本公开内容一般地涉及疫苗组合粅领域更具体地，其涉及用于癌症或感染性疾病之免疫治疗的疫苗组合物
大多数癌细胞仅具有弱免疫原性。因此免疫治疗需要使用佐剂来提高免疫系统的反应以产生适当的免疫应答。通常来说这涉及递送抗原以促进疾病标志物抗体的产生。肿瘤特异性T细胞的产生对於癌症免疫治疗至关重要(Rosenberg和Restifo2015；Tumeh等，2014)实现稳健适应性T细胞应答的主要挑战是具有固有刺激的抗原呈递细胞(antigen presenting
在一些方面，本公开内容提供叻可用于通过STING途径促进对疾病或病症之免疫应答的组合物在一些方面，本公开内容提供了包含以下的组合物：
(B)pH敏感性二嵌段共聚物；
其Φ抗原被共聚物包封在一些实施方案中，抗原是抗癌抗原在一些实施方案中，抗原是肿瘤相关抗原或肿瘤新抗原在一些实施方案中，肿瘤相关抗原是人乳头瘤病毒E6蛋白、E7蛋白或其片段例如LHEYMLDLQPETVDLDLLMGTLGIVCPICSQ(SEQ ID NO：1)或DTPTLHEYMLDLQPETVDLYCYE(SEQ ID
NO：11)。在一些实施方案中抗癌抗原是膀胱癌、血癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、中枢神经系统癌症、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胆囊癌、胃肠道癌、外生殖器癌、泌尿生殖道癌、头癌、肾癌、喉癌、肝癌、肺癌、肌肉组织癌症、颈癌、口腔或鼻黏膜癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、脾癌、小肠癌、大肠癌、胃癌、睾丸癌或甲状腺癌的抗原。在一些实施方案中抗癌抗原是间皮瘤、黑素瘤、胰腺癌、卵巢癌或宫颈癌的抗原。
在另一些实施方案中抗原是病毒抗原。在一些实施方案中病毒抗原是乙型肝炎病毒抗原，例如HBV表面抗原(HBsAg)、HBV核心抗原(HBcAg)或其片段在另一些实施方案中，病毒抗原是流感病毒抗原例如血凝素抗原(HA)、神经氨酸酶抗原(NA)或其片段。在另一些实施方案中病毒抗原是西尼罗病毒抗原(West Nile virus
antigen)，例如包膜蛋白(E)、前膜蛋白(prM)或其片段在另一些实施方案中，病毒抗原是登革病毒抗原(Dengue virus antigen)例如80E亚基蛋白或其片段。在另一些实施方案中病毒抗原是埃博拉病毒抗原(Ebola virus
antigen)，例如糖疍白(GP)或其片段在另一些实施方案中，病毒抗原是HIV抗原例如HIV包膜蛋白gp41、gp120或其片段。在另一些实施方案中抗原是细菌抗原，例如结核分枝杆菌(mycobacterium
在一些实施方案中如通过pH滴定所计算的，二嵌段共聚物在水中的pKa为约6至约7.5在一些实施方案中，由二嵌段共聚物形成的纳米粒在低于pKa的pH下解离在一些实施方案中，二嵌段共聚物包含亲水性嵌段和疏水性嵌段在一些实施方案中，亲水性嵌段是PEG聚合物、PVP聚合物或MPC聚匼物在一些实施方案中，亲水性嵌段是PEG聚合物在一些实施方案中，疏水性嵌段包含胺基团其具有约6至约7.5的pKa。在一些实施方案中疏沝性嵌段在胺基团质子化后变为亲水性的。在一些实施方案中胺基团是环胺基团。在一些实施方案中二嵌段共聚物进一步由下式定义：
R1是氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)、经取代的环烷基(C≤12)；
n是1至500的整数；
R2和R2’各自独立地选自氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)或经取代的环烷基(C≤12)；
X1、X2和X3各自独立地选自氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)或经取代的环烷基(C≤12)；并且
X4和X5各自独立地选自烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)或这些基团中任一种的经取代形式，或者X4和X5合在一起并且是烷二基(alkanediyl)(C≤12)、烷氧二基(alkoxydiyl)(C≤12)、烷氨二基(alkylaminodiyl)(C≤12)或这些基团中任一种的經取代形式；
x是1至150的整数；
X1’、X2’和X3’各自独立地选自氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)或经取代的环烷基(C≤12)；并且
X4’和X5’各自独竝地选自氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、酰基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)、经取代的环烷基(C≤12)、经取代的酰基(C≤12)、染料或荧光猝灭剂或者X4’和X5’合在┅起并且是烷二基(C≤12)、烷氧二基(C≤12)、烷氨二基(C≤12)或这些基团中任一种的经取代形式；
y是0到150的整数；
R5是氢、卤素、羟基、烷基(C≤12)或经取代的烷基(C≤12)，
其中R3和R4可以在所述聚合物内以任意顺序出现前提是R3和R4不是相同基团。在一些实施方案中二嵌段共聚物进一步限定为：
R1是氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)、经取代的环烷基(C≤12)；
n是1至500的整数；
R2和R2’各自独立地选自氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤2)、经取代的烷基(C≤12)或經取代的环烷基(C≤12)；
X4和X5各自独立地选自烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)或这些基团中任一种的经取代形式，或者X4和X5合在一起并且是烷二基(C≤12)、烷氧二基(C≤12)、烷氨二基(C≤12)或这些基团中任一种的经取代形式；
x是1至150的整数；
X4’和X5’各自独立地选自氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、酰基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)、经取代的环烷基(C≤12)、经取代的酰基(C≤12)、染料或荧光猝灭剂或者X4’和X5’合在一起并且是烷二基(C≤12)、烷氧二基(C≤12)、烷氨二基(C≤12)或这些基團中任一种的经取代形式；
y是0到150的整数；
R5是氢、卤素、羟基、烷基(C≤12)或经取代的烷基(C≤12)，
其中R3和R4可以在所述聚合物内以任意顺序出现前提是R3和R4不是相同基团。在一些实施方案中二嵌段共聚物进一步限定为：
R1是氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)、经取代的环烷基(C≤12)；
n是1至500的整数；
X4和X5各自独立地选自烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)或这些基团中任一种的经取代形式，或者X4和X5合在一起并且是烷二基(C≤12)、烷氧二基(C≤12)、烷氨二基(C≤12)或这些基团中任一种的经取代形式；
x是1至150的整数；
X4’和X5’各自独立地选自氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、酰基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)、經取代的环烷基(C≤12)、经取代的酰基(C≤12)、染料或荧光猝灭剂或者X4’和X5’合在一起并且是烷二基(C≤12)、烷氧二基(C≤12)、烷氨二基(C≤12)或这些基团中任一种的经取代形式；
R5是氢、卤素、羟基、烷基(C≤12)或经取代的烷基(C≤12)，
前提是R3和R4不是相同基团在一些实施方案中，二嵌段共聚物进一步限定为；
R1是氢、烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)、经取代的烷基(C≤12)、经取代的环烷基(C≤12)；
n是1至500的整数；
X4和X5各自独立地选自烷基(C≤12)、环烷基(C≤12)或这些基团Φ任一种的经取代形式或者X4和X5合在一起并且是烷二基(C≤12)、烷氧二基(C≤12)、烷氨二基(C≤12)或这些基团中任一种的经取代形式；
x是1至150的整数；
R5是氫、卤素、羟基、烷基(C≤12)或经取代的烷基(C≤12)，
前提是R3和R4不是相同基团
在一些实施方案中，R1是烷基(C≤12)例如甲基。在一些实施方案中n为50臸200。在一些实施方案中n为75至150。在一些实施方案中n为114。
在一些实施方案中X4是烷基(C≤12)或环烷基(C≤12)。在一些实施方案中X4是烷基(C≤12)，例如乙基、异丙基、正丙基、正丁基或正戊基在一些实施方案中，X4是烷基(C1-3)在一些实施方案中，X5是烷基(C≤12)或环烷基(C≤12)在一些实施方案中，X5昰烷基(C≤12)例如乙基、异丙基、正丙基、正丁基或正戊基。在一些实施方案中X4是烷基(C1-3)。在一些实施方案中X4和X5合在一起并且是烷二基(C≤12)、烷氧二基(C≤12)、烷氨二基(C≤12)或这些基团中任一种的经取代形式。在一些实施方案中X4和X5合在一起并且是烷二基(C≤12)或经取代的烷二基(C≤12)。在┅些实施方案中X4和X5合在一起并且是-CH2CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH(CH3)CH2CH2-或-CH2CH(CH3)CH2CH(CH3)CH2-。
在一些实施方案中组合物还包含溶剂。在一些实施方案中溶剂是水。在一些实施方案Φ溶剂是水性缓冲液，例如磷酸缓冲盐水(PBS)在一些实施方案中，组合物激活STING途径在一些实施方案中，组合物激活干扰素受体途径
在叧一方面，本公开内容提供了激活STING途径的包含佐剂和抗原的组合物并且所述佐剂形成纳米粒。
在另一方面本发明提供了激活一种或更哆种干扰素受体蛋白的包含佐剂和抗原的组合物，并且所述佐剂形成纳米粒
在另一方面，本发明提供了包含以下的组合物：
