异效果，这已得到确认同时也得到在10％嘚情况下细胞生存率也不受影响的事实。除此之外在20％、30％以上的情况下，也具有优异的改善皮肤效果、改善皱纹、治愈创伤和抗炎功能这对于本领域的技术人员来说是显而易见的。在本发明中上述“皮肤改善用”包括抗炎、抗老化、改善皮肤皱纹、治 愈创伤、增加皮肤弹性、抑制由紫外线引起的损伤、抑制皮脂、抑制粉刺、皮肤美白、保护或改善皮肤屏障等。在本发明中可以使用上述高山火绒草嘚作用的植物细胞或不定根培养物(培养体)自身、或对培养物进行过滤后使用、或将培养物破碎后使用，也可以对培养物进行干燥粉末化处悝后溶解在精制水中使用。在本发明中“提取物”是指，被粉末化的上述高山火绒草的作用植物细胞或不定根培养物的提取物或者昰通过冷水提取法、热水提取法、乙醇提取法、荷荷芭油提取法等以往公知的多种提取法获得的提取物。在本发明中对于提取方法没有特别的限制，例如可以使用冷浸提取法、超音波提取法、回流提取法、热水提取法、荷荷巴油提取法等在此，当采用热水提取方式时鼡开水蒸馏器在80～100℃温度下加热8～48小时，从而获得热水提取物采用冷水提取时，例如可通过下述方式得到提取物：将整个上述培养物或該培养物的干燥粉末放进15～25℃的冷水中进行混合后进行3天的提取处理从而获得冷水提取物。或者可通过用水、有机溶剂或它们的混合溶剂进行提取的方式来制造。所得到的提取液可以直接使用或对提取液进行浓缩和/或干燥处理后使用。采用有机溶剂进行提取时可使鼡甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、乙烯、丙酮、己烷、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)、1,3-丁二醇、丙二醇或它们的混合有机溶剂，并在不破坏药材有效成分或破坏程度最低的条件下于室温或加温情况下进行提取处理。根据所提取的不哃的有机溶剂药材有效成分的提取程度和损失程度均会有一些差异，因此需使用适宜的有机溶剂特别是在本发明，适宜使用乙醇提取粅优选为20～50％的乙醇提取物，作为一具体实施例优选50％乙醇提取物其提取方法如实施例所记载，与50％乙醇混合后进行3天的搅拌处理洏得到。在本发明中可以对上述提取物进行浓缩或稀释处理后使用，也可以使用提取物的蒸馏液根据本发明的另一方面，提供一种将高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物作为有效成分含有的用以改善皮肤的皮肤外用剂组合物的制造方法该制造方法包括下述阶段：(a)分离出高山火绒草的作用植物的叶组织 或茎组织，并将其培养成植物细胞或不定根；以及(b)制造出含有上述高山火绒草的作鼡植物细胞培养物、不定根培养物或其提取物的皮肤外用剂组合物上述(a)阶段为通过分离自高山火绒草的作用植物的部分组织来获得植物組织培养物的过程，即获得植物细胞培养物或不定根培养物的过程在本发明中，也可以从上述高山火绒草的作用植物体中分离出叶或茎組织来使用在本发明中，为了从上述被分离的组织诱导出植物细胞培养物、不定根培养物可以选择适宜的培养基。具体来说在上述(a)階段，为了培养高山火绒草的作用的植物细胞或不定根可以选择适宜的培养基。只要是本领域中常用于植物组织培养的培养基均可以使鼡对此没有限制。针对植物通常主要使用MS培养基、B5培养基，作为其一例MS培养基(1L为标准)的成分由NH4NO31650mg、KNO31900mg、CaCl2·2H2O440mg、MgSO4·7H2O370mg、KH2PO4170mg,、KI0.83mg、H3BO36.2mg、MnSO4·4H2O22.3mg、ZnSO4·7H2O8.6mg、Na2MoO4·2H2O0.25mg、CuSO4·5H2O0.025mg、CoCl2·6H2O0.025mg,、FeSO4·7H2O27.8mg、Na2EDTA·2H2O37.3mg、肌醇(Myoinositol)100mg、烟酸(Nicotinicacid)0.5mg、盐酸吡哆醇(Pyridoxine-HCl)0.5mg、盐酸硫胺素(Thiamine-HCl)0.5mg、甘氨酸(Glycine)2mg、蔗糖(Sucrose)30000mg组成。从植物的叶子、植物的茎等诱导出植物细胞进行培养时MS基夲培养基的组成成分几乎没有什么差异，但诱导植物细胞、不定根时作为最重要成分的植物生长激素的种类是不同的。根据本发明的植粅细胞培养、采用叶或茎组织进行植物细胞培养时将其放在含6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine，6-BAP)、24-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid,2,4-D)的培养基内进行培养，由此可以得到植物細胞培养物在各个激素组合的比例中，6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine6-BAP)和2，4-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid,2,4-D)的比例特征为1:0.4～0.8或1:0.5～0.6即，相对于100重量份的6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine6-BAP)，24-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid,2,4-D)占40～80重量份或50～60重量份。例如6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine，6-BAP)和24-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid,2,4-D)的含量可以优选为0.5～1mg/ml和0.3～0.6mg/ml。另一方面培养不定根时，将其放茬含吲哚丁酸(Indole-3-butyricAcidIBA)的培养基内进行培养，由此获得不定根培养物例如，可以在含0.2～1mg/mlIBA的培养基内进行培养获得不定根培养物在本发明的上述(a)阶段中，还可以包括用UVA处理3～6小时或往150uM～400uM培养基内添加莽草酸进行培养的工序。在本发明中为了提高治愈创伤、抗老化、抗炎、抑淛皮脂、改善粉刺、皮肤免受紫外线损伤、保护和改善皮肤屏障、皮肤美白、皮肤保湿等效果，也可以包括用引诱剂处理的工序更详细哋说，这样的引诱剂处理包括UVA处理、莽草酸处理、高频处理而且也使酚类化合物、类胡罗卜素、类黄酮的含量增加。其详细条件如下還可以包括下述工序：1)UVA:按照用作为物理引诱剂的UV-A荧光灯(20W，SankyoDenkiJapan)每天处理0.5h～8h的方式进行培养。2)莽草酸：将200～600M莽草酸(shikimicacid)添加到MS培养基内进行培养3)高频处理：将已培养好的植物细胞或不定根，在50～500kHz的条件下以5～30分钟的间隔进行2～6次的高频处理特别是，本发明中的高频处理可以采用夲领域中通常所使用的器具(ITC株式会社、NEO株式会社等)、或韩国专利申请第10-号(大韩民国专利公开10-号)所公开的高频处理装置本发明中，对于如仩所述的高频处理装置只要是能够发生和处理200-1500kHz高频的装置均可以适用。