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江苏大学 硕士学位论文 家蚕核型哆角体病毒Bm134Bm51基因的特性分析 姓名:林锋 申请学位级别:硕士 专业:生物化学与分子生物学 指导教师:陈克平 江苏大学硕士学位论文 摘 要 杆状病毒(baculovirus)是具有高度宿主特异性的一类节肢动物 病毒。家蚕杆状病毒于1999年完成测序部分基因功能已经报道,但 仍然有很多基因功能没有紸释因此,本论文选择了家蚕核型多角体 mori 1 病毒(Bombyx 两个功能未知的杆状病毒基因为研究对象对基因转录、表达、亚细 胞定位、病毒结构定位、基因缺失进行了分析,为进一步解析杆状病 毒的分子生物学理论奠定基础论文主要结论如下: 长330bp,编码一个含109个氨基酸残基的蛋白预测分子量约为 GTAAG;氨基酸序列同源性比较发现,Bml34与NPVI型 AcMNPV ORF5的同源性高达93%与其它12种杆状病毒同源性 亦非常高。BmORF51基因位于BrnNPV(T3株)基因组 在B所5J基因TAA丅游454nt有一个典型的加A信号AATAAA 模板淄TPCR扩增,将得到的基因克隆至原核表达载体pET30a(+) 在原核细胞中实现了基因的融合表达。纯化的蛋白免疫新西蘭大 T 江苏大学硕士学位论文 的BmN细胞总蛋白进行的杂交显示一条12.4kDa的特异杂交带, 该蛋白带与推测的大小一致RT.PCR分析结果表明,BmORFl34 基因在疒毒感染细胞中的转录均从12h开始就可以检测到一直持 续到感染后72h。BmORFl34蛋白的表达是从感染后24h才开始检 测到利用Westernblot方法检测分离出的BV、ODV粒子表明, BmORFl34是病毒粒子ODV相关的结构蛋白免疫杂交后用免疫 荧光共聚焦显微镜进行观察,可见荧光在24 h时主要集中在细胞质 中随后在48h和72hE细胞核Φ被检测到。 行了融合表达通过对BmM基因在大肠杆菌中的融合表达发现 Bin51蛋白在大肠杆菌系统中能够良好地表达,表达的融合蛋白分 子量约為24.5kD正好是18.5kDa的Bin51与6kDa的His标签 之和。Western BL21中表达的重组蛋白确实为His-Bm51融合蛋白蛋白纯化后 (306)的转录和表达时相,结果表明Bm51基因在病毒感染NB后6d, h h 时被检測到于36 p.i.达到最大值,然后逐渐减少到72p.i. 消失,而在病毒感染的306中Bm51蛋白的表达从被检测到开始 h 至1J72p.i.间一直持续增长。从这一結果可以得出NB中的一些宿主 因素抑制病毒早期基因的表达 Ⅱ 江苏大学硕士学位论文 BmlM基因进行了快速定点敲除,并同时在该位点插入了氯黴素 起对敲除了Bml34基因的BmNPV进行了拯救,分别构建了野 生型病毒vBml34-Wt 因拯救病毒vBml34一Re。再将经过转座带有绿色荧光蛋白基因 flucrcscence (green Bacmid转染BmN细胞荧光观察顯示三种病毒在感染细胞后都有 荧光,说明敲除Bml34基因对病毒的复制影响甚微 时相;表达时相;质谱;Red重组系统

这个BMI有点高了体重有点重了

身體BMI是身体质量指数简称(Body Mass Index, BMI),计算公式是以体重(公斤)除以身高(公尺)的平方成人BMI应维持在18.5(kg/m2)及24(kg/m2)之间,太瘦、过重或太胖皆囿碍健康

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