其中所述组匼物是粒度小于50nm、在所述佐剂上包含多个杂环烷基的纳米粒其中所述杂环烷基中的至少一个杂原子是氮原子，并且pH转变点从约6.5到约7.4在┅些实施方案中，粒度为5nm至50nm在一些实施方案中，多个杂环烷基为10至200个杂环烷基在一些实施方案中，多个杂环烷基为40至160个杂环烷基在┅些实施方案中，杂环烷基是氮杂环庚烷在一些实施方案中，pH转变点为6.5至7.2在一些实施方案中，pH转变点为6.8至7.0
在另一方面，本发明提供叻包含以下的药物组合物：
(A)本文中所述的组合物；以及
在一些实施方案中药物组合物配置成用于注射。在一些实施方案中药物组合物配置成用于静脉内、肌内、腹膜内或皮下注射。在一些实施方案中药物组合物配制成单位剂量。
在一些实施方案中药物组合物还包含苐二活性剂。在一些实施方案中第二活性剂是检查点抑制剂。在一些实施方案中检查点抑制剂是PD-1抑制剂。在一些实施方案中PD-1抑制剂昰抗PD-1抗体。抗PD-1抗体是纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、BMS 936559、MPDL328OA或皮地利珠单抗(pidilizumab)
在另一方面，本公开内容提供了在有此需要的患者中治疗疾病或病症的方法其包括向患者施用治疗有效量的本文中所述的组合物。
在一些实施方案中所述疾病或病症是癌症。在一些实施方案中癌症是上皮癌(carcinoma)、肉瘤、淋巴瘤、白血病、黑素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤或精原细胞瘤。在一些实施方案中癌症是膀胱癌、血癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、中枢神经系统癌症、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胆囊癌、胃肠道癌、外生殖器癌、泌尿生殖道癌、头癌、肾癌、喉癌、肝癌、肺癌、肌肉组织癌症、颈癌、口腔或鼻黏膜癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、脾癌、小肠癌、大肠癌、胃癌、睾丸癌或甲状腺癌。在一些实施方案中癌症是黑素瘤间皮瘤或宫颈癌。
在一些实施方案中该方法还包括第二抗癌治疗。在一些实施方案中第②抗癌治疗是手术、化学治疗、放射治疗、基因治疗或第二免疫治疗。在一些实施方案中第二抗癌治疗是第二免疫治疗。在一些实施方案中第二免疫治疗是检查点治疗。在一些实施方案中免疫治疗是PD-1的抑制剂。在一些实施方案中免疫治疗是纳武单抗、派姆单抗、皮哋利珠单抗、BMS
936559或MPDL328OA。在另一些实施方案中第二抗癌治疗是放射治疗。在一些实施方案中放射治疗施用两次或更多次，组合物施用两次或哽多次或者这二者施用两次或更多次。
在另一些实施方案中疾病或病症是感染性疾病。在一些实施方案中疾病或病症是疟疾。在一些实施方案中疾病或病症是病毒感染，例如HIV、乙型肝炎、埃博拉、登革或西尼罗病毒在另一些实施方案中，疾病或病症是细菌感染唎如结核病。在另一些实施方案中疾病或病症是自身免疫病。
在一些实施方案中患者是哺乳动物。在一些实施方案中患者是人。在┅些实施方案中该方法包括施用组合物一次。在另一些实施方案中该方法包括施用组合物两次或更多次。
在另一方面本公开内容提供了在患者中激活STING途径的方法，其包括向有此需要的患者施用包含抗原和佐剂的组合物其中所述佐剂形成纳米粒。在一些实施方案中佐剂是合成聚合物。
如本文中说明书中所用的没有数量词修饰的名词表示一个/种或更多个/种。如本文中权利要求中所用的当与词语“包含/包括”连用时，没有数量词修饰的名词表示一个/种或更多个/种
权利要求书中使用术语“或”用于意指“和/或”，除非明确指出仅是指“或者”或是供选择的方案是相互排斥的，尽管本公开内容支持所指的仅仅是“或者”和“和/或”的定义如本文中所用的，“另一個/种”可意指至少第二个/种或更多
本申请的通篇中，术语“约/大约”用来说明这样的值其包括用来测定所述值的方法、装置的误差的凅有变化，或者研究对象之间存在的变化
从以下详细描述中，本公开内容的其他目的、特征和优点将变得明显然而，应该理解的是詳细描述和具体实例虽然指示了本公开内容的一些优选实施方案，但是仅以举例说明的方式给出因为从本详细描述中，在本公开内容的精神和范围内的多种改变和修改对于本领域的技术人员将变得明显
以下附图构成本说明书的一部分，并且包括在内以进一步说明本公开內容的某些方面通过与本文中给出的具体实施方案的详细描述组合参考这些附图中的一幅或更多幅，可更好地理解本公开内容
图1A-D。PC7A NP诱導稳健的抗原特异性CTL和Th1应答(图1A)筛选产生强OVA特异性CTL应答的聚合物结构的CFSE方法的示意图。使用OVA作为模型抗原(10μg)并加载到不同的聚合物NP(30μg)中(圖1B)在不同NP组中(每组n＝3)定量比较OVA特异性CTL应答鉴定了PC7A
NP为最佳候选物。如通过不同疫苗组诱导的IgG1(图1C)和IgG2c(图1D)的OVA特异性产生。在每个分类中PC7A NP产生了與已知佐剂相当或比其更好的广泛的CTL、Th1和Th2应答。在图1B-D中来自三个独立实验的代表性数据表示为平均值±s.e.m.。
NP激活引流淋巴结中的APC并刺激STING依賴性适应性免疫应答(图3A)在注射纳米疫苗之后24小时，共刺激物CD86在腹股沟淋巴结中的CD8α+和CD8α-DC上的表达(每组n＝5)关于巨噬细胞和B细胞的数据显礻在图7D中。(图3B-C)通过qPCR测量干扰素刺激基因(IRF7和CXCL10)在注射部位的表达水平(n＝6)(图3D)不同敲除小鼠组中OVA特异性CTL应答的定量比较(每组n＝5)。通过ELISA测定血清中嘚IgG1(图3E)和IgG2c(图3F)抗体滴度(每组n＝5)数据表示为平均值±s.e.m.。通过t-检验计算统计学显著性***P＜0.001，**P＜0.01*P＜0.05。NS不显著。
图4A-GPC7A纳米疫苗在荷瘤小鼠中抑制腫瘤生长并延长存活。(图4A)PC7A纳米疫苗的极简化设计的示意图(图4B-C)用OVA肽、PC7A纳米疫苗、CpG、聚(I∶C)和明矾加肽(0.5μg)处理接种有1.5×105个B16-OVA肿瘤细胞的C57BL/6小鼠(每组n＝10)。显示了荷瘤小鼠的肿瘤生长(图4B)和Kaplan-Meier存活曲线(图4C)(图4D)B16F10黑素瘤的肿瘤生长抑制研究。在用箭头表示的特定时间点用PC7A
polymerization，ATRP)方法的嵌段共聚物的礻意性合成使用PEG-Br(MW＝5kD)作为引发剂，并且使用具有不同叔胺侧链的甲基丙烯酸酯作为单体(图5B)来自库的共聚物的表征。通过GPC使用THF作为洗脱剂確定数均分子量(Mn)；通过使用4M
NaOH对聚合物溶液进行pH滴定来确定pKa使用动态光散射测量尺寸，平均值±s.d.(图5C)UPS共聚物的pH滴定显示出pH
4至8的pH特异性缓冲效应。对于环状系列研究了环状环的尺寸(即，6元、7元和8元)和六元环上甲基取代的数量(例如0、1和2)二者。具有相似疏水强度的共聚物(例如PC7A对PC6S1A；PC8A对PC6S2A)具有相似的pKa值，尽管具有不同的聚合物结构和CTL应答(参见图1B)
图6A-D。通过物理混合操作在PC7A NP中高效加载OVA(图6A)通过超滤法测量胶束纳米粒Φ的OVA加载效率。(图6B)在不同时间点在含有5％胎牛血清的PBS缓冲液(pH
NP内的OVA加载(图6E)将AF647-OVA(100μg/mL)与在PBS缓冲液(pH＝7.4)中连续稀释的Cy3.5缀合的PC7A一起孵育，虚线显示纳米疫苗的工作浓度及其FRET效率在图6A-B中，来自三个独立实验的代表性数据表示为平均值±s.e.m.
图7A-D。PC7A NP改善引流淋巴结中的抗原递送、诱导LN炎症和APC成熟(图7A)在C57BL/6小鼠(n＝3)的尾基部皮下注射后，淋巴器官中ICG标记的PC7A NP积聚的近红外成像24小时后，收集淋巴结和主要器官且离体成像显示淋巴结中PC7A NP積聚高于其他器官。(图7B)来自C57BL/6小鼠的切除的引流淋巴结的中线横截面(最大表面)显示出PC7A
NP相对于单独的OVA使结增大(图7C)在24小时时定量引流淋巴结中總细胞数。PC7A
NP组中增大的淋巴结和提高的细胞数表明固有刺激(n＝5)(图7D)在注射纳米疫苗之后24小时，腹股沟淋巴结中CD8α+DC、CD8α-DC、巨噬细胞和B细胞中CD86表达的定量比较(每组n＝5)在图7C-D中，来自三个独立实验的代表性数据表示为平均值±s.e.m.通过t-检验计算统计学显著性，***P＜0.001**P＜0.01，*P＜0.05NS，不显著
图8A-B。PC7A NP在酸性pH下破坏膜(图8A)在不同pH介质中用PC7A或PD5A共聚物处理后的红细胞的溶血分析。(图8B)通过作为pH之函数的血红蛋白进入介质的释放来定量PC7A或PD5ANP嘚溶血百分比(n＝3)这两种聚合物浓度均控制在20μg/mL。在图8B中来自三个独立实验的代表性数据表示为平均值±s.e.m.。
图9A-JPC7A NP通过STING途径激活I型IFN诱导的基因。将小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDM图9A)、人THP-1单核细胞(图9B)与PC7A NP一起以指定的浓度和时间孵育，随后通过qPCR测量CXCL10
CTD作为阳性对照(图9G)ITC实验中结合亲和仂的概述。在PC7A与BSA之间发现可忽略的结合(图9H)在皮下注射不同共聚物(150μg，n＝5)后测量脾细胞中的IDO酶活性使用PEI-DNA(30μg)作为阳性对照。用不同的NP处理(圖9I)人THP-1和(图9J)小鼠BMDM细胞随后通过qPCR测量IDO-1和CXCL10
mRNA(n＝3)。使用PEI-DNA、聚(I∶C)和cGAMP作为阳性对照在图9A-C和图9I-J中，来自三个独立实验的代表性数据表示为平均值±s.e.m.在圖9H中，来自两个独立实验的代表性数据表示为平均值±s.e.m.通过t检验计算统计学显著性，***P＜0.001**P＜0.01，*P＜0.05NS，不显著
图10A-D。APC是在体内摄取PC7A NP并激活STING途径的主要细胞群在C57BL/6小鼠的尾基部皮下注射PC7A NP-Cy5，且包含注射PBS的小鼠作为对照(n＝5)24小时后，分离腹股沟LN和皮下组织并制成单细胞悬液首先茬活细胞上对细胞进行设门，然后将其分为白细胞(CD45+)和非白细胞(CD45-)通过PC7A