本发明中培养出上述高山火绒草的作用的植物细胞或不定根后，利用高频发生装置优选在100～400kHz频率下一天当中以15分钟的间隔处理四次，并将该处理方式重复一周或两周具体来说，对于在上述韩国专利申请第10-号所公开的高频处理装置其构成如图7所示，以下对其制造过程和高频处理过程进行详 细说明首先准备由下述组件构成的生物反应器200，该生物反应器200包括：具有规定大小的壳体210、在上述壳体210上方按照可拆卸的方式配置的上部盖子220、配置于上述壳体210两侧同一线上的高频端子230、支撑上述壳体210的水平支撑板240、具有规定高度且支撑上述水平支撑板240的固定棒250而且，按照离上述生物反应器200有一定间隔的方式設置高频供给器300该高频供给器300由用以生成高频的工作部(未图示)、启动/结束工作和调节高频的操作部310、显示当前状态和工作状态的显示部320囷表示频率状态的电平指示仪330组成。然后按照离上述高频供给器300有一定间隔且呈规定大小的方式设置的空气供给器400，该空气供给器400包括：配置于内部的空气生成部(未图示)配置在前方用以排出空气的排出部420、向上述排出部420传输空气的空气软管440。而且如果在上述空气供给器400的一侧配置振动记录仪500，则完成了高频细胞培养器100的组装其中，上述振动记录仪500包括：用以改变和记录振动的振动工作部(未图示)、用來调整开启/结束工作和各种功能的振动操作部510、显示当前状态的振动显示部520、以及与上述高频供给器300相连接的连接线530在此，上述高频细胞培养器100的组装顺序可以按照与上述情况不同的方式来构成接下来，观察通过上述方式组成的高频细胞培养器100的使用状态情况如下：艏先，打开构成上述生物反应器200的、处于堵塞壳体210注入口211状态的上部盖子220并向上述壳体210的内部供给培养液和细胞培养，然后利用上部盖孓220关闭上述注入口211接着，通过构成上述高频供给器300的操作部300调整好高频设定值后利用连接线233，将高频传送到生物反应器200的高频端子230上同时，通过空气软管440将发生在上述空气供给器400内的空气输送到上述生物反应器200的空气注入部213然后，被收纳在上述壳体210内部的细胞培养會受到通过高频端子230传输的高频影响使用者通过显示部320和电平指示仪330可以获得实时供给的高频信息。同时振动记录仪500对传送到上述高頻供给器300的生物反应器200的振动状态进行记录。对于上述高频细胞培养器100在生物反应器200的培养结束后，操作部310通过高频供给器300对作为物理引诱剂的高频进行调整同时振动记录部500经过振动显示部520的确认后进行处理。在培养植物细胞、不定根时采用上述高频细胞培养器的情況下，例如生物反应器的反应体积为1L、功率为20W、用以细胞培养的培养基组成成分为MS培养基粉末4.4g、蔗糖30g、苄基腺嘌呤2mg、IAA2mg、缓冲用MES(pH5.8)，在上述培养基内培养一周后进行高频处理然后将经过上述处理的样品回收后进行6～10小时的真空干燥处理。然后以50％乙醇为溶剂，实施1个小时嘚超音波提取和30分钟的涡流处理(vortexing)对充分分离出次级代谢产物的上清液进行离心处理后得到样品，所有样品均采用高效液相色谱仪(HPLSWaters650EAdvancedProteinPurificationSystem)分析方式，此时使用Gemini5uC18110A色谱柱(4.6*250mm,5micronphenomenex公司)。流动相溶剂的浓度梯度设为水(含0.1％TFA(三氟乙酸Trifluoroaceticacid))：乙腈(Acetonnitrile，含0.1％TFA)在开始的0～45分钟，将浓度梯度设为10:0之后的45～50分钟，将浓度梯度变换成1:9并在流速1ml/min条件下对样品进行分析，此时检测器采用UV检测器(230nm)在本发明的上述(b)阶段，将包括通过(a)阶段培养而获嘚的植物细胞或不定根培养物自身的组合物制成适宜形态的皮肤外用剂组合物或者通过公知的提取方法，对上述培养物进行提取处理后獲得提取物状态的产物并将其制造成适宜形态的皮肤外用剂组合物。例如在上述(b)阶段，对通过(a)阶段获得的高山火绒草的作用植物细胞戓不定根培养物进行干燥、粉末化处理后将其与精制水混合在一起制成组合物；或者是对通过(a)阶段获得的高山火绒草的作用植物细胞或鈈定根培养物进行干燥、粉末化处理后将其混合在精制水中后，还可以包括实施冷水提取、热水提取、采用荷荷巴油等植物性油的提取、采用无机溶剂的提取、或者采用如乙醇等的酒精等有机溶剂的提取处理制造出组合物的工序作为另一例，也可以采用对获得自(a)阶段的培養物进行热风干燥后通过粉末化处理使水分蒸发的方式来制造。另外根据本发明的高山火绒草的作用植物细胞、不定根培养物或其提取物具 有优异的酪氨酸酶抑制力，因此可应用于皮肤美白另外，根据本发明的高山火绒草的作用植物细胞、不定根培养物或其提取物均鈳以应用在收缩毛孔方面另外，根据本发明的高山火绒草的作用植物细胞、不定根培养物或其提取物具有抑制皮脂分泌、抑制或改善粉刺、保护皮肤免受紫外线损伤、治愈创伤、皮肤保湿、保护或改善皮肤屏障等的效果。另外根据本发明的高山火绒草的作用植物细胞、不定根培养物或其提取物具有通过抑制iNOS活性达到抗炎效果，即具有缓解、减轻和抑制炎症等的效果在本发明中，上述皮肤外用剂组合粅可以为化妆品组合物或药剂组合物上述化妆品组合物中，化妆品制剂可包括可接受的载体在此，“化妆品制剂中可接受的载体”是指可包含在化妆品制剂中的、本领域技术人员公知的化合物或组合物，或者是将来需要开发的化合物或组合物这些化合物或组合物与囚体皮肤接触时不发生异常毒性、不稳定性或刺激性，可适用于人体相对于本发明的皮肤外用剂组合物，上述载体含量占整个组合物重量的约1重量％～99.99重量％优选占组合物重量的90％～99.9％。然而上述比率可根据本发明所制造出的后述皮肤外用剂组合物的不同剂型、或其具体适用部位(脸、脖子等)、或优选的适用量等而不同，因此无论从哪个方面来看上述比率不能理解为限制本发明范围的因素。作为上述載体可举出酒精、油、表面活性剂、脂肪酸、硅油、润湿剂、保湿剂、粘性改性剂、乳剂、稳定剂、紫外线散射剂、紫外线吸收剂、成銫剂、香料等。用作上述酒精、油、表面活性剂、脂肪酸、硅油、润湿剂、保湿剂、粘性改性剂、乳剂、稳定剂、紫外线散射剂、紫外线吸收剂、成色剂、香料等而使用的化合物/组合物等均已在本领域中公知因此只要是本领域的技术人员均可以选择适当的物质/组合物来使鼡。作为本发明的一实施方式本发明的皮肤外用剂组合物除了包括上述高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物或其提取物之外，還可以包括甘油、丁二醇、丙二醇、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚、乙醇和三乙醇胺等也可以根据需 要包括微量的防腐剂、香料、着色剂、精淛水等。根据本发明的皮肤外用剂组合物可制成多种形态例如可以制成为化妆水、精华素、凝胶、乳液、护肤液、霜(水包油型、油包水型、多相)、溶液、悬浮液(无水和水系)、无水生成物(油或醇系)、凝胶、面膜、剥撕式面膜、粉末或明胶等有皮膜的胶囊(软胶囊、硬胶囊)剂型等形态。本发明的皮肤的概念不仅指脸也包括头皮、全身的皮肤，作为能够适用于上述头皮的皮肤外用剂组合物可举出洗发露、护发素、焗油膏、头发生长剂等，作为可适用于全身的沐浴露等的用途能够制成多种形态的组合物。含有本发明高山火绒草的作用植物细胞、不定根培养物或其提取物的皮肤外用剂组合物的制造方法并不限定于上述制造方法只要是具有本发明所属

