细胞库 / 细胞培养
ELISA 试剂盒
书籍 / 软件
实验室仪器 / 设备
原辅料包材
抗体保存指南
抗体保存指南
来源：互联网
点击次数：6822
保存温度和条件 对于我们的很多抗体而言，分装成小等份并冻存于 -20℃
或 -80℃ 是最佳保存条件。分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于 4℃ 。 在收到抗体时，在 10,000 × g 下离心 20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液，并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10 ul；等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。 在大多数情况下，收到抗体时在 4℃下保存一至两周，然后再冷冻进行长期保存是可接受的，但也许腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而应该尽快冻存。同样，遵照数据表上的建议是重要的。 免责条款和其它特别条件： 酶偶联抗体不应冻存，而应保存于 4℃. 冻融不仅影响抗体结合能力，还会降低酶活性。 无论偶联至荧光染料、酶还是生物素，偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹。暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响，在实验的所有阶段都应避光。 IgG3 同型抗体具有解冻时形成聚集物的独特趋势，应始终保存于 4℃。 用叠氮化钠防止污染 为了防止微生物污染，可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02% (w/v). 的终浓度。很多 Abcam 抗体已经包含这种防腐剂抗体已经包含这种防腐剂，所用浓度范围为 0.02 至 0.05%。这会标示在数据表上标题为“保存缓冲液”的栏目。 不使用叠氮化钠的情形： 如果用抗体染色或处理活细胞，或如果用抗体进行体内研究，一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性：它阻断细胞色素电子传递系统。 叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联，应在偶联进行前除去。偶联后，抗体可保存于叠氮化钠中，除此以外，0.01% 硫汞撒（硫柳汞）不含伯胺，也是可接受的替代物。 叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液中除去。IgG 的分子量为 150,000 道尔顿（IgM 为约 600,000）；叠氮化钠的分子量为 65 道尔顿。截留分子量为 14,000 道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化物向外扩散。在保持于 4℃ 的磁性搅拌器上的烧杯中，每毫升抗体使用至少一升冷 PBS 并搅拌透析装置 6 小时。更换 PBS 两次，每次更换搅拌至少 6 小时。如有可能，所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。 冷冻/融化损伤 重复冷冻/融化循环可使抗体变性，导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。 保存于 -20℃ 对于大多数抗体是适当的；保存于 -80℃无明显优势。冰箱不能为无霜型。 这些冷冻和融化之间的循环（以减少结霜）恰恰是应该避免的。出于相同原因，抗体试剂瓶应置于具有最小温度波动的冰箱区域，例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。 有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到 50% 的终浓度以防止冷冻/融化损伤；甘油可将凝固点降低至低于 -20℃。虽然这对于很多抗体是可接受的，但是只有一小部分我们提供的抗体测试了在该保存条件下的稳定性，并且我们的保证仅适用于按数据表上推荐的方式保存的抗体。不建议将包含甘油的溶液保存于 -80℃，因为该温度低于甘油的凝固点。请注意甘油可被细菌污染。如果加入甘油或任何冷冻保护剂，则应当小心操作，以得到无菌制备物。 应 避免抗体在稀释至工作浓度后在 4℃ 下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解，理想的浓度为1mg/ml 或更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如 BSA 作为稳定剂的理论基础。加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。对于打算进行偶联的抗体而言，由于稳定蛋白质会与抗体竞争，降低了偶联的效率，所以不应加入稳定蛋白质。 详情请点击： 下载附件：
相关实验方法
本网站所有注明“来源：丁香园”的文字、图片和音视频资料，版权均属于丁香园所有，非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明“来源：丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系，我们将立即进行删除处理。
难度系数：
共467人点评打分
难度系数：
共195人点评打分
难度系数：
共159人点评打分
难度系数：
