2%盐水可以消毒吗消毒是不是太高了

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有污染的擦伤伤口应该()。A:用2%碘酒和75%酒精在伤口周围消毒B:用生理盐水清除伤口异物C:外敷
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有污染的擦伤伤口应该()。A:用2%碘酒和75%酒精在伤口周围消毒B:用生理盐水清除伤口异物C:外敷生理盐水,再用绷带包扎D:以上都是
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1伤后功能锻炼的目的是()。A:保持原有状态B:促进愈合C:防止停训引起的各种疾病D:以上都是2局部发生急性软组织损伤后,一般在()可以开始活动。A:进行冷敷包扎后B:出血停止后C:肿胀消退后D:疼痛消失后3局部挫伤早期的处理措施应是()。A:冷敷、加压包扎、制动B:冷敷、按摩、加压包扎C:热敷、敷药、包扎D:加压包扎、理疗4()不是真死的征象之一。A:呼吸心跳停止B:对光反射消失C:单侧瞳孔散大D:角膜反射消失
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31.氢饱和生理盐水对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
来源:互联网
贡献&责任编辑:李志 &
氢饱和生理盐水对大鼠心肌缺血再灌注 损伤的保护作用何雁飞赵嘉华孙强【}商要】 H的研究氢饱和生理盐水(氧水)对sD大鼠心肌缺m再灌注损伤的保护作用.方法 健康成年雄性sD大鼠36只.按数字表法随机分为假手术组、手术对照组(对照组)、氢水治疗组(氢水 组),每组12只。似手术组只开胸,不做缺血再灌注处理;对照绢和氧水组在冠状动脉左前降支阻断血 流30min后行冉灌注24h,造成心肌缺血冉灌注损伤,氢水组冉灌注5min前以5ml/kg腹腔注射氧水。 对照组和氧水组再灌注24h后榆测左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左心室内压最大上 升和下降速率[±(dP/dt)max]等心功能指标;/}1氯化t苯基17lj氯唑(TTC)染色观察心肌梗死面积,HE 染色观察心肌损伤程度.并检测血浆和心肌中丙二醛(MDA)的表达以观察心肌氧化损伤程度,用 TUNEL法检测心肌缺血区(area at risk.AAR)心肌细胞凋产,分光光度法检测心肌凋广酶easpase?3的表 达,免疫组化检测心肌8-羟培鸟嘌呤(8-OHdG)的表达。假手术组在同时间点崩相同方法观察或检测上 述指标。结果 与财照组相比,氢水组心肌缺血{l}灌注损伤湿著减轻,心肌组织病理性损伤减轻,脂质 和DNA过氧化损伤指标明娃减低.心功能硅若改善.心肌细胞凋f减轻,casp∞e-3表达降低(氢水组 0.278:tO.092,对照组0.507±0.072),心肌梗死面积显著减少。结论氢水nJ以有效减少心肌缺血再 灌注损伤。【关键词】 缺血再灌注;心肌梗死; 氢饱和生理盐水; 血流动力学; 丙二醛;心肌细胞; 过氧化损伤ctive effect of hydrogen-s缸urated saline蛳the injury induced b,reperfusion following cardiovascular ischemia in rats HE Yah舌f,ZHAO Jia-hua。SUN Q如,罾 Medical Center ofNo.91181 Unit,Dalian 116021,Chinasponding author:SUN Qiang,E-mail:@钾.corn【Abstr盹t】Objective To investigate the protective effect of hydrogen?saturated saline on the injury induced by reperfusion following cardiac ischemia in Sprague?Dawley rats.Methods Thirty―six male SD rata were randomly divided into the sham surgery group,the control group and hydrogen?saturated saline treatment group.eaeh consisting of 12animals.The animals in Ihe sham surgery group received thoracic surgery,hut did not have repeffusion.Following 30?minute occlusion of blood flow in the left anterior descending(LAD) coronary artery,24一hour reperfusion ws.s performed in Ihe animals of the control group and hydrogen―saturated saline group,inducing repeffusion injury following cardiac ischemia.The hydrogen group received ahdominal injection of hydrogen?saturated saline at a dosage