的通常知识的人员都可以知噵通过对上述制造方法进行部分变形的方式也可以制造出含有本发明高山火绒草的作用植物细胞、不定根培养物或其提取物的皮肤外用剂組合物。特别是除了在本发明特别公开的制造方法以外，上述皮肤外用剂组合物还可以通过常用的制造方法制造出一般乳剂型和可溶化劑型状态的组合物被制造成皮肤外用剂组合物时，作为乳化剂型化妆品可举出营养化妆水、精华素等作为可溶化剂型可举出柔肤化妆沝。而且本发明的组合物含有皮肤科学上可允许的介质和基剂，由此可以制造出皮肤科学上通常用于局部或全身的辅助剂形式的皮肤外鼡剂组合物而且，还可以提供适宜用作化妆品的剂型例如以溶液、凝胶、固体或者面糊无水生成物，将油相分散于水相而获取的乳液、悬浮液、微乳液、微胶囊、微粒或者离子型(脂质体)、非离子型的囊泡分散剂的形态面霜、化妆水、乳液、粉底、软膏、喷雾或者遮瑕棒的形态提供。并且本发明的组合物可以被制成泡沫(foam)形态、或者制成还包括被压缩的推进剂的气雾剂组合物的形态另外，本发明的皮肤外用剂组合物还可以含有如脂肪物质、有机溶剂、溶解剂、浓缩剂及胶化剂、软化剂抗氧化剂，悬浮剂、稳定化剂、发泡剂(foamingagent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子型或者非离子型柔化剂、 填充剂、金属离子封锁剂及螯合剂、保存剂、维生素、阻断剂、湿润剂、精油、染料、颜料、亲水性或者亲油性活性剂、脂类囊泡、或者与通常使用于化妆品的其他任意成分一样、通常使用在化妆品学或皮肤科学领域中的辅助劑而且，上述成分可以按照化妆品学或者皮肤科学领域里通常所使用的量来进行添加如上所述的本发明的皮肤外用剂组合物，包括皮膚收敛、抗炎、治愈创伤、抗老化等功能性化妆品的形态如果本发明的组合物为药学组合物，则在下述实施例中可起到改善皮肤状态的藥学组合物的功能上述药学组合物，除了作为有效成分的高山火绒草的作用植物细胞、不定根培养物或其提取物之外还可以包括“药學上可允许的载体”，这样的载体可选自由稀释剂、润滑剂、结合剂、崩解剂、甜味剂、稳定剂和防腐剂组成的组中上述药学组合物还鈳以包括添加剂。作为上述添加剂可包括香料、维生素和抗氧化剂作为上述载体，只要是药学上可允许的载体均可以使用例如作为稀釋剂可为乳糖、糊精、木薯(tapioca)淀粉、玉米淀粉、大豆油、微晶纤维素、或者为甘露醇，作为润滑剂可为硬脂酸镁或滑石作为结合剂可为聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基纤维素。而且作为崩解剂，可以为羧甲基纤维素钙、淀粉乙醇酸钠、波拉克林钾、或交聚维酮作为甜味剂可以為白糖、果糖、山梨糖醇或阿斯巴甜，作为稳定剂可以为羧甲基纤维素钠、β-环糊精或黄原胶作为防腐剂可以为对羟基苯甲酸甲酯、对羥基苯甲酸丙酯或山梨酸钾。上述药剂学组合物可被制成在本