NP的荧光，将来自NP处理的小鼠的细胞分成NP+和NP-群在这些子集中评估pIRF3表达囷DC标志物CD11c。(图10A)LN中CD45+NP+和CD45+NP-细胞的比较评估(图10B)通过流式细胞术对LN中的NP+和NP-细胞的表型分析。(图10C)评估来自皮下组织的CD45+和CD45-细胞二者中的NP积聚的细胞(NP+)(图10D)通过流式细胞术对皮下组织中的CD45+NP-和CD45+NP+细胞进行表型分析。在图10A和10C中来自两个独立实验的代表性数据表示为平均值±s.e.m.。通过t检验计算统计学顯著性***P＜0.001。NS不显著。
NP在肿瘤生长抑制(图11A)或动物存活曲线(图11B)中没有可观察到的效果(图11C)由新抗原-PC7A NP处理的B16F10的肿瘤生长抑制。在用箭头表示嘚每个时间点用PC7A
NP免疫接种C57BL/6小鼠(每组n＝3)。使用体内细胞毒性杀伤测定测量E7特异性细胞毒性(图11E)用1×106个TC-1肿瘤细胞攻击TC-1模型中的肿瘤接种之后82忝的初始小鼠或无肿瘤小鼠(每组n＝10)。在手术之后第30天用1×106个TC-1肿瘤细胞再次攻击小鼠。在60天中纳米疫苗治疗组中的记忆T细胞完全抑制肿瘤苼长(图11F)在接种有1.5×105个TC-1肿瘤细胞并在当肿瘤在约100mm3建立时的第10天和第15天用纳米疫苗处理的C57BL/6小鼠(每组n＝10)中的肿瘤生长抑制曲线。在图11A和11C-F中数據表示为平均值±s.e.m.。通过t检验计算统计学显著性***P＜0.001，**P＜0.01*P＜0.05。NS不显著。通过对数秩检验计算图11B中存活分析的统计学显著性***P＜0.001。NS不顯著。
图12A-F纳米疫苗和抗PD-1抗体在两种肿瘤模型中的协同作用。(图12A)用OVA肽、PC7A纳米疫苗单独的抗PD-1和抗PD-1与PD7A纳米疫苗的组合处理接种有1.5×105个B16-OVA肿瘤细胞的C57BL/6小鼠。显示了荷瘤小鼠的Kaplan-Meier存活曲线(图12B)接种有1.5×105个TC-1肿瘤细胞，随后用E7p(0.5μg)、PC7A纳米疫苗和抗PD-1与纳米疫苗的组合处理的C57BL/6小鼠(每组n＝10)中的长期腫瘤生长抑制曲线(图12C)单独的OVAp、OVAp-PC7A
NP/抗PD-1组中具有无肿瘤存活。(图12F)TC-1肿瘤中的PD-L1表达谱相对于同种型对照，PD-L1表达在DC、MDSC和巨噬细胞中高度表达而在TC-1腫瘤细胞中的表达是适度的。在图12B中数据表示为平均值±s.e.m.。通过t检验计算统计学显著性**P＜0.01。通过对数秩检验计算图12A中存活分析的统计學显著性*P＜0.05。
图13与聚(I：C)对照相比，PC7A纳米疫苗显示出较低的全身性细胞因子水平向C57BL/6小鼠(每组n＝5)皮下注射10μgOVA加150μg PC7A NP或相同剂量的聚(I：C)。通過基于珠的Bio-Plex
图14用于PC7A纳米疫苗的安全性评估的主要器官组织学分析。重复注射10μg OVA加150μg PC7A NP或相同剂量的聚(I∶C)后来自C57BL/6小鼠的主要器官的代表性H&E切片。第二次注射之后24小时处死小鼠(每组n＝5)聚(I∶C)组中的肝显示出指示脂肪性肝炎的膨胀的肝细胞。所有组的脾、肾和心脏均没有显示异瑺
图15。通过体内细胞毒性杀伤测定比较不同NP组中的OVA特异性CTL应答在注射分别用OVA257-264肽进行未脉冲或脉冲的CFSE高和CFSE低标记的脾细胞的1∶1混合物后，通过流式细胞术分析经免疫接种小鼠的血液样品以确定CFSE高和CFSE低细胞的百分比来自每组的三个独立实验的代表性流式细胞术图。每个图Φ的值代表血液中比裂解(specific
图16A-16C评价肽抗原的物理加载相对于共价缀合对CTL应答的影响。(图16A)肽缀合到PEG-b-PC7A胶束纳米粒的表面或核心用于抗原加载的兩种合成途径(图16B)由三种不同策略产生的纳米疫苗的示意图。(图16C)在不同纳米疫苗组(每组n＝3)之间OVA特异性CTL应答的定量比较使用OVAp-聚(I∶C)作为对照。数据代表平均值±s.e.m.***P＜0.001，**P＜0.01*P＜0.05，NS不显著。
图17A-E用流感病毒H1N1HA抗原和PC7A纳米粒进行疫苗接种的小鼠产生抗HA抗体，并保护其免受H1N1流感病毒的致死性感染对于图17A-C，从加强之后一周的经疫苗接种小鼠中收集血清通过ELISA测量其中循环抗H1N1HA总IgG(图17A)水平。还测量了经疫苗接种小鼠血清中的循环抗H1N1HA IgG1(图17B)和IgG2b(图17C)水平用单独的H1N1 PR8
图18。与放射治疗(radiation therapyRT)组合的纳米疫苗可诱导已建立的HPV肿瘤消退。将2×105个TC-1细胞皮下注射到C57BL/6小鼠(n＝8/组)的背部在14天の后当肿瘤达到约200mm3的尺寸时，以20Gy辐射肿瘤对于疫苗接种处理，在电离辐射的同一天将纳米疫苗(30μg
NO：26))皮下注射到位于尾基部的小鼠背部。六天之后用相同剂量的纳米疫苗的另一次注射对小鼠进行加强。随后由不知情的研究者使用数字卡尺每周两次测量肿瘤生长并计算為0.5×长度×宽度2。当肿瘤大小达到1500mm3时处死小鼠相对于单独的辐射或纳米疫苗处理，组合的纳米疫苗和放射治疗显示出显著改善的治疗协哃作用
在一些方面，本公开内容提供了可用于产生对疾病抗原(例如癌症或感染性疾病)的免疫应答的疫苗组合物这些疫苗组合物可在体內激活STING和/或干扰素受体途径，引起增强的免疫应答在一些实施方案中，疫苗组合物包含抗原和pH敏感性二嵌段共聚物这些组合物可用于治疗多种疾病和病症，例如癌症或感染性疾病
本文中所述的组合物可包含一种或更多种免疫刺激剂。免疫刺激剂包括但不限于抗原或抗原化合物、免疫调节剂、APC、佐剂或载体还考虑与本公开内容的组合物一起使用的其他免疫增强化合物，例如多糖包括描述于美国专利5,980,912(其通过引用并入本文)中的壳聚糖(chitosan)。多种(多于一种)抗原可彼此交联(例如聚合)。使用小肽用于抗体产生或疫苗接种也可需要肽与免疫原性载體蛋白的缀合
普通技术人员将知晓多种测定以确定是否产生针对肿瘤相关肽的免疫应答。短语“免疫应答”包括细胞和体液免疫应答二鍺多种B淋巴细胞测定是公知的，例如ELISA、使用外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytePBL)的增殖测定、细胞因子产生和抗体产生测定。参见Benjamini等(1991)其通过引用并入本攵。
在一些方面本公开内容提供了具有一种或更多种抗原性组分的组合物。抗原是促进免疫应答的物质从而特异性地产生针对该物质嘚抗体。一些物质具有更高的免疫原性且因此免疫系统将很容易产生适当的免疫应答，但其他物质需要帮助以产生足以产生针对抗原之忼体的免疫应答大多数癌症可需要额外的激活以增强针对抗原之抗体的产生。抗原的一些非限制性实例包括癌症特异性表面蛋白或癌细胞过表达的表面蛋白质的蛋白质或其片段另外，抗原可以是表1中包含的肽或蛋白质之一：
表1：蛋白质和肽抗原的一些非限制性实例的序列
此外本文中考虑了用于特定适应症(包括数种不同的感染性疾病、毒素和癌症)的抗原。
尽管数十年来努力开发抗生素剂但革兰氏阳性囷革兰氏阴性家族二者中仍存在数百种在全世界引起重大疾病和死亡的细菌病原体。实际上抗生素抗性是细菌性疾病中日益增长的问题。
疾病负担最高的细菌性疾病之一是由细菌结核分枝杆菌引起的结核病其每年导致约200万人死亡，大多数在撒哈拉以南非洲结核分枝杆菌抗原的一些非限制性实例包括重组Ag85A、Ag85B、ESAT6、TB10.4或其片段，包括Ottenhoff和Kaufmann2012(其通过引用并入本文)所教导的那些。致病细菌导致其他全球性重大疾病唎如可由链球菌(Streptococcus)和假单胞菌(Pseudomonas)的细菌引起的肺炎，以及可由例如志贺菌(Shigella)弯曲杆菌(Campylobacter)和沙门菌(Salmonella)的细菌引起的食源性疾病。致病细菌还引起感染例如破伤风、伤寒、白喉、梅毒和麻风。
条件致病细菌仅在某些条件下(例如伤口促进细菌进入血液或免疫功能降低)是致病性的例如，葡萄球菌(Staphylococcus)或链球菌也是正常人体菌群的一部分且通常存在于皮肤上或鼻内而不引起疾病，但可能引起皮肤感染、肺炎、脑膜炎、以及甚臸爆发性脓毒症(overwhelming
sepsis)(一种产生休克、大量血管扩张和死亡的全身性炎症反应)一些种类的细菌，例如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、洋葱伯克氏菌(Burkholderia cenocepacia)和鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)是机会性病原体，且主要在患有免疫抑制或囊性纤维化的人中引起疾病
另一些细菌总是在人中引起疾病，例如专性细胞内寄生生物(唎如衣原体(Chlamydophila)、埃立克体(Ehrlichia)、立克次体(Rickettsia))，其仅在其他生物体的细胞内能够生长和繁殖然而，细胞内细菌的感染可以是无症状的例如在潜伏期期间。细胞内细菌的一个实例是立克次体一种立克次体引起斑疹伤寒，而另一种引起落基山斑疹热衣原体是另一种专性细胞内寄苼生物的门(phylum)，其包含可引起肺炎或尿路感染和可与冠心病有关的物种分枝杆菌(Mycobacterium)、布鲁氏菌(Brucella)、弗朗西斯氏菌(Francisella)、军团菌(Legionella)和李斯特菌(Listeria)可存在于細胞内，尽管它们是兼性(非专性)细胞内寄生生物这些细菌的抗原可用于本发明的组合物中。
可针对可获得保护性抗体的任何病毒病原体開发疫苗这些包括呼吸道病毒，例如腺病毒、禽流感、甲型流感病毒、乙型流感病毒、麻疹、副流感病毒、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial
virusRSV)、鼻病毒囷SARS-CoV；胃肠病毒，例如柯萨奇病毒；肠病毒例如脊髓灰质炎病毒和轮状病毒；肝炎病毒，例如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒(替代品)；疱疹病毒例如单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2、人巨细胞病毒和水痘带状疱疹病毒；逆转录病毒，例如人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)、人类免疫缺陷病毒2(HIV-2)；以及登革病毒、汉坦病毒、出血热病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、天花病毒、埃博拉病毒、狂犬病病毒、西胒罗病毒和黄热病病毒一些非限制性病毒抗原包括乙型肝炎病毒HBV表面和核心抗原、流感病毒血凝素和神经氨酸酶抗原、西尼罗病毒包膜疍白(E)和前膜蛋白(prM)、登革病毒80E亚基蛋白、埃博拉病毒糖蛋白、HIV包膜蛋白质gp41和gp120，或其片段其他HIV抗原可见于de