of 5ml/kg,5minutes before reperfusion.Cardiac functions. such∞left ventrieular systolic pressure(LVSP).1eft ventdeular diastolic pressure(LVDP),maximalincreasing and decreasing rates of left intraventricular pressures[±(dP/dt)max]were monitored in the animals of Ihe control group and the hydrogen saline group.24h after reperfusion.The size of cardiac infarctwas assessed with triphenyhetrazolium chloride(下rc)staining.Morpk,kgi(tal injury was mP矗sure(1with Hematoxylin and Eosin(HE)staining.The expressions of makmdiahlehyde(MDA)in the plasma and myocsrdium were measured to see the oxidalive slress of myocardium.Alxllltusis of cardiac cells in the affe(?tedDOI:10.3760/I?mmj.;^m I009-.015作舞肇待:116021辽’r省夫连,解放军91181豁队医务中心通f^作卉:孙强.电F佾箱@qq.eom?183? .论著..184?areawas measured“th TUNEL.The expression of caspase一3was monitored with the spectropholometfic method。and the expression of 8-hydmxy―desoxyguanosine(8-OHdG)in the affected area was measured with inmmnohistology.For the mdmMs in the sham surgery group,above indices weie assessL耐or monitored at thesalne
timepointsand,sith the same methods.Results When compared with the control group.followingchanges could be noticed:reperfosion injury for the animMs of the hydrogen saline group improved considerably,pathological lesion in the affected cardiac tissue lessened,indices of lipid andDNA oxidation decreased significantly,cardiac function improved considerably。apoptosis of cardiac muscular cells decreased, the expression of easpase-3w.as reduced and the size of cardiac infarction decreased siguificantly.Conclusions Hydrogen--saturated saline could effectively alleviate reperfusion injury followingcardiac ischemia.【Key words】 Reperf CHydrogen― H C Oxidative danmge目前,血管再通、恢复血流是临床上治疗急性心 肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)最有效和 普遍的手段…。尽管恢复血流非常关键,但是血流 再通可以激发活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的产生,ROS的产生不可避免会驱动细胞坏死 和凋亡相关信号通路的开放,从而导致细胞毒作用, 产生致命性的再灌注损伤。AMI后50%以上的最 终梗死面积归冈于再灌注损伤,因此减少再灌注损 伤是保护心肌的一个重点。已有研究证实。2J,可以通过抑制线粒体呼吸链 酶复合体(mitochondrial respiratory complex I and Ⅲ)来预防ROS的产生并增加细胞活力。然而,目 前没有公认有效的方法可通过减少自由基来减轻再 灌注引起的氧化损伤【3J。最近的研究表明,氢气可 以作为一种新型的抗氧化剂来保护局部腑缺血再灌 注损伤。也有研究表明【4J,氢气可以有效抑制小 肠、肝脏、心脏缺血再灌注引起的氧化应激损伤。本 研究在大鼠缺血冉灌注5rain前腹腔注射饱和氧生 理盐水(氢水),观察氧水对于心肌缺血冉灌注损伤 的保护作J}}j。并通过观察心脏『IIL流动力学指标,评估 心肌梗死面积、氧化应激水平等,对氢水保护作用的 机制进行初步探讨。材料与方法1.实验动物分组及处理:健康成年雄性SD大 鼠36只,按数字表法随机分为假手术组、手术对照 组(对照组)、氢水治疗组(氧水组),每组12只。