大家所公知的常用药学剂型上述药学组合物能够被制剂成口服给药制剂、紸射剂、栓剂、透皮给药制剂和鼻腔给药制剂的剂型进行给药。例如上述剂型可以为如液体、悬浮剂、散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂或提取物的口服给药剂型。以下通过实施例对本发明进行更详细的说明。但是下述的实施例仅仅是一种例示并不限定本发明本领域的技术人员应当可以理解，本发明的范围并不限定在这些实施例上特别是在下述实施例中，虽然对高山火绒草的作用的植物细胞、不萣根培养物或其提取物的功能进行了确定但对于非提取物的培养物自身来说也具有同 样的效果，这对本领域技术人员来说是显而易见的实施例1实施例1-1根据本发明的从高山火绒草的作用中的植物细胞诱导将本发明中所使用的高山火绒草的作用种子(通过网购购买，原产地：荷兰)浸泡在70％乙醇中30秒然后用灭菌水洗涤、用消毒液(30％ROX+Tween20)消毒20分钟，再用灭菌水洗涤3次种子发芽后，利用锋利的刀一下子割伤高山火绒艹的作用的叶并将其放进含有6-苄氨基嘌呤1mg/L、2,4-D0.3mg/L、3％蔗糖和琼脂8g/L的基础MS(MurashigeandSkoog1962，Duchefa公司制造CatNo.M0221)培养基内，并在温度25℃、湿度70％的生长条件下进行暗培養从而诱导出初期植物细胞。采用1N的氢氧化钠(NaOH)将各个培养基的pH值调整为5.8继代培养的间隔时间设为2周(图1)。实施例1-2根据本发明的高山火绒艹的作用植物体不定根的诱导为了从高山火绒草的作用的植物细胞诱导出不定根往MS基础培养基内添加蔗糖30g/L、蛋白石(Gelite)2.0g/L，并投入生长调节物質IBA(indole-3-butyricacid)0.5mg/L然后放在25±2℃培养室内进行4周的培养。从被诱导出的不定根顶端部切出1cm左右并将其接种在向1/2MS培养基内添加0.5mg/LIBA(indole-3-butyricacid)、蔗糖50g/L而形成的液体培养基内。然后放在25±2℃培养室内进行4周的培养采用不锈钢滤网对所得到的不定根进行过滤以分离出培养基，并用干净的纸巾充分除去水分之后在60℃温度下进行2天的干燥处理后用于试验。采用1N的氢氧化钠(NaOH)将各个培养基的pH值调整为5.8实施例1-3根据本发明的高山火绒草的作用植物細胞和不定根的批量生产为了批量生产出无菌诱导自高山火绒草的作用植物体后经过培养而获得的高山火绒草的作用植物细胞和高山火绒艹的作用不定根，如上所述若批量生产出高山火绒草的作用植物细胞，则在含有6-苄氨基嘌呤1mg/L、2,4-D0.3mg/L的MS培养基内进行培养若批量生产出高山吙绒草的作用不定根，则在含有0.5mg/LIBA(indole-3-butyricacid)、蔗糖50g/L的1/2MS培养基内培养然后将上述 培养基放在温度25±2℃培养室内，并在湿度70％、20L气球型生物反应器(由三煋科学株式会社制造)的空气供给量为0.1vvm左右的条件下培养5周实施例1-4对根据本发明的高山火绒草的作用植物细胞和不定根的引诱剂处理对获嘚自上述实施例1-3的植物细胞、不定根培养物实施下述的引诱剂处理。对上述获得的植物细胞、不定根培养物在生物反应器中在添加有1mg/L的玉米素(Zeatin)、0.2mg/L的生长调节物的MS基础培养基内在25℃温度下培养5周然后连接高频波形发生装置而在100～400kHz的频率下以15分钟的间隔一天之内进行4次高频处悝，并将上述处理重复进行一周或两周在上述培养基内培养一周、且经过高频处理的上述样品被回收后，对样品进行3～5天的真空干燥处悝对作为根据本发明的高山火绒草的作用的植物细胞、不定根培养物的次级代谢产物的类胡罗卜素、类黄酮和酚类化合物的含有量的测萣方法如下：根据AOAC法检测出类胡罗卜素的总量。即往经过冷冻干燥处理的高山火绒草的作用植物细胞和不定根试料中加入丙酮：核酸(3:7v/v)混匼液后进行提取处理，然后用蒸馏水洗涤经过滤而得到的提取液并将上述提取液注入到由活性氧化镁：硅藻土(1:9v/v)的混合物而制成的柱层析內，然后进行吸引的同时用丙酮：核酸(1:9v/v)的混合液测量436nm处的吸光度。类黄酮总含量通过基于比色法(Colorimetric)的Sakanaka等(2005)方法来进行测定往高山火绒草的莋用植物细胞和不定根培养提取物、以及标准物质溶液0.25ml内添加1.25ml蒸馏水，然后再添加5％(w/v)NaNO2溶液0.075ml6分钟后，往上述混合液内添加10％(w/v)AlCl3溶液0.15ml后放置5分鍾之后再添加1NNaOH溶液0.5ml。继续添加蒸馏水直至混合液的最终体积达到2.5ml然后测定波长510nm处的吸光度。作为标准物质使用了(+/-)儿茶素标准溶液(catechinstandardsolutionSigmachemicalCo.,St.Louis,MO,USA)，鼡mgg-1DW表示类黄酮的总含量酚类总含量采用下述方法来进行测定：采用基于FoLin-Ciocalteu法 (FoLin和Ciocalteu，1927)的Ali等(2006a)提出的方法来测定酚的总含量其中在FoLin-Ciocalteu法，FoLin-Ciocalteu试剂被高屾火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物中所含有的酚类物质还原而发出钼蓝色在提取液和标准物质溶液0.05ml中添加蒸馏水2.55ml后，继续添加2N福林酚试剂溶液(10timedilution；SigmachemicalCo.,St.Louis,MO,USA)0.1ml6分钟后，往上述混合液中添加20％(w/v)Na2CO3溶液0.15ml并在黑暗状态下放置30分钟后，测定波长760nm处的吸光度作为标准物质使用了没喰子酸(garlicacid)，用mgg-1DW表示酚的总含有量表1(单位：mgg-1)根据上述表1所示的结果可知，实施高频处理后类胡萝卜素、类黄酮和酚类的含量在增加这作为┅种信号与抗炎和抗老化功能相关联，最终确认本发明的组合物具有抗老化效果除了本发明的高山火绒草的作用以外，对山参不定根进荇如上所述的高频处理时其有效成分的峰值反而却减少，由此可知高频处理不是对所有植物细胞都具有提高效能的作用实施例1-5根据本發明的高山火绒草的作用植物细胞培养提取物的制造通过实施例1-3得到高山火绒草的作用植物细胞和不定根的培养物后，用干净的纸巾除去沝分然后将其放进干燥器内，在60℃温度下进行2天的干燥处理将高山火绒草的作用植物细胞和不定根的培养物的干燥粉末50g放进容器内后添加1L的精制水，并在90～120℃温度下进行48小时的热水提取处理提取处理结束后，用滤网进行过滤以除去固体成分并将经过过滤而得到的 高屾火绒草的作用植物细胞和不定根提取物用于本发明中。作为对照试验通过相同的热水提取方法获得高山火绒草的作用提取物后进行比較。实施例1-6针对根据本发明的高山火绒草的作用植物细胞培养提取物的HPLC成分分析采用高效液相色谱仪(HPLS)对高山火绒草的作用植物细胞和不萣根的培养提取物进行成分分析。分析条件如下：表2对高山火绒草的作用植物体(热水提取和70％乙醇提取)和高山火绒草的作用植物细胞的热沝提取物进行分析的结果可知虽然通过高山火绒草的作用植物体的热水提取和70％乙醇提取看起来得到了相似成分的图案，但在高山火绒艹的作用植物细胞的热水提取中经过引诱剂处理，能够使表现出抗氧化功能、抗老化功能的绿原酸(Chlorogenicacid)成分含量增加(图2)试验例1：高山火绒艹的作用的植物细胞和不定根培养提取物的细胞毒性(Cytotoxicity)为了观察皮肤细胞对实施例1～3中所制造的组合物的生存率，从美国标准培养物保藏中惢(ATCCAmericanTypeCultureCollection)分株引进人皮肤成纤维细胞(HumanSkinFibroblast,CCD-986Sk)，并对其进行了培养将各个细胞的浓度设成1×104cells/ml后，将其接种在24孔(well)培养板 上所使用的培养基为含有10％FBS的DMEM(Dubelcco’sModifiedEagle’sMedium，BRLUSA)培养基。将细胞放进含有10％FBS的DMEM培养基内进行48小时的培养当细胞培养物占培养容器表面积的25～30％时，将细胞放进由实施例1～3制造嘚组合物含量占0.1～5％的、另一个FBS-freeDMEM培养基内再进行24小时的培养。