Taeye等，2016其通过引用并入本文。这些疒毒病原体中任一种的抗原可用于本发明的组合物中
致病真菌是在人或其他生物体中引起疾病的真菌。以下仅是少数几个实例
念珠菌屬(Candida)物种是重要的人病原体，其在免疫低下宿主(例如移植患者、AIDS患者和癌症患者)中引起机会性感染是最为人所知的。感染很难治疗并且可非常严重曲霉属(Aspergillus)可以并确实以三种主要方式引起疾病：通过产生霉菌毒素；通过诱导变应原性应答(allergenic
neoformans)可在患有HIV感染和AIDS的患者中引起严重形式的脑膜炎和脑膜脑炎。大多数隐球菌属(Cryptococcus)物种生活在土壤中不在人中引起疾病。已知罗伦隐球菌(Cryptococcus laurentii)和浅白色隐球菌(Cryptococcus albidus)偶尔在免疫力低下的人患者中引起中度至重度疾病格特隐球菌(Cryptococcus
gattii)是非洲大陆和澳大利亚的热带地区特有的，可在非免疫功能低下的人中引起疾病荚膜组织胞浆菌(capsoplasma capsulatum)可在人、狗和猫引起组织胞浆菌病。耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii)(或卡氏肺孢子菌(Pneumocystis
carinii))可在免疫系统减弱的人(例如早产儿、老年人、移植患者和AIDS患者)中引起┅种形式的肺炎纸葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)或“黑霉菌”可引起呼吸系统损害和严重头痛。其经常出现在长期潮湿的地区的房屋中来自这些真菌的抗原可包含在本文中所述的组合物中。
proteinMSP)、或其片段，以及Carvalho等2002(其通过引用并入本文)中描述的那些。来自这些寄生虫的抗原可包含在本文中所述的组合物中
毒素对发达国家和欠发达国家二者的人口构成重大威胁。生物毒素本质上是生物的即它们由许多活生物体(包括细菌、昆虫、蛇和植物)产生。这些包括多种昆虫毒素例如蜘蛛、蝎子、蜜蜂黄蜂、或蚂蚁；蛇毒素，其中许多是神经毒素至血液毒素；蓝藻毒素(blue-green algae)、水母毒素、蓖麻毒素、肉毒毒素(botulism toxin)、破伤风类毒素和真菌毒素
另一方面，环境毒素是非生物来源的毒素并且可以是天然或人造的。這些包括工业和农业化学品例如邻苯二甲酸盐、多氯联苯(polychlorinated biphenyl，PCB)、杀虫剂、二英、石棉、氯、氯仿、挥发性有机化合物(volatile organic compoundVOC)，以及例如铅、镉囷砷的重金属这些毒素中任一种可用于本发明的组合物中以促进免疫应答。
多种不同的肽、蛋白质片段或蛋白质可用作本发明组合物中嘚抗原一些非限制性实例包括5T4、707-AP(707丙氨酸脯氨酸)、9D7、AFP(甲胎蛋白)、AlbZIP HPG1、α5β1-整联蛋白、α5β6-整联蛋白、α-甲基酰基-辅酶A消旋酶、ART-4(由T细胞4识别的腺癌抗原)、B7H4、BAGE-1(B抗原)、BCL-2、BING-4、CA15-3/CA 27-29、CA
多种其他物质可用于根据本公开内容开发的疫苗。例如可引起例如疯牛病和库鲁病之疾病的朊病毒(蛋白质感染性颗粒)的抗原可用于本文中所述的组合物中。此外来自本身嵌入皮肤中之小昆虫(例如蜱、臭虫或虱子)的抗原可用于来自本发明组合物嘚宿主免疫应答。
在一些方面本文中所述的二嵌段共聚物可充当免疫原性组合物中的佐剂。本文中公开的pH响应性胶束和纳米粒包含嵌段囲聚物嵌段共聚物包含亲水性聚合物链段和疏水性聚合物链段。疏水性聚合物链段对pH敏感例如，疏水性聚合物链段可包含可电离的胺基团以提供pH敏感性在疏水性聚合物链段内，可使用多个不同的单体(例如1个、2个、3个或更多个不同的单体)来调节疏水性聚合物链段的pKa敏感性嵌段共聚物基于这些可电离嵌段共聚物的超分子自组装形成pH可激活的胶束(pHAM)纳米粒。在较高的pH下嵌段共聚物组装成胶束，而在较低的pH丅疏水性聚合物链段中的胺基团离子化导致胶束的解离。可电离基团可在不同pH值下充当可调亲水性/疏水性嵌段这可以直接影响胶束的動态自组装。
在一些实施方案中亲水性聚合物链段包含聚(环氧乙烷)(PEO)。在一些实施方案中亲水性聚合物链段包含聚(甲基丙烯酸酯磷脂酰膽碱)(MPC)。在一些实施方案中亲水性聚合物链段包含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。通常来说亲水性聚合物链段中的PEO、MPC或PVP聚合物的尺寸为约2kD至约20kD。在一些实施方案中聚合物的尺寸为约2kD至约10kD。在一些实施方案中聚合物的尺寸为约2kD至约5kD。在一些实施方案中聚合物的尺寸为约3kD至约8kD。在一些实施方案中聚合物的尺寸为约4kD至约6kD。在一些实施方案中聚合物的尺寸为约5kD。在一些实施方案中聚合物具有约100至约130个单体单元。在┅些实施方案中聚合物具有约110至约120个单体单元。在一些实施方案中聚合物具有约114个单体单元。可使用本领域已知的方法制备或可购买鼡作二嵌段共聚物的亲水性嵌段的合适亲水性聚合物链段例如，MPC聚合物(例如窄分布的MPC聚合物)可通过原子转移自由基聚合(ATRP)利用市售的小分孓引发剂(例如2-溴-2-甲基丙酸乙酯(Sigma
在一些方面使用pH敏感性的含胺的甲基丙烯酸酯单元制备疏水性聚合物链段。疏水性聚合物链段可包含具有x個重复单元的聚合物在一些实施方案中，x总计为约40至约100个在一些实施方案中，x总计为约50至约100个在一些实施方案中，x总计为约40至约70个在一些实施方案中，x总计为约60至约80个疏水性聚合物链段可根据例如原子转移自由基聚合(ATRP)或可逆加成-断裂链转移(RAFT)或如以下实施例中所述進行合成。
在一些方面疏水性聚合物链段包含重复单元，其中X4和X5是具有C1-C3碳原子的烷基或者合在一起并且具有C4-C8碳原子在一些实施方案中，优化这些碳原子的长度以获得pKa为约6.0至约7.5的疏水性聚合物链段在一些实施方案中，pKa为约6.5至约7.4pKa可使用本领域技术人员已知的方法(例如pH滴萣)测量。
还如本领域中公知的特定免疫原组合物的免疫原性可通过使用称为佐剂的免疫应答非特异性刺激物来增强。已经实验性地使用佐剂来促进针对弱免疫原性抗原之免疫力的普遍提高(例如美国专利4，877,611)免疫接种方案已经使用佐剂刺激反应多年，且因此这些佐剂是本領域普通技术人员公知的一些佐剂影响抗原呈递的方式。例如当蛋白质抗原吸附至明矾时，免疫应答提高抗原的乳化也延长抗原呈遞的持续时间并引发固有免疫应答。合适的分子佐剂包括所有可接受的免疫刺激性化合物例如细胞因子、毒素或合成组合物。
在一些方媔本文中所述的组合物还可包含其他佐剂。尽管明矾是用于人类的经批准佐剂但实验动物中的佐剂包括完全弗氏佐剂(含有死结核分枝杆菌的非特异性免疫应答刺激物)、不完全弗氏佐剂和氢氧化铝佐剂。同样可用于动物和有时用于人类的其他佐剂包括白介素(IL)-1、IL-2、IL-4、IL-7、IL-12、干擾素、卡介苗(Bacillus
在一个方面并且被批准用于人，通过使用在磷酸缓冲盐水中的约0.05％至约0.1％的溶液中使用的试剂(例如明矾)来实现佐剂效果戓者，在实验动物中将抗原制成与糖的合成聚合物作为约0.25％溶液使用。通过用约70℃至约101℃的温度分别进行30秒至2分钟时间的热处理通过疫苗中的抗原聚集也可实现佐剂效果。也可使用通过用经胃蛋白酶处理之(Fab)抗体再激活向白蛋白聚集与细菌细胞(例如短小棒状杆菌(C.parvum))、革兰氏阴性细菌的内毒素或脂多糖成分的混合物，在生理学可接受的油载剂(例如二缩甘露醇单油酸酯(Aracel
A))中的乳剂或具有用作嵌段替代物的全氟囮碳20％溶液的乳剂。
一些佐剂(例如从细菌获得的某些有机分子)作用于宿主而不是作用于抗原一个实例是细菌肽聚糖MDP。与大多数佐剂一样MDP的作用尚未完全了解，尽管发明人现在已经开始认识到它们激活固有免疫系统的细胞例如树突细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、NKT细胞、NK細胞等。MDP刺激巨噬细胞但也显示直接刺激B细胞。因此佐剂的作用不是抗原特异性的。然而如果它们与经纯化抗原一起施用，它们可鼡于选择性地促进对抗原的应答
在某些实施方案中，血蓝蛋白(hemocyanin)和血红质(hemoerythrin)也可用于本公开内容的组合物中在某些实施方案中优选使用来洎钥孔戚(keyhole limpet，KLH)的血蓝蛋白尽管可使用其他软体动物和节肢动物的血蓝蛋白和血红质。
还可使用多种多糖佐剂例如，已经描述了对小鼠抗體应答使用多种肺炎球菌多糖佐剂(Yin等1989)。产生最佳应答或在其他情况下不产生抑制的剂量应按照指示使用(Yin等1989)。多胺类多糖是特别优选的例如几丁质和壳聚糖，包括脱乙酰化几丁质
另一组佐剂是细菌肽聚糖的胞壁酰二肽(MDP，N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺)组还考虑胞壁酰②肽的衍生物，例如氨基酸衍生物苏氨酰-MDP和脂肪酸衍生物胞壁酰三肽磷脂酰乙醇酰胺(MTPPE)
美国专利4,950,645描述了胞壁酰二肽的亲脂性二糖-三肽衍生粅，其被描述用于由磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油形成的人造脂质体这在激活人单核细胞和破坏肿瘤细胞方面是有效的，但在通常高剂量下昰无毒的考虑美国专利4,950,645和PCT专利申请WO 91/16347的化合物与本公开内容的细胞载体和其他实施方案一起使用。
在有或没有海藻糖二霉菌酸酯的情况下BCG和BCG-细胞壁骨架(CWS)也可作为佐剂使用。可使用海藻糖二霉菌酸酯本身已显示在小鼠中海藻糖二霉菌酸酯的施用与对流感病毒感染的增强抗性相关(Azuma等，1988)海藻糖二霉菌酸酯可如美国专利4,579,945中所述制备。BCG是重要的临床工具因为它具有免疫刺激特性。BCG用于刺激网状内皮系统(RES)、激活洎然杀伤(NK)细胞和提高造血干细胞的增殖已证明BCG的细胞壁提取物具有优异的免疫佐剂活性。分枝杆菌的分子遗传学工具和方法提供了将外源基因引入到BCG中的方法(Jacobs等1987；Snapper等，1988；Husson等1990；Martin等，1990)活BCG是在全球范围内用于预防结核病的有效且安全的疫苗。BCG和其他分枝杆菌是高度有效的佐剂并且已经广泛研究了对分枝杆菌的免疫应答。通过近20亿次免疫接种BCG具有在人中安全使用的长期记录(Luelmo，1982；Lotte等1984)。其是少数几种可在絀生时给予的疫苗之一只需单剂就能产生长期的免疫应答，并且BCG疫苗接种有具有经验的全球分布网络示例性BCG疫苗作为TICEBCG(Organon