假 手术组只开胸,不做缺m冉灌注处理;对照组和氢水 组在冠状动咏左前降支阻断血流30min后行再灌 注24h。造成心肌缺血再灌注损伤模型,氢水组再灌 注5rain前以5ml/kg腹腔注射氢水。AMI建立方 法见文献[5】。2.氢水的制备:在0.4MPa压力下将氢气在生 理盐水巾溶解6h,经气相色谱检测氢气浓度约为 0.77mmol/L,接近饱和浓度(0.88mmol/L)的氢水 装入铝袋中常压下4。c保存备用(不留死腔)。用y 射线消毒灭菌。3.样本的制备:(1)血浆样本。缺血再灌注24h 后,从右心室采集全血5ml,肝素抗凝,4℃1000g 离心10min,分离血浆,取上清,一20℃保存,朋于 检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。(2)心 肌样本。缺血再灌注24h后处死大鼠,取心脏置于 10%甲醛中同定,石蜡包埋,切片,HE染色,用倒置 显微镜观察其病理改变。免疫组织化学方法染色后 行8一羟基鸟嘌呤(8-OHdG)检测。另取心肌缺血区组 织,制成10%生理盐水匀浆,4℃下3000r/min离心 10min,取上清液,用于检测MDA含量和caspase-3表达水平。4.指标检测:(1)心功能参数。对照组和氧水 组冉灌注24h后,行左心室插管,由powedab生物 信号采集系统获取左心室收缩压(LVSP)、左心室舒 张压(LVDP)、左心室内压最大上升和下降速率 [±(dWdt)max]等心功能指标。(2)心肌梗死面 积。对照组和氧水组缺阻再灌注24h后,麻醉大 鼠,左心室心尖部注射2%伊文思蓝l ml,未染成蓝 色部分即为心肌缺血区(area at risk,AAR)区域。 处死大鼠,将左心事横切成2mm厚的肌片,置人 I%氯化三苯基四氮唑(m)溶液中。放人37℃恒 温箱中15min,缺Jf『L组织染成红色,心肌梗死面积为 梗死区域(白色)占AAR的百分比(红色+白色)。 (3)心肌原位细胞凋亡检测(TUNEL)。取对照组和 氢水组心肌组织切片,行心肌原位细胞凋亡检测 (TUNEL),染色遵循试剂盒说明操作。结果判定:光学显微镜下细胞核呈棕褐色为TUNEL阳性染色细胞。凋亡指数(apoptotie index,AI):(凋亡细胞 数/总细胞数)×100%。(4)心肌损伤程度。对照 组和氢水组心肌组织HE染色,光镜下观察心肌病 理损伤程度;按试剂盒(碧云天生物技术研究所)说 明书检测血浆和心肌中MDA含量.用TUNEL法检 测心肌缺血区心肌细胞凋亡,分光光度法检测心肌 凋亡酶caspase-3表达,免疫组织化学染色检测心肌 8-OHdG表达,以观察心肌氧化损伤程度。假手术 组在同时间点用相同方法观察或检测上述指标。 5.统计学处理:数据以均数±标准差(i±s)表 示,用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理,用单因 素方差分析评价组间差异,两两比较采用Student. Newman-Keuls检验。P<O.05为差异有统计学意义。结 果1.血流动力学检测结果:对照组LVDP高于假 手术组和氢水组(P<0.05),假手术组和氢水组比 较无统计学差异。对照组和氢水组LVSP均低于假 手术组(P<0.05),氢水组高于对照组(P<0.05)。 对照组和氢水组±(dP/dt)max均低于假手术组 (P<0.05)。氢水组高于对照组(P<0.05)。见 表1。裹1各组大鼠左室心功能检测结果(各组n=12,i±5)洼:LVDP为左心室舒张压,LVSP为左心室收缩压,+(dP/dt) max为左心室内压最大上升速度,一(dP/dt)max为左心室内压最大 下降速度。与假手术组比较‘.P<0.05;与对照组比较5P<0.05 2.心肌梗死面积:假手术组一t5肌梗死面积为0, 对照组为(32.11±4.40)%,氢水组为(8.97±3.49)%。氢水组比对照组明显减少,差异有统计学 意义(P<O.05);氢水组比假手术组心肌梗死面积 增加,但差异无统计学意义。3.MDA含量和easpase?3表达水平:对照组和 氢水组血浆和心肌中MDA含量较假手术组显著升 高(P<O.05),氢水组血浆和心肌中MDA含量显著 低于对照组(P<0.05)。对照组和氢水组心肌缺血 区cmpase-3表达较假手术组显著升高(P<0.05), 氢水组较对照明显降低(P<0.05)。见表2。表2各组MDA含量和caspase-3表达测定结果(各组n=12,i±s)注:MDA为丙二醛。与假手术组比较‘P<0.05;与对照组比较 bp<0.054.心肌病理结果:HE染色后,光镜下可见对照 组和氢水组均有心肌中性粒细胞渗入、坏死、出血。 但是氢水组心肌中性粒细胞渗入、坏死、出血和间隙 细胞较对照组明显减少。见图l。注:A为假手术组,B为对照组.C为氢水组田l各组大鼠心肌病理图(免疫组织化学染色×400)5.心肌细胞原位凋亡检测结果:免疫组织化学 染色后,对照组和氢水组心肌缺血区均出现大量 TUNEL阳性细胞(图2)。检测结果表明,氢水组 TUNEL阳性细胞率为(15.2-l-1.3)%,对照组为 (24.3±1.5)%,氢水组较对照组明显减少(P< 0.05)。飘l 蕊囊l 注:A为假手术组.B为对照组,c为氢水组圈2各组大鼠心肌TUNEL染色结果(x400)6.心肌8-OHdG检测结果:对照组和氢水组心 肌缺血区均出现大量的8-OHdG阳性细胞,见图3。 检测结果表明.氢水组8-OHdG阳性细胞数占 (49.7±7.3)%,对照组占(98.8±12.6)%,氢水 组较对照组明显减少(P<0.05)。?186?