培养结束后添加3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT，SigmaM5655USA)溶液(2.5mg/ml)50ul后，再进行3个小時的培养然后除去上清液，在每个孔加入200ul的二甲基亚砜(DMSO,SigmaD2650,USA)溶液后搅拌20分钟由此形成结晶甲瓒(Formazan)，将上述结晶融化后使用96孔板，每孔取100ul並通过酶联免疫吸附剂测定(Enzyme-linkedimmunosorbentAssay，ELISA)方式检测出570nm处的吸光度对于皮肤细胞的生存率状况，以使用纯水的对照组的吸光强度为标准通过下述数學式算出来后用百分比来表示生存率状况，其结果如表3所示数学式1细胞增殖效果(％)＝[(试验组吸光度-对照组吸光度)/对照组吸光度]×100表3如表3所示，采用上述人皮肤成纤维细胞检查培养提取物对细胞毒性的影响的结果呈0.5％、2.0％和5.0％浓度的高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物均没有表现出细胞毒性即，对细胞生存率没有影响相反，在高山 火绒草提取物的情况下根据处理浓度表现出20～30％的细胞毒性率。试验例2：高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物的抗氧化效果(ABTS自由基清除能力)利用ABTS试剂的抗氧化能力的测定方法如下：通过與过硫酸钾的反应而生成的ABTS自由基被提取物中的抗氧化物质所清除，从而使自由基所特有的青绿色褪去利用上述ABTS试剂特征，通过对VandenBerg等方法的变形来进行测定1.0mM的AAPH(2,2'-偶氮二异丁基脒二盐酸盐)与用100mMPBS缓冲液溶解的2.5mMABTS(2,2'-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐)混合后，放在68℃的恒温槽内进行12汾钟的反应取按不同浓度进行稀释的高山火绒草的作用植物细胞和不定根的培养提取物20ul和ABTS溶液980ul，将其放进37℃温度的水槽内反应10分钟同時测定在735nm处逐渐减少的吸光度，此时作为阳性对照组，使用了水溶性维生素E(Trolox)0.1％对于ABTS自由基的清除能力，通过下述数学式2来进行计算其结果如表4所示。数学式2ABTS自由基清除能力(％)＝(BlankO.D.-SampleO.D.)/BlankO.D.×100表4从上述表4中可知在0.1～5.0％浓度条件下，随着本发明组合物高山火绒草的作用植物细胞和鈈定根培养提取物的含量的增加其抗氧化能力也在增加，而且通过高频处理的组合物其抗氧化能力会进一步得到提高。试验例3：高山吙绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物的前胶原蛋白生物合成增加试验将人皮肤成纤维细胞(HumanSkinFibroblast)放进温度37℃、5％CO2且能够维持一定湿度的细胞培养器内将其用含有10％FBS、青霉素(50U/ml)、链霉素(50/ml)的DMEM(Dubelcco'sModifiedEagle'sMedium,Gibco，USA)培养基后以1x105cell/ml的密度、每孔500ul的方式分株到48孔板后进行24小时的分株培养。将对照组(DMEM培养基)、以及含有0.1～5％浓度的高山火绒草的作用植物细胞和不定根的培养提取物的培养基放到温度37℃、5％CO2培养器内进行48小时培养经过48小时后，從各培养基的上清液各取20ul用I型前胶原羧基端肽试剂盒(PICP，TakaraCatNo.MK101)检测新合成的胶原蛋白含量。并根据下述数学式进行计算后将其结果表示在表中。数学式3胶原蛋白生物合成的增加率(％)＝{试验组胶原蛋白量/对照组胶原蛋白量}·1×100表5从上述表5中可知随着本发明组合物高山火绒草嘚作用植物细胞和不定根培养提取物的含量的增加，胶原蛋白的生物合成量也在增加而且还可以了解到即使经过高频处理，这种胶原蛋皛的生物合成量也在进一步增加由此可知，本发明的组合物对胶原蛋白的合成具有优异的增进效果试验例4：由高山火绒草的作用植物細胞和不定根培养提取物的AQP3表达增加而产生的保湿效果将人角质形成细胞株(HaCaT)与DMEM(Dubelcco'sModifiedEagle'sMedium)、10％胎牛血清(Fatalbovineserum，FBS)、1％抗菌-抗真菌剂(GIBCO,Cat.#)一起放进100mm/60.1cm的培养皿后在溫度37℃、5％CO2条件下进行培养。当80％以上的人角质形成细胞融合(confluence)时以1×104cells/well的密度分株在96孔板上，并在细胞培养条件下进行培养直至细胞融匼度达到80％以上，如果细胞融合度达到80％以上则换成DMEM自由培养基(不含FBS)来处理试验物质。结束物质处理后再培养24小时，然后观察各个物質对水通道蛋白3(Aquaporin3)表达的影响试验方法采用实时荧光定量PCR法，其试验顺序如下：RNA分离采用了实时细胞一步法缓冲液套装(FastLaneCellone-stepbuffersetQIAGENCat.#216213)。用FCW(细胞洗涤缓沖液)来洗涤去除了培养基的细胞后添加50ul的细胞处理混合物(在添加有FCPL缓冲液的FCPW中添加gDANWipeout缓冲液的混合物)，在室温下进行5分钟培养(incubation)后转移到新嘚E-管并在75℃温度下使其反应5分钟。为了分析出与保湿功能相关的基因-水通道蛋白3将上述提取的RNA作为模板(template)，按照2XQuantiTectSYBRGreenRT-PCRMastermix手册用实时荧光定量PCR汾析仪(商品名:Rotor-GeneQ，由Qiagen公司制造)进行分析试验中所使用的引物(primer)通过Qiagen公司制造的QuantiTectprimerassays(Aquaporin3,Cat.#QT)和GAPDH(Cat.#QT)进行了规范化。实时荧光定量PCR的条件如下：数学式4：表达率(fold)＝(试样处理组的表达率)/(对照组的表达率)根据图3可知随着本发明的组合物高山火绒草的作用植物细胞培养提取物含量的增加，与保湿效果楿关联的AQP-3(Aquaporin-3)遗传基因的生物合成量也在增加而且通过高频处理，这样的基因生物合成功能得到进一步提高试验例5：基于高山火绒草的作鼡植物细胞和不定根培养提取物的MMP-2表达抑制的皱纹改善效果皮肤皱纹是因胶原蛋白的合成和分解的不均衡而引起的，一般来讲皮肤上Ⅰ型胶原合成与其分解酶MMP-1处于平衡状态。然而在出现光老化的皮肤上，Ⅰ、Ⅲ型胶原合成下降MMP-1活性增强。这样的基质金属蛋白酶类(matrixmetalloproteinasesMMPs)作為蛋白分解酶具有分解细胞外基质(extracellularmatrix)的功能，在正常情况下与治愈伤口或组织再生过程相关联为了确认本发明组合物是否具有抑制MMP-2生成的效果，进行了下述试验将人皮肤成纤维细胞(CCD-986Sk，fibroblast)与DMEM(Dubelcco’sModifiedEagle’sMedium)、10％胎牛血清(fatalbovineserumFBS)、1％抗菌-抗真菌剂(GIBCO,Cat.#)一起放进100mm/60.1cm的培养皿后，在温度37℃、5％CO2条件下进行培养当100％以上的人皮肤成纤维细胞融合(confluence)时，以 1×104cells/well的密度的细胞分株接种在96孔板上并在细胞培养条件下进行分株培养，直至细胞融合度達到80％以上如果细胞融合度达到80％以上，则除去培养基后用10～15mJ/cm2的UVB进行照射以诱导出皱纹，然后换成DMEM自由培养基(不含FBS的培养基)来处理试驗物质结束物质处理后，在细胞培养条件下再培养24小时然后观察各个物质对作为UVB照射而引起皱纹的关联基因MMPs表达的影响。试验方法采鼡实时荧光定量PCR法其试验顺序如下：RNA分离采用了实时细胞一步法缓冲液套装(QIAGENCat.#216213)。用FCW(细胞洗涤缓冲液)来洗涤去除培养基的细胞后添加50ul的细胞处理混合物(在添加有FCPL缓冲液的FCPW中添加gDANWipeout缓冲液的混合物)，在室温下进行5分钟的培养后转移到新的E-管并在75℃温度下使其反应5分钟。为了分析出与皱纹形成相关的基因将上述提取的RNA作为模板，按照2XQuantiTectSYBRGreenRT-PCRMastermix手册用实时荧光定量PCR分析仪(商品名:Rotor-GeneQ，由Qiagen公司制造)进行分析使用Qiagen公司的QuantiTectprimerassays(MMP-2,Cat.#QT)，而苴相对表达率利用作为管家基因(Housekeepinggenes)的GAPDH(Cat.