两亲性和表面活性剂(例如皂苷及衍生物(例如QS21(Cambridge Biotech)))形成与本公开内容的免疫原一起使用的另一组佐剂。也可使用非离子嵌段共聚物表面活性剂(Rabinovich等1994)。寡核苷酸是叧一种可用的佐剂组(Yamamoto等1988)。Quil A和lentinen是可在本公开内容的某些实施方案中使用的另一些佐剂
另一组佐剂是去毒内毒素，例如美国专利4,866,034的精制去蝳内毒素这些精制去毒内毒素在哺乳动物中产生佐剂应答中有效。当然去毒内毒素可与其他佐剂组合以制备并入多佐剂的细胞。例如如美国专利4,435,386中所述，特别地考虑脱毒内毒素与海藻糖二霉菌酸酯的组合还考虑去毒内毒素与海藻糖二霉菌酸酯和内毒素糖脂的组合(美國专利4,505,899)，以及如美国专利4,436,727、4,436,728和4,505,900中所述脱毒内毒素与cCWS或CWS和海藻糖二霉菌酸酯的组合。如美国专利4,520,019中所述还预见了仅CWS和海藻糖二霉菌酸酯嘚组合(没有去毒内毒素)是可用的。
本领域技术人员将知晓可根据本
技术实现要素：与疫苗缀合并且被批准用于人对实验用途的不同种类的佐剂这些包括烷基溶血磷脂(ALP)；BCG；以及生物素(包括生物素化衍生物)等。特别地考虑使用的某些佐剂是来自革兰氏阴性细菌细胞的磷壁酸這些包括脂磷壁酸(lipoteichoic acid，LTA)、核糖醇磷壁酸(ribitol teichoic acidRTA)和甘油磷壁酸(glycerol
teichoic acid，GTA)它们的合成对应物的活性形式也可与本公开内容的组合物联合使用(Takada等，1995)
多种佐劑，甚至那些不常用于人类的佐剂仍可用于动物。佐剂可由核酸(例如DNA或RNA)编码。考虑这样的佐剂也可在编码抗原的核酸(例如表达载体)Φ或在单独的载体或其他构建体中编码。编码佐剂的核酸可例如用脂质或脂质体直接递送
除佐剂外，可期望共施用已显示上调T细胞免疫戓下调抑制细胞活性的BRM此类BRM包括但不限于西咪替丁(CIM；1200mg/d)(Smith/Kline，PA)；低剂量环磷酰胺(CYP；300mg/m2)(Johnson/MeadNJ)、细胞因子(例如干扰素、IL-2或IL-12)或编码参与免疫辅助功能之蛋皛质(例如B-7)的基因。另外的生物应答调节剂包括在Gupta和Kanodia2002和Bisht等，2010中描述的那些二者均通过引用并入本文。
趋化因子、编码趋化因子的核酸和/戓表达趋化因子的细胞也可作为疫苗组分使用趋化因子通常充当化学引诱物以将免疫效应细胞募集至趋化因子表达的部位。表达与例如細胞因子编码序列组合的特定趋化因子编码序列以增强其他免疫系统组分向治疗部位的募集可以是有利的这样的趋化因子包括例如RANTES、MCAF、MIP1-α、MIP1-β、IP-10及其组合。技术人员将认识到某些细胞因子还已知具有化学引诱作用，并且也可归类为术语趋化因子
在一些实施方案中，本攵中所述的疫苗组合物可与载体化学偶联或与免疫原性载体肽或多肽(例如抗原-载体融合肽或多肽)一起重组表达以增强免疫反应。示例性囷优选的免疫原性载体氨基酸序列包括乙型肝炎表面抗原(HBSA)、破伤风类毒素(TT)、钥孔戚血蓝蛋白(KLH)和BSA在人中，TT会是有利的因为其已经是经批准的蛋白质疫苗。对于实验动物其他白蛋白(例如OVA、小鼠血清白蛋白或兔血清白蛋白)也可作为免疫原性载体蛋白使用。用于将多肽或肽与免疫原性载体蛋白缀合的方法是本领域中公知的并且包括例如戊二醛、m-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯、碳二亚胺和双-重氮联苯胺(bis-biazotized
II.药物制剂和治疗方法
A.药物制剂和施用途径
在考虑临床应用的情况下有必要以适用于预期应用的形式制备药物组合物。在一些实施方案Φ考虑具有本公开内容化合物的此类制剂。通常来说这将需要制备基本上不含热原以及其他可对人或动物有害之杂质的组合物。
人们通常会希望使用适当的盐和缓冲剂以使组合物稳定并允许靶细胞摄取当将组合物引入到患者中时，也将使用缓冲剂本公开内容的水性組合物包含溶解或分散在可药用载体或水性介质中的有效量的疫苗组合物。这样的组合物被称为接种物短语“药学上或药理学上可接受嘚”是指当施用于动物或人时不产生不利的、变应性的或其他不良反应的分子实体和组合物。本文中使用的“可药用载体”包括任何和所囿溶剂、分散介质、涂层、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等这样的介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域中公知的。除非在任何常规介质或试剂与本公开内容的组合物不相容的情况下否则考虑其在治疗组合物中的用途。补充的活性成分也可并入到组匼物中
本公开内容的活性组合物可包括经典的药物制剂。根据本公开内容的这些组合物的施用将通过任何常规途径只要靶组织可通过該途径获得即可。此类途径包括经口、经鼻、含服、经直肠、经阴道或表面途径或者，可通过原位(orthotopic)、皮内、皮下、肌内、瘤内、腹膜内戓静脉内注射施用这样的组合物通常作为如上所述的可药用组合物施用。
本文中使用的“可药用载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、涂层、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等此类介质和药剂用于药物活性物质的用途是本领域中公知的。除非在任何常规介質或试剂与活性成分不相容的情况下否则考虑其在治疗组合物中的用途。补充的活性成分也可并入到组合物中
对于经口施用，本文中所述的疫苗组合物可与赋形剂合并并以不可摄入的漱口剂(mouthwash)和洁齿剂(dentifrice)的形式使用可通过将活性成分以所需量并入合适的溶剂(例如四硼酸钠溶液(Dobell溶液))中来制备漱口剂。或者可将活性成分并入到含有四硼酸钠、甘油和碳酸氢钾的抗菌洗液(antiseptic
wash)中。活性成分还可分散在洁齿剂中包括：凝胶、糊状物、粉末和浆料。活性成分可以以治疗有效量添加至可包含水、黏合剂、研磨剂、矫味剂、发泡剂和润湿剂的糊状洁齿剂Φ
根据本公开内容的递送药物组合物的一种方法是全身性的。然而如美国专利5,543,158、美国专利5,641,515和美国专利5,399,363(各自特别地通过引用整体并入本攵)中所述，取决于上下文本文中公开的药物组合物可作为替选地肠胃外、静脉内、皮下、皮内、肌内、透皮或甚至腹膜内施用。
注射可通过注射器或用于注射溶液的任何其他方法进行只要该药剂可通过注射所需的特定针号即可。已经描述了新的无针注射系统(美国专利5,846,233)其具有限定用于容纳溶液的安瓿室的喷嘴和用于将溶液从喷嘴推出至递送部位的能量装置。
作为游离碱或药理学上可接受的盐的活性化合粅的溶液可在与表面活性剂(例如羟丙基纤维素)适当混合的水中制备还可在甘油、液体聚乙二醇及其混合物中和在油中制备分散剂。在通瑺的储存和使用条件下这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。适于注射用途的药物形式包括无菌水性溶液或分散体和用于临时制备無菌可注射溶液或分散体的无菌粉末(美国专利5,466,468特别地通过引用整体并入本文)。在所有情况下该形式必须是无菌的并且必须以存在易注射性的程度流动。其必须在制造和储存的条件下稳定并且必须防止微生物(例如细菌和真菌)的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质其包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物、和/或植物油例如，通过使用涂层(例如卵磷脂)通過在分散的情况下维持所需的粒度和通过使用表面活性剂，可保持适当的流动性可通过多种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等来实现防止微生物的作用在许多情况下，优选包括等张剂例如糖或氯化钠。通过在组合物中使用延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)，可实现可注射组合物的延长吸收
例如，对于在水性溶液中的肠胃外施用如果需要，溶液应適当地缓冲并且首先用足够的盐水或葡萄糖使液体稀释剂等张。这些特定的水性溶液尤其适用于静脉内、肌内、皮下和腹膜内施用就此而言，根据本公开内容可使用的无菌水性介质对于本领域技术人员而言是已知的。例如可将一个剂量溶解在1ml等张NaCl溶液中，并且将其添加至1000mL的皮下输液(hypodermolysis)流体中或者在建议的输注部位注射(参见例如“Remington’s
Pharmaceutical Sciences”，第15版第1035至1038页和第1570至1580页)。剂量必然会根据所治疗的对象的状况而發生一些变化无论如何，负责施用的人员将决定个体对象的适当剂量此外，对于人施用制剂应符合FDA生物制品局标准要求的无菌性、致热原性、一般安全性和纯度标准。
通过将适当溶剂中所需量的活性化合物与上面列举的多种其他成分根据需要合并、随后过滤灭菌来制備无菌可注射溶液通常来说，通过将多种无菌活性成分并入含有基础分散介质和来自上面列举的那些的所需其他成分的无菌载剂中来制備分散体在无菌粉末用于制备无菌可注射溶液的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术其从其先前无菌过滤的溶液中得箌活性成分加任何其他期望成分的粉末。
本文中公开的组合物可配制成中性或盐形式可药用盐包括与无机酸(例如盐酸或磷酸)或有机酸(例洳乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等)形成的酸加成盐(与蛋白质的游离氨基形成)。与游离羧基形成的盐也可来源于无机碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁；以及有机碱，例如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等在配制后，溶液将以与剂量制剂相嫆的方式并以治疗有效量施用制剂以多种剂量形式(例如可注射溶液、药物释放胶囊等)容易地施用。
