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自噬标志蛋白LC3和Beclin1的检测
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各位老师，我刚开始接触WB，想检测自噬标志蛋白LC3和Beclin1抗体的表达，大家有知道哪家的LC3好用？有人说武汉三鹰？CST?sigma?我第一次买，不太懂？有知道的老师可以给我建议一下吗？或者给我说下货号（我害怕买错）。拜托，谢谢。
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我是勤劳小蜜蜂 各位老师，我刚开始接触WB，想检测自噬标志蛋白LC3和Beclin1抗体的表达，大家有知道哪家的LC3好用？有人说武汉三鹰？CST?sigma?我第一次买，不太懂？有知道的老师可以给我建议一下吗？或者给我说下货号（我害怕买错）。拜托，谢谢。一般用Abcam, CST, Millipore的比较多，Sigma的贵呀。
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燕子-李三 一般用Abcam, CST, Millipore的比较多，Sigma的贵呀。谢谢回复，我最后买了CST的小包装。节日快乐
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我是勤劳小蜜蜂 谢谢回复，我最后买了CST的小包装。节日快乐不客气，节日快乐！
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关于丁香园关注今日：4 | 主题：407812
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【求助】自噬LC3的western，请各位大侠帮忙分析一下
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这个帖子发布于6年零344天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
做了几次LC3的western，抗体是sigma的，但是一直跑出一条带，在16kD附近，很疑惑，这条是16还是18呢，另外，做胶的考染，在16附近显示有两条带。请各位高手不吝赐教！（图片因处理效果不太好，中间的条带是16kD）请各位分析一下原因，如何解决？
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你用的L7543那个抗体吗，一般没有处理的细胞以1型LC3为主，在17kd附件；2型的LC3在15kd。你可以用Bafilomycin A1（20nM，4h） 处理细胞做为阳性对照，这种情况下2型的LC3会明显增加。
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gre007 你用的L7543那个抗体吗，一般没有处理的细胞以1型LC3为主，在17kd附件；2型的LC3在15kd。你可以用Bafilomycin A1（20nM，4h） 处理细胞做为阳性对照，这种情况下2型的LC3会明显增加。非常感谢您的回复，您说的这个以前还真没注意到过，以后留意一下。我的抗体就是了7543，不过 ，我的这个是组织的，做了个模型，这种情况下应该再怎么处理呢？另外，LC3不是有A B C 三型吗，您所说的是ＬＣ３Ｂ的1,2型吧？
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niaoer 非常感谢您的回复，您说的这个以前还真没注意到过，以后留意一下。我的抗体就是了7543，不过 ，我的这个是组织的，做了个模型，这种情况下应该再怎么处理呢？另外，LC3不是有A B C 三型吗，您所说的是ＬＣ３Ｂ的1,2型吧？是的，这个抗体只能识别LC3B，那你可以用相应的细胞系处理做为阳性对照，这个只是用来确定你的样品的压出的条带的大小。
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关于丁香园自噬相关蛋白LC3是什么_百度知道
自噬相关蛋白LC3是什么
LC3I和LC3II有何区别
我有更好的答案
LC3合成之后是前提LC3
pro-LC3；然后立刻C末端被ATG4水解切割掉一段多肽，暴露甘氨酸，这个是LC3-I，胞浆分布。自噬过程中，LC3-I在ATG7和ATG12-ATG5-ATG16L作用下（和泛素修饰过程很像），与磷脂酰乙醇胺共价结合，这个才是LC3-II，结合在自噬体膜上。LC-II由于磷脂酰乙醇胺的修饰，导致电荷的变化，使得迁移率更快，所以SDS-PAGE中显得分子量比LC3-I小。
采纳率：22%
来自团队：
LC3是自噬标志物，自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低
非常感谢你的回答，如果有关于这方面的文献，可否给我一份。谢谢！
把邮箱给我吧
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&&&不同转膜时间对免疫印迹法检测自噬蛋白LC3的影响
不同转膜时间对免疫印迹法检测自噬蛋白LC3的影响
目的:观察不同转膜时间对免疫印迹法检测自噬蛋白LC3条带的影响.方法:利用他莫昔芬诱导人乳腺癌MCF7细胞自噬,高内涵成像系统观察LC3表达.提取总蛋白,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳,0.22μm孔径PVDF膜,72伏分别电转15、30、45、60、75、90分钟,封闭,漂洗后加LC3一抗、二抗孵育.结果:LC3条带在30、45、60分钟时逐渐加深;75、90分钟时条带逐渐减弱,45分钟时LC3BⅠ及Ⅱ条带更为明显.结论:LC3Ⅰ、Ⅱ转膜时间最短可为15分钟,最佳显示时间为45分钟.