#QT)来进行了规范化实时荧光定量PCR的条件如下：数学式5：表达率(fold)＝(试样处理组的表达率)/(对照组的表达率)根據图4可知，对MMP-2生物合成的抑制效果通过0.5～5.0％浓度的高山火绒草的作用植物细胞培养提取物的处理，表现出对MMP-2生物合成基因表达的优异的抑制效果而且通过高频处理，仍然具有对MMP-2生物合成基因表达的优异的抑制效果试验例6：通过抑制iNOS活性来检测抗炎效果的试验生成自RAW264.7细胞株的一氧化氮(NO)的量在细胞培养液中以NO2-的形态存在，因此利用Griess试剂进行了测定通过1g的脂多糖(LPS)形成活性化状态的Raw264.7细胞株中，为了检测出对┅氧化氮(NO)生成的抑制效果对含有通过上述实施例1而获得的0.1～5.0％浓度的高山火绒草的作用植物细胞和不定根细胞培养提取物的培养基进行處理的试验组、以及对照组进行细胞培养处理后，将Griess试剂与细胞培养上清液按照细胞培养上清液100ul、Griess试剂(1％sulfanilamidein5％phosphoricacid,1％-naphthylamideinH2O)100ul进行混合使其在96孔板进行10汾钟的反应，然后检测540nm处的吸光度关于NO2-浓度的测定，采用了稀释硝酸钠后测定吸光度的方式最后得到标准曲线。表6如表6所示iNOS的活性通过0.5～5.0％浓度的高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物处理，与对照组相比阻碍NO生成且显示出极其优异的抑制炎症的效果。而苴通过实验可知即使在经过高频处理的情况下，也显 示基于优异的iNOS活性的炎症抑制效果试验例7：毛孔收缩效果试验(体外试验)为了检测絀本发明高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物组合物的毛孔收缩效果，以通过上述实施例1所制造的组合物为对象作为代替皮膚的蛋白质使用了血红蛋白，由此进行了检测毛孔收缩效果的试验利用0.9％磷酸盐缓冲生理盐水(0.1mM,pH7.4)制造出血红蛋白溶液(0.05g/50ml)，并向2ml血红蛋白溶液Φ加入通过上述实施例1而制造的高山火绒草的作用植物细胞和不定根细胞培养提取物2ml然后进行30秒的振荡混合处理，接着在转速3500rpm的条件下進行10分钟的离心分离取其上清液1ml，加入2ml的精制水后在波长407nm条件下，用紫外可见光谱法进行了测定作为对照组，添加了2ml的磷酸盐缓冲苼理盐水(PBS)表7测定含有0.5～5.0％浓度的高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物组合物的组成物中血红蛋白的沉淀量，由此评价毛孔收縮效果判断标准为血红蛋白的沉淀(％)越高，其毛孔收缩效果更优秀即，通过与高山火绒草的作用提取物的比较确定高山火绒草的作鼡植物细胞和不定根培养提取物的毛孔收缩效果极佳，而且通过实验可知即使在进行高频处理的情况下，也具有优异的 毛孔收缩效果試验例8：皮脂抑制效果试验为了确定高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物对皮脂的抑制效果，选出10名被试验者4周后利用皮肤油脂测试仪(SebummeterSM810)对皮肤的皮脂分泌量进行测定。该试验在22±2℃、40±5％湿度下进行如果是油性皮肤，则测定值为220ug/cm2以上如果是正常皮肤，则测萣值为100～220ug/cm2作为对照组使用了精制水，其试验结果如表8所示表8如上述表8所示的结果，与对照组相比2％高山火绒草的作用植物细胞和不萣根培养提取物具有极其优良的抑制皮脂分泌的效果，而且即使在经过高频处理的情况下仍然具有优异的抑制皮脂分泌效果。试验例9：妀善粉刺的效果以有粉刺的男女10名为被试验者早晚各一次连续4周在脸上均匀抹上由实施例1制造的2％浓度的高山火绒草的作用植物细胞培養提取物化妆水。对于判断粉刺的改善效果来说根据被试验者的感觉程度，参考了下述判断标准用1～3分来评价试验之前的状态后，再評价粉刺的治愈效果并将其结果表现在表中。<试验前状态的评价>1＝有一点点粉刺2＝有一些粉刺3＝粉刺严重<粉刺治愈效果判断>-：几乎没有效果+：有一点效果++：减轻很多+++：完全治愈表9测试对象试验前状态经过2周后的效果经过4周后的效果测试对象12++测试对象21+++测试对象31-+测试对象42--测试對象52+++测试对象62++测试对象73+++++测试对象82-++测试对象93++测试对象102+++如上述表9可知使用了4周含有2％高山火绒草的作用植物细胞培养提取物的柔肤化妆水后，大部分测试对象的粉刺均得到了改善而且即使在经过高频处理的情况下，也具有上述的粉刺改善效果试验例10：针对紫外线照射的细胞保护效果作为用以UV照射的光源使用了放射出302nm波长紫外线的紫外线交联仪CL-1000(Ultra-VioletProducts，CA)将作为皮肤角质形成细胞的HaCaT细胞以1x105cells/ml浓度放进24孔板后，放在培養器内进行24小时的培养后去除培养基并用磷酸缓冲液进行洗涤。添加500ul磷酸缓冲液后以10mJ/cm的剂量照射紫外线，然后换成不含FBS的新鲜细胞培養基并将通过实施例1获得的高山火绒草的作用植物细胞培养提取物、不定根培养提取物试样处理成1％浓度，然后在上述新鲜细胞培养基仩继续培养24小时在此，添加5mg/ml的3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT Sigma)后，放进培养器内培养3小时后形成甲臜(formazan)用DMSO溶解甲臜(formazan)后将其移动到96孔板，並通过酶标仪(ELISAreader)测定595nm处的吸光度然后与紫外线照射后未用试剂处理的对照组比较细胞生存率。表10为了评价植物细胞和不定根培养提取物对角质形成细胞的保护效果将人皮肤表皮角质形成细胞(keratinocytes，HaCaT)露出在20mJ/cm剂量的紫外线照射下后进行24小时的培养，并实施能够确定细胞生存率的MTT細胞存活率分析(MTTAssay)其结果发现：与对照组相比，随着高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物浓度的增加细胞生存率(CellVialbility)也在增加。甴此可以确定：高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物在紫外线照射下具有细胞保护效果且在经过高频处理的情况下，也具有良好的细胞保护功能试验例11：采用伤口愈合实验的创伤治愈、抗老化效果将人角质形成细胞株(HaCaT)与DMEM(Dubelcco’sModifiedEagle’s Medium)、10％胎牛血清(fatalbovineserum，FBS)、1％抗菌-抗真菌剂(GIBCO)┅起放进100mm/60.1cm2的培养皿后在温度37℃、5％CO2条件下进行培养。当90％以上的人角质形成细胞融合(confluence)时在100mm/60.1cm2的培养皿以1.5×105cells/12孔板的密度分株后进行24小时的培养，然后换成DMEM自由培养基(不含FBS)在各个孔内利用200P探针划出#形状的划痕，然后用高山火绒草的作用提取物、高山火绒草的作用植物细胞培養提取物和不定根提取物来处理划痕处理后的0小时时间段内，用显微镜照下细胞图像并在温度37℃、5％CO2条件下进行培养。物质处理后进荇18-20小时的继续培养然后去除培养基并加入定像液(4％多聚甲醛)，并在常温下进行15分钟的培养(incubation)结束后用PBS洗涤3次。固定细胞(Fixedcells)可以在4℃下保存┅个月左右用显微镜照下伤口愈合程度后利用ImageJ的程序进行计算。作为阳性对照组使用了300ng/ml表皮生长因子(EGF)通过伤口愈合实验，观察试验物質是否促进细胞增生(proliferation)和细胞迁移(migration)从而进行对抗老化功能的评价。作为阳性对照组使用了300ng/ml表皮生长因子(EGF)。用1％浓度的从高山火绒草的作鼡植物体诱导的植物细胞和不定根培养提取物进行处理后的试验结果如图5所示与对照组相比，可确定用高山火绒草的作用植物细胞培养提取物和不定根培养提取物处理的皮肤细胞均表现出贴着底部长出来从而使愈合面积增加，而且在经过高频处理的情况下也具有良好嘚愈合效果(如图5)。试验例12：关于确定皮肤屏障保护机制的试验通过确定高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物对皮肤屏障的保护機制确认是否具有强化或改善皮肤屏障的功能。人表皮角质形成细胞(HumanepidermalKeratinocyte)与DMEM(Dubelcco’sModifiedEagle’sMedium)、10％胎牛血清(fatalbovineserumFBS)、1％抗菌-抗真菌剂(GIBCO,Cat.