黧黯黧本研究证实氢水可以有效减轻大鼠缺血再灌注 损伤,此种心肌保护作用可能与之前报道的大脑损 伤模型中分子氢选择性清除活性氧(ROS)有关旧1。 ROS是再灌注后已缺血区心肌产生的,ROS的产生 是一种致死性的再灌注损伤。活性氧02’和H:0:可以被机体的抗氧化系统清除,而目前没有酶可以 有效清除毒性作用更强的?OH和ON00’。氢气被 证明可以去除以上2种毒性ROS【6】。氢气分子是 电中性的。且分子量比氧气分子小,易于穿透细胞膜 进入细胞核和细胞器如细胞核及线粒体中,而线粒 体是产生ROS的主要部位¨J。本研究发现,氢水可有效改善大鼠缺血再灌注 损伤后引起的心功能下降,同时可减少心肌梗死面 积,降低血清和心肌中MDA的浓度,减轻心肌缺血 区细胞凋亡和DNA氧化应激损伤。组织学分析提 示。氢水组心肌缺血区域出血、坏死、白细胞渗入明 显减轻。G可作为评价体内细胞氧化损伤的高灵 敏性生物标记物哺]。本研究表明,氢水组心肌缺血 区域8-OHdG阳性细胞数相比对照组明显减少,说 明氢水可以减少再灌注损伤引起的DNA脂质过氧 化损伤。笔者推测,再灌注发生即刻,氢气减少了 ROS的产生。稳定了线粒体膜电位,维持了ATP合 成,避免了DNA损伤。降低了脂质过氧化。从而保护 了心肌。发挥保护作用的最根本机制可能是抑制了 线粒体通透性转换孔的开放n1。有报道称,大量心 肌细胞坏死可以导致心肌缺血和再灌注后心脏结构 的破坏,减轻心肌细胞凋亡可以减少再灌注以后心 肌梗死面积的扩大¨…。本研究发现,氢水治疗可以 抑制下游凋亡酶easpase-3的激活,并减少心肌细胞 凋亡。提示再灌注5rain前腹腔注射氢水可以有效
减少再灌注损伤。本实验室的前期研究证实,氢水对低氧一缺血大 鼠模型有神经保护作用【llJ。本研究采用再灌注 5min前腹腔注射氢水的方法,与氢气吸入有类似的 效果¨“,且具有以下优势:首先,氢气是易燃易爆气 体,空气中氢气浓度超过4.6%就容易发生爆炸,吸 入2%氢气,溶解在血液中最高只能提高2%的分压 水平,而腹腔注射氢水只需吸入氢气1/50的量;此 外,腹腔注射氢水可以实现浓度和剂量的精确控制。 综上所述,氢水具有生产简单、易于使用、安全 经济的特点,腹腔注射氢水可以有效减轻大鼠心肌 缺血再灌注损伤,因此有可能成为未来患者心肌保 护的新方法。参考文献[1]Ugalde H。Ugalde D.Munoz M.Angioplasty compared to thmmbolysis∞the initim repeffusion therapy in acute myocardial infarction.RevMed Chil,):.rwell LS.Nadtochiy SM,Tompkian AJ.et a1.Direct evidence for S-nitroⅫion of mhechondrial complex I.Biochem J,(Pt 3):627-634.[3]Permlli MG.Pagliam P.Penna C.foehemia/reperfusion jnjury and cardioprotective mechanmms:Role 0f mitoeboodria and reactive oxygen species.W砌d J Cardiol。):186―200. [4]Ohta S.Recent progress toward hydrogen medicine:potential of molecular hydrogen forpreventiveand thempoudc印pllcations. Curt Phann Des.):224l-2252.ang Y,Sun O,He B,et d.Anti-inflammatory effect of hydrogen?rich 84dine in a rat model of regional myocardial ischemia sad repodusion.Int J Cardiol,):9I.95. [6]Ohsawa I。lshikawa M.Takahashl K,et a1.Hydr0雩en acts∞a therapeutic antioxidaat by selectively reducing cytotoxic oxygen radicals.Nat Med.):醅8-694.[7]Maher P,Salgado KF,Zivin JA.et日1.A novel appnmch tO screening for new neuropmtective compounds for the treatment ofstroke.Bmin Res.):117.125.[8]Kasai H.Analysis of a form of oxidative DNA dama带. 8.hydmxy-2-deoxyguanesine.脯&删畦盯of cellular oxld“ve 8Ⅱ∞during carcinogenesis.Mutst Res.): 147.163.[9]Javedov S,l(|∞m”M.Mitochondrisl permeability transition ∞m opening∞811endpoint to initiate cell death and as H pulative larger for c,tt'thoprotection.cell Phr|id Bic℃hem。―4):1.22.