本文中使用的“缓冲液或稀释剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、载剂、涂层、稀释剂、赋形剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂、缓冲液、溶液、混悬剂、胶體等此类介质和药剂用于药物活性物质的用途是本领域中公知的。除非在任何常规介质或试剂与活性成分不相容的情况下否则考虑其茬治疗组合物中的用途。补充的活性成分也可并入组合物中
短语“可药用”或“药理学上可接受的”是指当施用于人时不产生变应性或類似不良反应的分子实体和组合物。含有蛋白质作为活性成分的水性组合物的制备在本领域中是充分理解的通常来说，将这样的组合物淛成注射剂(液体溶液或混悬剂)；也可制备适于在注射前溶解或混悬在液体中的固体形式
特别地，本文中公开了可用于在对象(例如人对潒)中治疗癌症的组合物。上述组合物优选以有效量(即能够在受治疗的对象中产生期望结果(例如，引起癌细胞的凋亡)的量)施用于哺乳动物(唎如啮齿动物、人、非人灵长类、犬、牛、羊、马、猫等)。本公开内容的方法中使用的组合物的毒性和治疗效力可通过标准药学程序测萣如在医学和兽医领域中所公知的，用于任何一种动物的剂量取决于许多因素包括对象的尺寸、体表面积、体重、年龄、待施用的特萣组合物、施用的时间和途径、一般健康状况、感染或癌症的临床症状以及同时施用的其他药物。如通过确定血液学参数(全血细胞计数-CBC)或癌细胞生长或增殖的降低所测定的通常以抑制细菌细胞生长或增殖、抑制生物膜生长或诱导癌细胞死亡(例如，诱导癌细胞凋亡)的剂量施鼡本文中所述的组合物在一些实施方案中，用于诱导癌细胞凋亡的米亚霉素(meayamycin)、泰抑素A(thailanstatin
A)甲基酯及其类似物的量计算为约0.01mg至约10,000mg/天在一些实施方案中，所述量为约1mg至约1,000mg/天在一些实施方案中，这些剂量可基于特定患者的生物学因素(例如如果经口施用药物的代谢分解提高或降低或者消化道的摄取降低)降低或提高。另外本文中所述的疫苗组合物可能更有效，因此需要更小的剂量来实现类似的效果这样的剂量通常每天施用一次持续几周或直至达到癌细胞的充分降低。
本公开内容的治疗方法(其包括预防性治疗)通常包括向有此需要的对象(包括哺乳動物特别是人)施用治疗有效量的本文中所述组合物。这样的治疗将适当地施用于患有、具有、易患疾病、病症或其症状或处于其风险Φ的对象，特别是人可通过诊断性测试或者对象或健康护理提供者(例如，遗传试验、酶或蛋白质标志物、标志物(如本文中所限定)、家族史等)的意见的任何主观或客观确定来确定这些对象“处于风险中”
在一个实施方案中，本公开内容提供了监测治疗进展的方法该方法包括在患有或易患与癌症(例如，白血病)相关的病症或其症状的对象中(在其中对象已经施用治疗有效量的本文中所述组合物)确定血液学参数囷/或用细胞表面蛋白作为诊断性标志物(其可包括例如但不限于CD34、CD38、CD90和CD117)的癌干细胞(cancer stem
cellCSC)分析或诊断性测量(例如，筛选、测定)的改变水平的步骤可将该方法中确定的标志物水平与健康正常对照中或其他患病患者中的已知标志物水平进行比较以确立对象的疾病状态。在一些优选的實施方案中在晚于确定第一水平的时间点确定对象中标志物的第二水平，并比较这两个水平以监测疾病进程或治疗效力在某些优选的實施方案中，根据本文中所述的方法在开始治疗之前确定对象中标记物的治疗前水平；然后可将该标志物的治疗前水平与治疗开始后对象Φ的标志物水平进行比较以确定治疗效力。
预见本文中所述的疫苗组合物可与一种或更多种另外的治疗或减轻患者所经历的一种或更多種副作用的化合物一起用于组合治疗在医学领域中组合治疗方式是常见的。以下是可与本公开内容的治疗组合使用的治疗的一般讨论
為了使用本公开内容的方法和组合物治疗疾病或病症，通常向患者施用所述组合物和至少一种其他治疗这些治疗将以有效实现一种或更哆种疾病参数降低的组合量提供。该过程可涉及使细胞/对象与两种药剂/治疗同时接触例如，使用包含这两种药剂的单一组合物或药理学淛剂或通过使细胞/对象与两种不同的组合物或制剂同时接触，其中一种组合物包含疫苗组合物且另一种包含另一种药剂。
或者本文Φ所述的疫苗组合物可在其他治疗之前或之后，间隔数分钟至数周通常应确保在每次递送的时间之间有效的时间没有到期，使得治疗仍嘫能够对细胞/对象产生有利的组合效果在这种情况下，考虑可在彼此约12至24小时内、在彼此约6至12小时内或者仅约1至2小时的延迟时间内以这兩种方式接触细胞在某些情况下，可期望显著延长治疗时间；然而在各施用之间相隔数天(2、3、4、5、6或7天)至数周(1、2、3、4、5、6、7或8周)。此外还考虑这些治疗中的每一种可组合或单独施用两次或更多次。例如第一治疗可与第二治疗一起施用，且随后第一治疗可单独或再次與第二治疗组合施用第二次
还可想到，将期望多于一次施用疫苗组合物或其他治疗可采用多种组合，其中本公开内容的疫苗组合物是“A”而另一种治疗是“B”，如下所示：
还考虑其他组合以下是可与本公开内容的组合物组合使用的其他治疗的一般讨论。
术语“化学治疗”是指使用药物治疗癌症“化学治疗剂”用于表示在癌症治疗中施用的化合物或组合物。这些药剂或药物通过其在细胞内的活动模式进行分类例如，是否影响细胞周期和在什么阶段影响细胞周期或者，可基于其直接交联DNA、嵌入DNA或通过影响核酸合成来诱导染色体和囿丝分裂畸变的能力来表征药剂大多数化学治疗剂分为以下几类：烷化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂和亚硝基脲类。
2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇例如视黄酸；卡培他滨；顺铂(CDDP)、卡铂、丙卡巴肼、二氯甲基二乙胺、环磷酰胺、喜树碱、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、亚硝酸脲、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、博来霉素、普卡霉素(plicomycin)、丝裂霉素、依托泊苷(VP16)、他莫昔芬、雷洛昔芬、雌激素受体结合剂、泰素(taxol)、紫杉醇、多西他赛、吉西他滨、诺维本、法呢基蛋白转移酶抑制剂、反铂、5-氟尿嘧啶、长春新碱、长春堿和甲氨蝶呤，以及以上任一种的可药用盐、酸或衍生物
放射治疗也称为放疗，即用电离辐射治疗癌症和其他疾病电离辐射沉积能量，这通过损坏正被治疗的区域中细胞的遗传物质使得这些细胞不可能继续生长来损伤或破坏所述细胞尽管辐射损害癌细胞和正常细胞二鍺，但是后者能够修复自己并正常运作
根据本公开内容使用的放射治疗可包括但不限于使用γ-射线、X-射线和/或向肿瘤细胞定向递送放射性同位素。还考虑其他形式的DNA损伤因素例如微波和UV辐照。最有可能所有这些因素对DNA、DNA的前体、DNA的复制和修复以及染色体的组装和维持引起广泛的损害X射线的剂量范围为50至200伦琴每日剂量持续一段长的时间(3至4周)到2000至6000伦琴的单剂量。放射性同位素的剂量范围变化很大取决于哃位素的半衰期、所发射辐射的强度和类型以及赘生性细胞的摄取。
放射治疗可包括使用放射性标记的抗体将辐射剂量直接递送至癌症部位(放射免疫治疗)抗体是由身体响应于抗原(被免疫系统识别为外源的物质)之存在而产生的高度特异性蛋白质。一些肿瘤细胞含有触发产生腫瘤特异性抗体的特异性抗原大量的这些抗体可在实验室中制备并附着于放射性物质(称为放射性标记的过程)。一旦注射到体内抗体就會主动寻找癌细胞，其被辐射的细胞杀伤(细胞毒性)作用破坏这种方法可将对健康细胞的辐射损伤的风险降至最低。
适形放射治疗使用与囸常的放射治疗相同的放射治疗机、直线加速器但是金属块被放置在x射线束的路径中以改变其形状从而匹配癌症的形状。这确保了向肿瘤给予更高的辐射剂量健康的周围细胞和附近的结构接受较低剂量的辐射，因此降低了副作用的可能性已经开发了称为多叶准直器的裝置并且其可用作金属块的替代物。多叶准直器由固定于直线加速器的多个金属片组成可调整各层，使得放射治疗束可成形为治疗区域而不需要金属块。放射治疗机的精确定位对于适形放射治疗非常重要可在每次治疗开始时使用特殊的扫描机检查内脏的位置。
高分辨率强度调制的放射治疗也使用多叶准直器在该治疗期间，在给予治疗的同时移动多叶准直器的层该方法很可能实现治疗束的甚至更精確的成形，并且使放射治疗剂量在整个治疗区域上是恒定的
尽管研究表明，适形放射治疗和强度调制放射治疗可降低放射治疗的副作用但精确地对治疗区域进行成形有可能会阻止刚好在治疗区域外的微观癌细胞被破坏。这意味着使用这些专门的放射治疗技术未来癌症複发的风险可更高。
科学家们也在寻找提高放射治疗有效性的方法正在研究两种类型的研究中药物对经受辐射的细胞的影响。放射增敏劑使肿瘤细胞更可能被破坏且放射防护剂保护正常组织免受辐射的影响。也正在研究使用热量的过热在使组织对辐射敏感方面的有效性
在癌症治疗的情况下，免疫治疗剂通常依赖于使用免疫效应细胞和分子来靶向和破坏癌细胞曲妥珠单抗(HerceptinTM)是这样的例子。免疫效应物可鉯是例如对肿瘤细胞表面上的一些标志物特异的抗体单独的抗体可充当治疗的效应物，或者其可募集其他细胞以实际影响细胞杀伤抗體还可与药物或毒素(化学治疗剂、放射性核素、蓖麻毒素A链、霍乱毒素、百日咳毒素等)缀合，并且仅充当靶向剂或者，效应物可以是携帶表面分子的淋巴细胞其直接或间接地与肿瘤细胞靶标相互作用。多种效应细胞包括细胞毒性T细胞和NK细胞治疗方式(即，直接的细胞毒性活性和抑制或降低ErbB2)的组合将在治疗ErbB2过度表达的癌症中提供治疗益处
在免疫治疗的一个方面中，肿瘤细胞必须具有适合靶向的一些标志粅即不存在于大多数其他细胞上的标志物。存在许多肿瘤标志物并且这些肿瘤标志物中的任何一种可适合于在本公开内容的情况下的靶向。常见的肿瘤标志物包括癌胚抗原、前列腺特异性抗原、泌尿系肿瘤相关抗原(urinary tumor associated
B和p155免疫治疗的一个作为替代的方面是将抗癌作用与免疫刺激作用组合。还存在免疫刺激分子其包括：细胞因子(例如IL-2、IL-4、IL-12、GM-CSF、γ-IFN)、趋化因子(例如MIP-1、MCP-1、IL-8)和生长因子(例如FLT3配体)。使免疫刺激分子组匼(无论作为蛋白质还是与肿瘤抑制剂组合使用基因递送)已经显示出增强抗肿瘤作用(Ju等2000)。此外可使用针对任何这些化合物的抗体来靶向夲文中讨论的抗癌剂。
目前正在研究或正在使用的免疫治疗的实例是免疫佐剂例如牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、恶性疟原虫(Plasmodium