摘要： 目的:观察不同转膜时间对免疫印迹法检测自噬蛋白LC3条带的影响.方法:利用他莫昔芬诱导人乳腺癌MCF7细胞自噬,高内涵成像系统观察LC3表达.提取总蛋白,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳,0.22μm孔径PVDF膜,72伏分别电转15、30、45、60、75、90分钟,封闭,漂洗后加LC3一抗、二抗孵育.结果:LC3条带在30、45、60分钟时逐渐加深;75、90分钟...&&
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快速查看收藏过的文献关于自噬和LC3 - 实验交流 - 生物秀
标题: 关于自噬和LC3
摘要: [关于自噬和LC3] 想向高手求教两个问题：第一：关于WB检测LC3，我想同时检测LC3-Ι和LC3-ΙΙ 我查了有生产这个抗体的公司有Abgent 、ABR-Affinity ***s、AnaSpec 、MBL International 、Novus Biologicals 。不知道在抗体选择方面哪个公司的抗体做这个指标是最好最经典？？第二：我做的是一种上皮细胞，WB检测LC3时，提取的是总蛋白吧？是不是就是用裂解 关键词:[自噬 抗体 总蛋白 上皮细胞 裂解液 膜蛋白 上清液]……
想向高手求教两个问题：第一：关于WB检测LC3，我想同时检测LC3-Ι和LC3-ΙΙ.我查了有生产这个抗体的公司有Abgent 、ABR-Affinity ***s、AnaSpec 、MBL International 、Novus Biologicals 。不知道在抗体选择方面哪个公司的抗体做这个指标是最好最经典？？第二：我做的是一种上皮细胞，WB检测LC3时，提取的是总蛋白吧？是不是就是用裂解液裂解细胞，超声破碎离心后提取上清液？？我看有篇文献是这样提取蛋白的[Cells were lysedonice for 30minin 40mMBis-Tris propane buffer(pH7.7),150mMNaCl,10%glycerol,1%TritonX-100,andproteaseinhibitors.Fractionation of cellular proteins into cytosolic soluble andmembrane particulate fractions was performed as follows.Cellswere homogenized with a sonicator,and lysates were ultracentrifugedfor 30min at 100,000
g at 4 °C.The supernatant was removed(soluble fraction),and the remaining pellet was subjected to a secondround of sonication and ultracentrifugation as above.The final pelletwas resuspended in phosphate-buffered saline(particulatefraction).]他好像把胞浆蛋白和膜蛋白分别提取了。有没有高手可以指导下检测LC3时蛋白的具体提取过程。
我也想知道，我做肿瘤细胞做的，用的Abgent的抗体，杂带很多且很清楚，LC3的目的条带一直都很淡，详情各位高手指点一下
我选的也是Abgent的抗体，15%分离胶感觉效价很低，目标条带也一直不是很清楚。
我也做自噬，感觉很迷茫，现在也为选择抗体而苦恼，有哪位大侠能指导一下western检测LC3的具体操作吗？
我用的是NOVUS的，1：800稀释，还不错呀
CST的抗体我在做结果还行用15%分离胶可以做
推荐SIGAM的L00使用，可以反复用N次！
谢谢。我买了CST和SIGMA的抗体，感觉还不错。
SIGAM的L7543很好用，15%条带很漂亮
推荐SIGAM的L00使用，可以反复用N次！谢谢参考！！
cst 12%分离胶，上下两条带都非常清晰。
我这也是啊 ，主要是LC3-II型出来了，不过可以说明问题就行
请问各位高手，我想做肝脏的自噬，同时用人的肝细胞和大鼠的肝脏组织，想订抗体，可是不太懂LC3A、LC3B、LC3C的区别，哪位高手可以指点下子，小妹在此先谢过
cst 12%分离胶，上下两条带都非常清晰。我也用CST的，请问你的电泳和电转条件是？？
我也用CST的，请问你的电泳和电转条件是？？您好，请问您的CST抗体出结果了吗？方便告诉产品号吗？谢谢
您好，请问您的CST抗体出结果了吗？方便告诉产品号吗？谢谢我买的是自噬的试剂盒
cst 12%分离胶，上下两条带都非常清晰。想请问一下上样量，转膜时间，电流等
我们实验室一直用Abcam的抗体，后来用过Sigma的抗体，经证明这两个公司的抗体效果不错。我们提取的是总蛋白，至于上样量，一般上20 ug就足够了。上太多不见得好。
cst 12%分离胶，上下两条带都非常清晰。想请问一下是怎么提取蛋白的 ，我也在这个抗体确只有一个条带
我也想知道LC3A,B,C的区别，不知道买哪个，我做的是心肌，求各位大神指点迷津。。
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