共154人点评打分
难度系数：
共135人点评打分
丁香通采购热线：400-
Copyright (C)
DXY All Rights Reserved.抗体在哪些情况下不能使用叠氮化钠
----------发布人----------
上海恒远ELISA试剂盒总代理
为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% （w/v））。Abcam的很多抗体已经含有了0.02％-0.05%的叠氮化钠，在说明书的&Storage buffer&中有标明的。这是一种常见的保存抗体的办法，但是有的抗体却不适合这类保存方法，那么不能抗体在哪些情况下不能使用叠氮化钠呢，小李在这里为您做一个总结，供大家参考！在下述情况中不能使用叠氮化钠：&如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究：叠氮化钠在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的cytochrome electron traort system.&要偶联带有氨基基团的抗体：叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01％。对于需要偶联的抗体，thimerosal （merthiolate）可以替代叠氮化钠作为保护剂！注：叠氮化钠的去除方式：可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！IgG的分子量是150kDa （IgM 是~ 600kDa）; 叠氮化钠的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除上海恒远生物专业提供&单抗，多抗& 为您提供专业的周到的售前售中售后服务。品库存多，当天订购，当天发货，指定专业快递江浙鲁皖隔天就到，质量可靠，如无效，免费退换货。&
仪表知识库
仪表站，帮你做关注今日：13 | 主题：220072
微信扫一扫
【求助】抗体稀释液该怎么配
页码直达：
这个帖子发布于6年零301天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我买了三塔公司的抗体。说明书上写的是 Each vial contains 200 μg IgG in 1.0 ml of PBS with & 0.1% sodium azideand 0.1% gelatin。那我稀释抗体的时候是直接用PBS？还是PBS中需加 & 0.1% 的sodium azideand 0.1% gelatin？
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
whlx828 编辑于
whlx828 我买了三塔公司的抗体。说明书上写的是 Each vial contains 200 μg IgG in 1.0 ml of PBS with & 0.1% sodium azideand 0.1% gelatin。那我稀释抗体的时候是直接用PBS？还是PBS中需加 & 0.1% 的sodium azideand 0.1% gelatin？这里只是说所提供的抗体含有PBS和微量的叠氮化钠，一般稀释抗体直接用PBS稀释就可以了。如果还不放心，可以咨询一下公司的技术支持。还不放心就直接买专用的抗体稀释液，含有叠氮化钠、BSA稳定剂等组分，对抗体的回收利用较好。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
biolinkphilic 编辑于
biolinkphilic 这里只是说所提供的抗体含有PBS和微量的叠氮化钠，一般稀释抗体直接用PBS稀释就可以了。如果还不放心，可以咨询一下公司的技术支持。还不放心就直接买专用的抗体稀释液，含有叠氮化钠、BSA稳定剂等组分，对抗体的回收利用较好。恩 好的 谢谢啦
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
最好加一点蛋白在里面，如BSA，serum等 1%即可。防腐剂也可加
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园24小时热门版块排行榜&&&&
(小有名气)
在线: 58.8小时
虫号: 960687
注册: 专业: 质谱分析
求助如何去除抗体中的叠氮化钠已有2人参与
如题，要用抗体与伯胺基团反应，故必须除去叠氮化钠，请教如何除去。
& 猜你喜欢
已经有0人回复
已经有4人回复
已经有85人回复
已经有1人回复
已经有1人回复
已经有1人回复
已经有0人回复
已经有0人回复
已经有1人回复
已经有0人回复
已经有0人回复
& 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
已经有9人回复
已经有23人回复
已经有73人回复
(小有名气)
在线: 32.1小时
虫号: 1775187
注册: 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ 夏天转个弯(likedong1021代发): 金币+3, 感谢回帖交流！
直接买没有叠氮化钠的抗体
(正式写手)
在线: 381.8小时
虫号: 818114
注册: 专业: 细胞生物学研究中的新方法
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ 感谢参与，应助指数 +1夏天转个弯(likedong1021代发): 金币+4, 感谢回帖交流！
超滤.................