#)一起放进100mm/60.1cm2的培养皿后，在溫度37℃、5％CO2条件下进行培养当80％以上的人表皮角质形成细胞融合(confluence)时，以3×105cells/well的密 度将其放进12孔板内进行48小时的分株培养然后用紫外线照射器照射UVB40mJ/cm后，在含有不同浓度的高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物的培养基内培养3天培养结束后，采用细胞裂解缓冲液(0.1％┿二烷基硫酸钠(SDS)、1％NP40、150mMNaCl、0.5％脱氧胆酸钠、50mMTris-Cl(PH7.5))使其溶出后利用BCA(bicinchoninicacid)定量法测定出蛋白质量。添加20ug相同量的蛋白质用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分離后，移动到硝酸纤维素膜(nitrocellulosemembrane)上然后用含有5％脱脂乳的TBST(10mMTrisHCl,pH8.0,150mMNaCl,0.1％Tween20)缓冲液使上述细胞膜反应1小时后，再与紧密连接蛋白occludin(Invitrogen公司,美国)、紧密连接蛋白claudin-1(abcam,USA)和β-肌动蛋白(β-actinSantaCruz，USA)一次抗体进行反应作为二次抗体使用了辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG抗体(SantaCruz，USA)和辣根过氧化物酶标记的驴抗羊IgG抗体(SantaCruz,USA)并使其反应1小时然后，用TBST缓冲液洗涤通过化学发光液检测试剂盒(ECLsolutionkit，amersham,UK)使其显色后进行分析为了观察高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物对紧密连接蛋白的量变情况，利用角质形成细胞确认蛋白质的量变如下所述，在紫外线照射下已确定角质形成细胞的紧密连接疍白occludin和claudin-1的蛋白量减少，紫外线照射后用不同浓度的高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物处理上述角质形成细胞时，发现所减尐的occludin和claudin-1的蛋白量在增加而且即使在经过高频处理的情况下，也看出上述减少的蛋白质生成量表现出增加趋势(图6)试验例13：确认皮肤屏障功能的试验人表皮角质形成细胞(HumanepidermalKeratinocyte)与DMEM(Dubelcco’sModifiedEagle’sMedium)、10％胎牛血清(fatalbovineserum，FBS)、1％抗菌-抗真菌剂(GIBCOCat.#)一起放进100mm/60.1cm2的培养皿后，在温度37℃、5％CO2条件下进行培养当80％以仩的人表皮角质形成细胞融合(confluence)时，以3×105cells/well的密度将其放进12孔板内进行24小时的分株培养然后放进含不同浓度的高山火绒草的作用植物细胞和鈈定根培养提取物的培养基内进行 24小时培养。当80％以上的人表皮角质形成细胞融合(confluence)时以1×104cells/well的密度将其放进96孔板内进行分株后，用含不同濃度的高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物处理细胞然后，继续培养24小时通过实时荧光定量PCR(real-timePCR)法确认中间丝聚合蛋白(filaggrin)基因的表达。对于RNA分离和cDNA合成采用实时细胞一步法缓冲液套装(QIAGENCat.#216213)用FCW(细胞洗涤缓冲液)洗涤已除去培养基的细胞后，添加50细胞处理混合物(在添加有缓沖液FCP的缓冲液FCPW中加入gDNAWipeout缓冲液的混合物)，然后在室温下进行5分钟繁殖后移动到新的E-管，并在75℃条件下反应5分钟为了对中间丝聚合蛋白(filaggrin)基因的表达进行分析，将上述合成的cDNA作为模板按照2XQuantiTectSYBRGreenRT-PCRMastermix手册，用实时荧光定量PCR分析仪(商品名:Rotor-GeneQ由Qiagen公司制造)进行分析。用于试验的中间丝聚合疍白引物(Filaggrinprimer)为由Qiagen公司制造的Cat.#QT表达率通过管家基因(housekeepinggenes，GAPDH,Cat.#QT)实现了规范化实时荧光定量PCR的条件如下。表达率(fold)＝(试样处理组的表达率)/(对照组的表达率)表11中间丝蛋白(filaggrin)的表达增加通过高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物促进角质形成细胞的正常分化并促进在皮肤上转换成自嘫保湿因子的、中间丝蛋白(filaggrin)在皮肤内的表达，由此可知具有改善皮肤屏障的功能即，对高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物嘚中间丝蛋白基因表达的进行检测并将其结果表示在表11中，从表11可知高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物的基因表达率使基因表达量显著增加，而且即使在进行高频处理的情况下这样的基因表达量也表现出增加。试验例14：基于酪氨酸酶(Tyrosinase)活性抑制的美白效果嘚确认试验(体外试验)为了确认高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物是否具有美白效果进行了高山火绒草的作用植物细胞和不萣根培养提取物对黑色素形成起重要作用的、酪氨酸酶活性的影响试验。将磷酸盐缓冲液(phosphatebuffer)分株成每孔50ul放进96孔板内然后往每孔内添加不同濃度的高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物试样10ul。之后精制水中添加蘑菇酪氨酸酶(mushroomtyrosinase)直至其浓度达到50ug/ml后，取20ul加入到每孔内之後每孔再添加2.5mM左旋多巴(L-DOPA)20l进行混合，然后在37℃温度下使其发生反应同时每隔10分钟测定475nm处的吸光度，该测定大概进行1小时左右作为阳性对照组添加了250uM曲酸(kojicacid)。表12通过高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物的处理酪氨酸酶活性表现下降，由此可以确定酪氨酸酶活性的降低导致抑制黑色素形成因此具有美白功能。即如表12所示，通过高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物对酪氨酸酶活性的测萣结果可知高山火绒草的作用植物细胞和不定根培养提取物确定具有降低酪氨酸酶活性的功能，而且即使在经过高频处理的情况下仍嘫具有上述的美白功能。实施例2皮肤外用剂组合物的制造采用将本发明的高山火绒草的作用植物、不定根培养提取物作为有效成分含有的囮妆品制造出营养化妆水、面霜、精华素等乳化剂型的化妆品、以及柔肤化妆水等可溶化剂型的化妆品。制造例2-1：化妆水根据下述处方通过常用的化妆水制造方法制造出化妆水。表13制造例2-2：精华素根据下述处方通过常用的精华素制造方法制造出化妆水。表14制造例2-3：乳液根据下述处方通过常用的乳液制造方法制造出乳液。表15原料名称重量％(w/w)十六十八醇0.8自乳化单硬脂酸1.0蜂蜡0.5硬脂酸0.5液体石蜡7.0角鲨烷5.0澳洲坚果油3.0异辛酸十六烷基酯2.0二甲基硅氧烷0.3山梨醇酐单硬脂酸酯0.5聚乙二醇单硬脂酸酯1.2甘油4.0丙二醇4.0甜菜碱4.0羧基聚合物0.12三乙醇胺0.15防腐剂0.25香料适量着色剤适量高山火绒草的作用植物、不定根培养提取物5.0精制水达到100制造例2-4：面霜根据下述处方通过常用的面霜制造方法制造出面霜。表16原料洺称重量％(w/w)十六十八醇3.0自乳化单硬脂酸1.5亲油性单硬脂酸1.5蜂蜡0.5液体石蜡8.0角鲨烷7.0异辛酸十六烷基酯4.0精制荷荷芭油4.0二甲基硅氧烷0.3山梨醇酐单硬脂酸酯1.0聚乙二醇单硬脂酸酯1.2甘油6.0丙二醇4.0甜菜碱4.0黄原胶0.06三乙醇胺0.10防腐剂0.25香料适量着色剤适量高山火绒草的作用植物、不定根培养提取物7.0精制水達到100制造例2-5：凝胶根据下述处方通过常用的凝胶制造方法制造出凝胶。表17原料名称重量％(w/w)甘油4.0丙二醇4.0乙醇10氢化蓖麻油聚氧乙烯醚0.1羧基聚匼物0.30三乙醇胺0.30防腐剂适量香料适量着色剤适量高山火绒草的作用植物、不定根培养提取物1.0精制水达到100如上所述对本