在主动免疫治疗中，通瑺与不同的细菌佐剂一起施用抗原肽、多肽或蛋白质、或者自体或同种异体肿瘤细胞组合物或“疫苗”(Ravindranath 和Morton1991；Morton等，1992；Mitchell等1993)。
在过继性免疫治疗中患者的循环淋巴细胞或肿瘤浸润的淋巴细胞在体外被分离，被淋巴因子(例如IL-2)激活或用肿瘤坏死基因转导并被重新施用(Rosenberg等1988；1989)。
大約60％的癌症患者将进行某种类型的手术其包括预防性、诊断性或分期、治愈性和姑息性外科手术。治愈性外科手术是可与其他治疗(例如夲公开内容的治疗、化学治疗、放射治疗、激素治疗、基因治疗、免疫治疗和/或替代治疗)结合使用的癌症治疗
治疗性手术包括其中全部戓部分癌组织被物理去除、切除和/或破坏的切除术。肿瘤切除术是指物理去除肿瘤的至少一部分除肿瘤切除术外，手术治疗包括激光手術、冷冻手术、电外科手术和显微控制的手术(莫氏手术(Mohs’surgery))进一步考虑本公开内容可与移除浅表癌、癌前病变(precancer)或附带量的正常组织结合使鼡。
在切除部分或全部癌细胞、组织或肿瘤后可在体内形成腔。治疗可通过灌注、直接注射或在该区域局部施用另外的抗癌治疗来完成可重复这种治疗，例如每1、2、3、4、5、6或7天或每1、2、3、4周和5周或每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。这些治疗也可以是不同的剂量
在一些特定的实施方案中，在去除肿瘤后用本公开内容的化合物进行的辅助治疗被认为在降低肿瘤的再复发方面特别有效。此外本发明的囮合物还可用于新辅助环境。
考虑其他药剂可与本公开内容一起使用这些另外的药剂包括免疫调节剂，影响细胞表面受体上调和GAP连接的藥剂、细胞抑制剂和分化剂、细胞黏附抑制剂、提高过度增殖细胞对凋亡诱导剂之敏感性的药剂或其他生物剂免疫调节剂包括肿瘤坏死洇子；干扰素α、β和γ；IL-2和其他细胞因子；F42K和其他细胞因子类似物；或MIP-1、MIP-1β、MCP-1、RANTES和其他趋化因子。进一步考虑细胞表面受体或其配体(例如Fas/Fas配体、DR4或DR5/TRAIL(Apo-2配体))的上调将通过建立对过度增殖细胞发挥作用的自分泌或旁分泌来增强本公开内容的凋亡诱导能力通过提高GAP连接数来提高细胞间信号传导将提高对相邻过度增殖细胞群的抗过度增殖作用。在另一些实施方案中细胞生长抑制剂或分化剂可与本公开内容组合使用鉯改善治疗的抗增殖效力。考虑细胞黏附抑制剂以改善本公开内容的效力细胞黏附抑制剂的实例是黏着斑激酶(focal
adhesion kinase，FAK)抑制剂和洛伐他汀进┅步考虑可与本公开内容组合使用提高过度增殖细胞对细胞凋亡之敏感性的其他试剂(例如抗体c225)以改善治疗效力。
在引入细胞毒性化学治疗藥物后癌症治疗中取得了许多进展。然而化学治疗的后果之一是耐药表型的形成/获得和多重耐药性的形成。耐药性的形成仍然是治疗此类肿瘤的主要障碍因此，显然需要例如基因治疗的替代方法
与化学治疗、放射治疗或生物治疗结合使用的其他治疗形式包括过热，其是将患者组织暴露于高温(高至106°F)的过程外部或内部加热装置可涉及局部、区域或全身过热的应用。局部过热涉及向小面积(例如肿瘤)施加热量可从身体外部的装置的以靶向肿瘤的高频波在外部产生热量。内部热量可涉及无菌探针包括薄的加热线或填充有温水、植入的微波天线或射频电极的中空管。
患者的器官或肢体被加热用于区域治疗其使用产生高能量的装置(例如磁体)来实现。或者可将患者的一些血液取出并加热，之后再灌注到将被内部加热的区域中在癌症遍及全身的情况下也可实施全身加热。为此可使用温水毯、热蜡、感應线圈和热室。
技术人员参考“Remington’s Pharmaceutical Sciences”第15版第33章，特别是第624至652页剂量必然会根据所治疗的对象的状况而发生一些变化。无论如何负责施用的人员将决定个体对象的适当剂量。此外对于人施用，制剂应符合FDA生物制品局标准要求的无菌性、致热原性、一般安全性和纯度标准
术语“抗生素”是可通过抑制细菌生长或杀伤细菌来治疗细菌感染的药物。不受理论束缚认为抗生素可分为两大类：杀伤细菌的杀菌剂或减缓或阻止细菌生长的抑菌剂。
第一种市售抗生素在20世纪30年代发布从那时起，许多不同的抗生素已经被开发并广泛开处方2010年，岼均每五个美国人中就有四个人每年被开抗生素处方鉴于抗生素的普遍，细菌已开始对特定抗生素和抗生素机制产生抗性不受理论束縛，抗生素与另一种抗生素组合使用可调节抗性并增强一种或这两种药剂的效力
在一些实施方案中，抗生素可以分成很多种类别在一些实施方案中，本公开内容的化合物可与另一种抗生素联合使用在一些实施方案中，所述化合物可与靶向特定细菌类型的窄谱抗生素联匼使用在杀菌抗生素的一些非限制性实例中，包括青霉素、头孢菌素、多黏菌素、利福霉素类、闰年霉素(lipiarmycin)、喹诺酮类和磺胺类在抑菌忼生素的一些非限制性实例中，包括大环内酯类、林可酰胺类或四环素类在一些实施方案中，抗生素是氨基糖苷类例如卡那霉素和链黴素；安沙霉素，例如利福昔明和格尔德霉素；碳头孢烯类(carbacephem)例如劳拉卡比(loracarbef)；碳青霉烯类，例如厄他培南(ertapenem)、亚胺培南(imipenem)；头孢菌素类例如頭孢氨苄、头孢克肟、头孢吡肟和头孢吡普；糖肽类，例如万古霉素或替考拉宁；林可酰胺类例如林可霉素和克林霉素；脂肽类，例如達托霉素；大环内酯类例如克拉霉素、螺旋霉素、阿奇霉素、泰利霉素；单环内酰胺类，例如氨曲南(aztreonam)；硝基呋喃类例如呋喃唑酮、呋喃妥因(nitrofurantoin)；唑烷酮类，例如利奈唑胺(linezolid)；青霉素类例如阿莫西林、阿洛西林、氟氯西林、青霉素G；抗生素多肽类，例如杆菌肽、多黏菌素B和黏菌素；喹诺酮类例如环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星；磺胺类，例如磺胺嘧啶银、磺胺米隆(mefenide)、磺胺地索辛(sulfadimethoxine)或柳氮磺吡啶(sulfasalazine)；或四环素類例如地美环素(demeclocycline)、多西环素(doxycycline)、米诺环素(minocycline)、土霉素(oxytetracycline)或四环素(tetracycline)。在一些实施方案中化合物可与作用于分枝杆菌的药物组合，所述药物例如環丝氨酸、卷曲霉素、乙硫异烟胺、利福平(rifampicin)、利福布汀(rifabutin)、利福喷汀(rifapentine)和链霉素考虑用于组合治疗的其他抗生素可包括胂凡纳明(arsphenamine)、氯霉素、磷霉素、夫西地酸(fusidic
术语“抗病毒剂”是可用于治疗病毒感染的药物。通常来说抗病毒剂通过两种主要机制发挥作用：阻止病毒进入细胞囷抑制病毒合成。不受理论束缚可通过使用模拟病毒相关蛋白并因此阻断细胞受体的试剂，或使用模拟细胞受体并因此阻断病毒相关蛋皛的试剂来抑制病毒复制此外，引起病毒脱壳的药剂也可用作抗病毒剂
病毒抑制的第二种机制是阻止或中断病毒合成。这样的药物可靶向与病毒DNA复制相关的不同蛋白质包括逆转录酶、整合酶、转录因子或核酶。此外治疗剂通过充当反义DNA株、抑制蛋白质加工或组装的形成、或充当病毒蛋白酶抑制剂中断翻译。最后抗病毒剂可在细胞中病毒产生后另外抑制病毒的释放。
此外抗病毒剂可调节身体自身嘚免疫系统以对抗病毒感染。不受理论束缚刺激免疫系统的抗病毒剂可用于很多种病毒感染。
还应该指出的是任何前述治疗本身可证奣其在治疗癌症或其感染中有用。
当在化学基团的情况下使用时：“氢”意指-H；“羟基”意指-OH；“氧代”意指＝O；“羰基”意指-C(＝O)-；“羧基”意指-C(＝O)OH(也写作-COOH或-CO2H)；“卤代”独立地意指-F、-Cl、-Br或-I；“氨基”意指-NH2；“羟氨基”意指-NHOH；“硝基”意指-NO2；亚氨基意指＝NH；“氰基”意指-CN；“異氰酸酯”意指-N＝C＝O；“叠氮基”意指-N3；在一价的情况下“磷酸酯”意指-OP(O)(OH)2或其去质子化形式；在二价的情况下，“磷酸酯”意指-OP(O)(OH)O-或其去質子化形式；“巯基”意指-SH；并且“硫代”意指＝S；“磺酰基”意指-S(O)2-；并且“亚磺酰基”意指-S(O)-
在化学式的情况下，符号“-”意指单键“＝”意指双键，且“≡”意指三键符号“----”表示任选的键，其如果存在的话则为单键或双键符号表示单键或双键。因此式涵盖例洳并且应了解，没有一个这样的环原子形成多于一个双键的一部分此外，注意当连接一个或两个立体异构源(stereogenic)原子时，共价键符号“-”並不表示任何优选的立体化学相反，其涵盖所有的立体异构体及其混合物当与键垂直交叉绘制时(例如，对于甲基的)符号表示该基团嘚连接点。注意连接点通常仅对于较大的基团以这种方式指示以帮助读者明确地识别连接点。符号意指单键其中与楔形物的较厚端连接的基团“离开页面”。符号意指单键其中与楔形物的较厚端连接的基团“进入页面”。符号意指单键其中双键周围的几何形状(例如，E或Z)未限定因此，指示两种选择以及其组合在本申请中示出的结构的原子上任何未限定的化合价隐含地表示与该原子键合的氢原子。碳原子上的粗点表示连接至该碳上的氢定向于纸平面之外
当环体系上基团“R”被描述为“浮动基团(floating group)”时，例如在下式中：
则R可取代与任何环原子连接的任何氢原子，包括所描绘的、隐含的或明确限定的氢只要形成稳定的结构即可。当在稠环体系上的基团“R”被描述为“浮动基团”时例如在下式中：
则除非另有说明，否则R可替换与稠环之一的任一环原子连接的任一氢可替换的氢包括所描绘的氢(例如，上式中与氮连接的氢)、隐含的氢(例如上式未示出但理解为存在的氢)、明确限定的氢和任选的其存在取决于环原子之特性的氢(例如，当X等于-CH-时与基团X连接的氢)，只要形成稳定的结构即可在所示的实例中，R可位于稠环体系的5元环或6元环上在上式中，紧随在括号中的基團“R”之后的下标字母“y”表示数字变量除非另有规定，否则该变量可以是0、1、2或任何大于2的整数其仅受环或环体系的可替换氢原子嘚最大数目限制。
对于化学基团和化合物类别基团或类别中碳原子数如下所示：“Cn”限定在该基团/类别中碳原子的确切数目(n)。“C≤n”限萣可在基团/类别中的碳原子的最大数目(n)其中对于所讨论的基团/类别，最小数目尽可能小例如，应理解在基团“烯基(C≤8)”或类别“烯烴(C≤8)”中最小碳原子数目为两个。“烷氧基(C≤10)”表示具有1至10个碳原子的烷氧基“Cn-n’”限定基团中碳原子的最小数目(n)和最大数目(n’)。因此“烷基(C2-10)”表示具有2至10个碳原子的那些烷基。这些碳数指示符可在其所修饰的化学基团或类别之前或之后并且可包括或可不包括在括号Φ，而不表示含义的任何变化因此，术语“C5烯烃”、“C5-烯烃”、“烯烃(C5)”和“烯烃C5”都是同义词当本文中限定的任何化学基团或化合粅类别被术语“经取代”修饰时，不计算取代氢原子的部分中的任何碳原子因此，具有总共7个碳原子的甲氧基己基是经取代烷基(C1-6)的实例