小木虫,学术科研互动社区,为中国学术科研免费提供动力
违规贴举报删除请发送邮件至：
广告投放与宣传请联系 李想 QQ：
QQ：&&邮箱：
Copyright &
MuChong.com, All Rights Reserved. 小木虫 版权所有手机采购 移动办公
全部商品分类
抗体的选择和保存指南(抗体,叠氮化钠,反复冻融,二抗,稳定性)
　　当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。抗体种类繁多，品牌众 多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。　　一、怎样选择适合你实验需要的抗体　　1. 一抗选择要点　　（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。　　（2）确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS。一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型，如果抗体说明 书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证，请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的 抗体。　　（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验，请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。　　（4）样本蛋白的结构性质。了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。　　（5）单多克隆抗体的选择。市面上的抗体还是以多克隆抗体为主，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。　　2. 二抗选择要点　　（1）种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。　　（2）标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应，而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。　　二、抗体的稳定性　　1. 抗体的稳定性是自然界长期进化的结果。抗体是免疫系统(immune system)中最重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果。在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。　　2. 抗体分子的高Tm值。在室温下，甚至短时间温度达到50-60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持应有的活性。　　3. 抗体的纯度。采用先进的抗体纯化技术，确保抗体产品的高纯度，保障其抗体产品的稳定性。　　4. 抗体的浓度。高浓度的抗体产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体稳定性更好，抗体产品中93%的浓度大于0.5mg/ml。　　三、怎样确定抗体购买渠道和品牌　　国外著名抗体品牌的质量一般没问题，但价格较贵，而且很多抗体品牌本身不生产抗体，所以能找到OEM抗体生产商生产的原装进口抗体，如美国的ProSci 公司，大部分常用抗体都可以在ProSci网站上查找到，同样一支抗体能少花费1000元，对于一个普通实验室来说，那将节约非常多的科研经费，而且 ProSci会提供信号通路(Signaling Pathway)的小包装抗体作为一个试剂盒，这样极大方便了用户，特别是经费不是很充足的用户。随着网络技术的越来越普及，我们自己就可以通 过国内外的相关网站来检索，国外最大的生物试剂查询网站：biocompare，国内最大的生物试剂查询网站：生物秀，来查找我们所需要的产品资料。　　四、怎样保存已获得的抗体　　抗体无论是保存还是运输都应尽可能地避免反复冻融，收到抗体后请根据实验的需要，对抗体进行分装，避免同一管抗体反复冻融（反复冻融会导致抗体空间结构变 性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力）。抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果，如果抗体保存得当，抗体活性大部分都可以维持数年。 请谨记，无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确处理和保存抗体。　　1. 收到抗体后，请务必在4℃，12000rpm，离心3分钟，（无论是液体还是冻干粉状态），再打开管盖进行分装和保存（如果抗体体积小于50ul，请延长 离心时间至5分钟，以保证全部抗体均离心下来）。抗体一般使用特制的储存管，只有在12000rpm离心3分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下 来（即使是在10000rpm离心也会离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象）。　　2. 对于ProSci大部分抗体，比较合适的保存方式是，分装后保存在-20℃或者-80℃。　　（1）对绝大多数抗体来说，保存在-20℃就完全足够了，没有任何证据显示保存在-80℃会更好。　　（2）分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。　　（3）分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。　　（4）复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来。　　（5）抗体工作液应该当天配制当天用完，4℃保存尽量不要超过1天。　　（6）绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中，将抗体保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。　　3. 大部分抗体收到后4℃短暂保存1~2周对抗体活性没有影响。　　4. 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1~2周的时间，所以是在低温4℃的条件下来完成的。　　4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻，这就多了一次冻融的过程），所以运输过程中绝对避免干冰运输。　　关于叠氮化钠（sodium azide）的使用：　　为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)）。ProSci的绝大部分抗体已经含有了0.02％-0.05%的叠氮化钠，在说明书的储存缓冲液中有标明。　　注：叠氮化钠的去除方式　　可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除，IgG的分子量是150kDa（IgM约600kDa）；叠氮化钠的分子量只有65Da，使用截留分子量为14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。
免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。