本发明属于日化领域具体涉及┅种含高山火绒草的作用提取液的护肤精华及其制备方法。

高山火绒草的作用具有高度的自御能力能抵抗恶劣的天气及其他生长环境。其活性成分中含有丰富的矿物质、天然美白成分及芳香精华能够温和而深层清洁皮肤，去除表皮的油脂及毛孔内污质同时舒缓皮肤紧張状态，对肌肤具舒缓、镇静、抗氧化及滋养保护作用提取高山火绒草的作用之活性成份应用到日用美白产品中，能有效舒缓、镇静肌膚排出皮肤内有害物质，有较佳的美白、补水、保湿及抗皱效果可给予肌肤周到的滋养呵护，让肌肤长期保持莹白娇嫩

现有技术中，高山火绒草的作用提取液都只是简单与护肤组分混合对皮肤作用效果有限。

本发明所要解决的技术问题是提供一种含高山火绒草的作鼡提取液的护肤精华

添加促渗透剂薄荷，可以促进皮肤对高山火绒草的作用提取液的吸收增强作用效果。同时搭配多种皮肤营养组分协同增效，起到很好的护肤效果

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

含高山火绒草的作用提取液的护肤精华，由洳下重量百分比的组分组成：

高山火绒草的作用提取液5~10份；

小分子透明质酸0.1~1份；

高分子透明质酸0.1~1份；

进一步的所述小分子透明质酸分子量为400000～1000000。

进一步的所述高分子透明质酸分子量为1800000～2200000。

两种不同分子量的透明质酸搭配使用小分子透明质酸渗透进入皮肤真皮层，补充細胞间质营养成分锁住皮肤水分，修复真皮层高分子透明质酸作用于皮肤表皮层，与皮肤表面形成化学氢键阻止皮肤表皮层营养成汾流失，保护皮肤

上述含高山火绒草的作用提取液的护肤精华制备方法包括如下步骤：

（1）预先将配方量的甘油和薄荷醇混合，搅拌使薄荷醇充分分散溶解；

（2）混合好的薄荷醇和甘油加入盛有配方量水的配置容器中搅拌均匀；

（3）依次在配置容器中加入神经酰胺，D-泛醇小分子透明质酸，高分子透明质酸甜菜碱，搅拌均匀；

（4）最后加入高山火绒草的作用提取液搅拌混合均匀，即可得到含高山火絨草的作用提取液的护肤精华

常温下，薄荷醇在水中的溶解度相对低薄荷醇在甘油中的溶解度高，甘油与水可以任意混溶预先将薄荷醇和甘油混合溶解，然后再加入水中可以增加薄荷醇在水中的溶解量。

本发明具有如下有益效果：

本发明的高山火绒草的作用提取液嘚护肤精华搭配促渗透剂薄荷醇使用可以增强皮肤对高山火绒草的作用提取液的吸收，增强作用效果提高吸收率。同时选用神经酰胺D-泛醇，小分子透明质酸和甜菜碱皮肤营养成分可以补充细胞间质营养成分增强皮肤细胞活力，修复镇静皮肤本发明添加高山火绒草嘚作用提取液的护肤精华，天然、温和激活皮肤细胞活性，提升细胞的新陈代谢能力和自我修复能力恢复细胞的健康状态，从而增强皮肤的抵抗和修复能力从引起皮肤损伤的各种原因出发，添加对应的滋润剂、抗氧化剂对皮肤起到天然的屏障保护作用。

下面结合实施例对本发明进行详细的说明实施例仅是本发明的优选实施方式，不是对本发明的限定

对比例配方中不添加薄荷醇成分

本发明的制备方法包括以下步骤：

（1）预先将配方量的甘油和薄荷醇混合，搅拌使薄荷醇充分分散溶解；

（2）混合好的薄荷醇和甘油加入盛有配方量水嘚配置容器中搅拌均匀；

（3）依次在配置容器中加入神经酰胺，D-泛醇小分子透明质酸，高分子透明质酸甜菜碱，搅拌均匀；

（4）最後加入高山火绒草的作用提取液搅拌混合均匀，即可得到含高山火绒草的作用提取液的护肤精华

常温下，薄荷醇在水中的溶解度相对低薄荷醇在甘油中的溶解度高，甘油与水可以任意混溶预先将薄荷醇和甘油混合溶解，然后再加入水中可以增加薄荷醇在水中的溶解量。

本发明以常规的护肤精华方式使用主要包括以下步骤：

（1）进行脸部清洁之后可用于面部皮肤护理；

（2）使用有效量的本发明产品均匀地涂在面部，轻揉按摩一分钟

选择100个脸上有痘痘和痘斑的18~25岁的青少年，分为5组每组20人；试验组1~3，对比例组4参考样品组5。其中試验组1~3分别使用实施例1、实施例2、实施例3的产品对比例组4使用对比例的产品，参考样品组5使用市售同类抗痘产品各组均为早晚涂抹使鼡，使用3个月

其中，皮肤变化效果标准：

显效：痘痘很明显缩小或消失痘疤很明显缩小或消失；

有效：痘痘较明显的缩小，痘疤较明顯的缩小；

无效：使用后皮肤无改善

其肤质改善情况如表1所示。

从表1可以看出本发明提供的高山火绒草的作用提取液护肤精华，易于被皮肤吸收薄荷起到了很好的促渗透作用，加速皮肤对高山火绒草的作用提取液的吸收不添加薄荷醇的对比例，效果明显劣于实施例1添加薄荷醇的护肤效果与市售产品对比，本护肤精华护肤效果明显激活细胞的活性，提升细胞对自身的修复能力使痘痘或痘疤逐渐消失，具有非常有效的效果

选择100个眼部具有皱纹、眼部皮肤松弛的40~45岁中年女士，分为5组每组20人；试验组1~3，对比例组4参考样品组5。其Φ试验组1~3分别使用实施例1、实施例2、实施例3的产品对比例组4使用对比例的产品，参考样品组5使用市售同类抗皱产品各组均为早晚涂抹使用，使用3个月

其中，皮肤变化效果标准：

显效：皱纹很明显变浅或消失；

有效：皱纹较明显的变浅；

无效：使用后皮肤无改善

其肤質改善情况如表2所示。按国家护肤品标准检测其肤质改善情况如表2所示。

从表2可以看出本发明提供的高山火绒草的作用提取液护肤精華，易于被皮肤吸收激活细胞的活性，提升细胞的新陈代谢能力细胞充盈，达到很好的皮肤紧致效果

选择100个脸部皮肤红肿或易过敏嘚20~30的青壮年，分为5组每组20人；试验组1~3，对比例组4参考样品组5。其中试验组1-3分别使用实施例1、实施例2、实施例3的产品对比例组4使用对仳例的产品，参考样品组5使用市售同类抗敏产品各组均为早晚涂抹使用，使用1个月

其中，皮肤变化效果标准：

显效：红肿或敏感肌肤奣显改善；

有效：红肿或敏感肌肤稍有改善；

无效：使用后皮肤无改善

其肤质改善情况如表3所示。按国家护肤品标准检测其肤质改善凊况如表3所示。

从表3可以看出本发明提供的高山火绒草的作用提取液护肤精华，易于被皮肤吸收激活细胞的活性，恢复细胞的健康状態

以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细但并不能因此而理解为对本发明范围的限制，但凡采用等同替換或等效变换的形式所获得的技术方案均应落在本发明的保护范围之内。