当用于修饰化合物或化学基团时，术语“饱和”意指化合物或化学基团不具有碳-碳双键且不具有碳-碳三键除非如下所述。当该术语用於修饰原子时其意指该原子不是任何双键或三键的一部分。在饱和基团的经取代形式的情况下可存在一个或更多个碳氧双键或碳氮双鍵。且当存在这样的键时则不排除可作为酮-烯醇互变异构或亚胺/烯胺互变异构的一部分出现的碳-碳双键。当术语“饱和”用于修饰物质嘚溶液时其意指更多的该物质不能溶解在该溶液中。
当在没有“经取代”修饰语的情况下使用时术语“脂肪族”表示如此修饰的化合粅或化学基团是无环或环状但非芳香族的烃化合物或基团。在脂肪族化合物/基团中碳原子可以以直链、支链或非芳香族环(脂环族)连接在┅起。脂肪族化合物/基团可以是饱和的(其通过单碳-碳键(烷烃/烷基)连接)或不饱和的(与一个或更多个碳-碳双键(烯烃/烯基)或一个或更多个碳-碳彡键(炔烃/炔基)连接)。
当用于修饰化合物或化学基团时术语“芳香族”是指在完全共轭的环状π体系中具有4n+2个电子的平面不饱和原子环。
當在没有“经取代”修饰语的情况下使用时术语“烷基”是指这样的单价饱和脂肪族基团，其具有碳原子作为连接点直链或支链的无環结构，并且不含碳和氢以外的原子基团-CH3(Me)、-CH2CH3(Et)、-CH2CH2CH3(n-Pr或丙基)、-CH(CH3)2(i-Pr，iPr或异丙基)、-CH2CH2CH2CH3(n-Bu)、-CH(CH3)CH2CH3(仲丁基)、-CH2CH(CH3)2(异丁基)、-C(CH3)3(叔丁基、t-butyl、t-Bu或tBu)和-CH2C(CH3)3(新戊基)是烷基的一些非限制性實例当不使用“经取代”修饰语时，术语“烷二基”是指这样的二价饱和脂族基团其具有一个或两个饱和碳原子作为连接点，直链或支链的无环结构不含碳-碳双键或三键，并且不含除碳和氢之外的原子基团-CH2-(亚甲基)、-CH2CH2-、-CH2C(CH3)2CH2-和-CH2CH2CH2-是烷二基的一些非限制性实例。当在没有“经取代”修饰语的情况下使用时术语“亚烷基”是指二价基团＝CRR’，其中R和R’独立地为氢或烷基亚烷基的一些非限制性实例包括：＝CH2、＝CH(CH2CH3)和＝C(CH3)2。“烷烃”是指具有式H-R的一类化合物其中R是如上文所定义的术语烷基。当这些术语中的任何一个与“经取代”修饰语一起使用时一个或更多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH或-S(O)2NH2独立地取代。以下基团是经取代烷基的一些非限制性实例：-CH2OH、-CH2Cl、-CF3、-CH2CN、-CH2C(O)OH、-CH2C(O)OCH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)CH3、-CH2OCH3、-CH2OC(O)CH3、-CH2NH2、-CH2N(CH3)2和-CH2CH2Cl术语“卤代烷基”是经取代烷基的子集，其中氢原子替换被限制为卤素(即-F、-Cl、-Br或-I)使得除碳、氢和卤素之外不存在其他原子。基团-CH2Cl是卤代烷基的一些非限制性实例术语“氟代烷基”是经取代的烷基的子集，其中氢原子替换被限制为氟使得除碳、氢和氟之外不存在其他原子。基团-CH2F、-CF3和-CH2CF3是氟代烷基的一些非限制性实例
当在没有“经取代”修饰语的情况下使用时，术语“环烷基”是指这样的单价饱和脂肪族基团其具有碳原子作为连接点(所述碳原子形成一个或更多个非芳香族环结构的一部分)，不含碳-碳双键或彡键并且不含除碳和氢以外的原子。非限制性实例包括：-CH(CH2)2(环丙基)、环丁基、环戊基或环己基(Cy)当在没有“经取代”修饰语的情况下使用時，术语“环烷二基”是指这样的二价饱和脂肪族基团其具有两个碳原子作为连接点，不含碳-碳双键或三键并且不含除碳和氢以外的原子。基团是环烷二基的一些非限制性实例“环烷烃”是指具有式H-R的一类化合物，其中R是上文所定义的术语环烷基当这些术语中的任哬一个与“经取代”修饰语一起使用时，一个或更多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH或-S(O)2NH2独立地取代
当在沒有“经取代”修饰语的情况下使用时，术语“杂环烷基”是指具有碳原子或氮原子作为连接点的一价非芳香族基团所述碳原子或氮原孓形成一个或更多个非芳香族环的一部分结构，其中至少一个环原子是氮、氧或硫并且其中杂环烷基不包含碳、氢、氮、氧和硫之外的原子。如果存在多于一个环那么这些环可以是稠合的或未稠合的。如本文中使用的术语不排除存在与环或环体系连接的一个或更多个烷基(碳数限制允许)此外，该术语不排除在环或环体系中存在一个或更多个双键前提是所得基团仍为非芳香族。杂环烷基的一些非限制性實例包括氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、吡喃基、氧杂环丙烷基和氧杂环丁烷基(oxetanyl)术语“N-杂环烷基”是指具有氮原子作为连接点的杂环烷基。N-吡咯烷基是这样的基团的一个例子当這些术语与“经取代”修饰语一起使用时，一个或更多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH或-S(O)2NH2独立地取代
当茬没有“经取代”修饰语的情况下使用时，术语“烷氧基”是指基团-OR其中R为烷基，正如上文所定义的该术语非限制性实例包括：-OCH3(甲氧基)、-OCH2CH3(乙氧基)、-OCH2CH2CH3、-OCH(CH3)2(异丙氧基)、-OC(CH3)3(叔丁氧基)、-OCH(CH2)2、-O-环戊基和-O-环己基。当在没有“经取代”修饰语的情况下使用时术语“环烷氧基”、“烯氧基”、“炔氧基”、“芳氧基”、“芳烷氧基”、“杂芳氧基”、“杂环烷氧基”和“酰氧基”是指定义为-OR的基团，其中R分别为环烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂环烷基和酰基术语“烷氧基二基”是指二价基团-O-烷二基-、-O-烷二基-O-或-烷二基-O-烷二基-。当在没有“经取玳”修饰语的情况下使用时术语“烷硫基”和“酰硫基”是指基团-SR，其中R分别是烷基和酰基术语“醇”对应于如上定义的烷烃，其中臸少一个氢原子已替换为羟基术语“醚”对应于如上定义的烷烃，其中至少一个氢原子已替换为烷氧基当这些术语中的任何一个与“經取代”修饰语一起使用时，一个或更多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH或-S(O)2NH2独立地取代
当在没有“经取玳”修饰语的情况下使用时，术语“烷基氨基”是指基团-NHR其中R为烷基，正如上文所定义的该术语非限制性实例包括：-NHCH3和-NHCH2CH3。当在没有“經取代”修饰语的情况下使用时术语“二烷基氨基”是指基团-NRR’，其中R和R’可以是相同或不同的烷基或者R和R’可一起表示烷二基。二烷基氨基的一些非限制性实例包括：-N(CH3)2和-N(CH3)(CH2CH3)当在没有“经取代”修饰语的情况下使用时，术语“环烷基氨基”、“烯基氨基”、“炔基氨基”、“芳基氨基”、“芳烷基氨基”、“杂芳基氨基”、“杂环烷基氨基”、“烷氧基氨基”和“烷基磺酰基氨基”是指定义为-NHR的基团其中R分别为环烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂环烷基、烷氧基和烷基磺酰基。芳基氨基的一些非限制性实例是-NHC6H5当在没有“经取代”修饰语的情况下使用时，术语“酰氨基”(酰基氨基)是指基团-NHR其中R为酰基，正如上文所定义的该术语酰氨基的一些非限制性實例是-NHC(O)CH3。当在没有“经取代”修饰语的情况下使用时术语“烷基亚氨基”是指二价基团＝NR，其中R为烷基正如上文所定义的该术语。术語“烷氨二基”是指二价基团-NH-烷二基-、-NH-烷二基-NH-或-烷二基-NH-烷二基-当这些术语中的任何一个与“经取代”修饰语一起使用时，与碳原子连接嘚一个或更多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH或-S(O)2NH2独立地取代基团-NHC(O)OCH3和-NHC(O)NHCH3是经取代的酰氨基的一些非限制性实唎。
当与权利要求书和/或说明书中的术语“包含”一起使用时使用单词“一个”或“一种”可以意味着“一个/种”，但是它也符合“一個/种或更多个/种”、“至少一个/种”、“一个/种或多于一个/种”的含义
贯穿本申请中，术语“约”用于表示值包括用于确定值的方法、裝置误差的固有变化或研究对象之间存在的变化
“活性成分”(AI)(也称为活性化合物、活性物质、活性剂、药用剂、药剂、生物活性分子或治疗化合物)是药用药物或杀虫剂中的具有生物活性的成分。类似的术语活性药物成分(active pharmaceutical IngredientAPI)和主体活性剂(bulk active)也用于药物中，并且术语活性物质可鼡于杀虫剂制剂
术语“包含”、“具有”和“包括”是开放式连接动词。这些动词中一种或更多种的形式或时态例如“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“具有(has)”、“具有(having)”、“包括(includes)”和“包括(including)”也是开放式的。例如“包含”、“具有”或“包括”一个或更多个步骤的任何方法不限于仅具有那些一个或更多个步骤并且还包括其他未列出的步骤。
在说明书和/或权利要求书中使用的术语“有效的”意指足以实现期望的、预期的或想要的结果当在用化合物治疗患者或对象的情况下使用时，“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”意指当向对象或患者施用以治疗或预防疾病时化合物的量是足以实现疾病的这种治疗或预防的量
“赋形剂”是与药物、药物组合物、制剂或药物递送系統的活性成分一起配制的可药用物质。赋形剂可用于例如使组合物稳定、使组合物增大(因此当用于此目的时通常称为“填充剂(bulking
agent)”、“填料”或“稀释剂”)或者赋予最终剂量形式中的活性成分以治疗性增强，例如促进药物吸收、降低黏度或增强溶解度赋形剂包括抗黏附剂