[10】Zhan ZQ.Morris CD.Budde JM,et aI.Inh/bidon ofmyocardial apoptosis reduces infarct si∞and improves regl∞ill contractile dy妇fion durmgreperfu曼ion.caIdioVj∞Res.): 132.142.【11]cai J.Ka吨Z.Liu K。el a1.№∞叩删\[12】Hayeshida K.Sano M.mⅢa I.d lI.Inh|I正∞of hyd嘴∞ gas reduces infarct si∞in the rattodd of m”圮硼dial ischemia― mFdil妇injm'y.Biochem Biophys Res Commun.):30―35.(收稿日期:) (本文冀辑:麓苑)氢饱和生理盐水对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用作者:何雁飞 , 赵嘉华 , 孙强 , HE Yan-fei, ZHAO Jia-hua, SUN Qiang作者单位:116021辽宁省大连,解放军91181部队医务中心刊名:中华航海医学与高气压医学杂志英文刊名:Chinese Journal of Nautical Medicine and Hyperbaric Medicine年,卷(期):)参考文献(12条)1. Ugalde H;Ugalde D;Munoz MAngioplasty compared to thrombolysis as the initial reperfusion therapy in acute myocardial infarction 2011(11)2. Burwell LS;Nadtochiy SM;Tompkins A JDirect evidence for S-nitrosation of mitochondrial complex I2006(Pt 3)3. Perrelli MG;Pagliaro P;Penna CIschemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms:Role of mitochondria and reactive oxygen species 2011(06)4. Ohta SRecent progress toward hydrogen medicine:potential of molecular hydrogen for preventive and therapeutic applications 2011(22)5. Zhang Y;Sun Q;He BAnti-inflammatory effect of hydrogen-rich saline in a rat model of regional myocardial ischemia and reperfusion 2010(01)6. Ohsawa I;Ishikawa M;Takahashi KHydrogen acts as a therapeutic antioxidant by selectively reducing cytotoxic oxygen radicals 2007(06)7. Maher P;Salgado KF;Zivin JAA novel approach to screening for new neuroprotective compounds for the treatment of stroke 2007(10)8. Kasai HAnalysis of a form of oxidative DNA damage,8-hydroxy-2-deoxyguanosine,as a marker of cellular oxidative stress during carcinogenesis 1997(03)9. Javadov S;Karmazyn MMitochondrial permeability transition pore opening as an endpoint to initiate cell death and as a putative target for cardioprotection )10. Zhao ZQ;Morris CD;Budde JMInhibition of myocardial apoptesis reduces infarct size and improves regional contractile dysfunction during reperfusion 2003(01)11. Cai J;Kang Z;Liu KNeumprotective effects of hydrogen saline in neonatal hypoxia-ischemia rat model
2009(01)12. Hayashida K;Sano M;Ohsawa IInhalation of hydrogen gas reduces infarct size in the rat model of myocardial ischemia-reperfusion injury 2008(01)本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zhhhyx.aspx以下内容为系统自动转化的文字版,可能排版等有问题,仅供您参考:?183?.论著. 氢饱和生理盐水对大鼠心肌缺血再灌注 损伤的保护作用何雁飞赵嘉华孙强【}商要】H的研究氢饱和生理盐水(氧水)对sD大鼠心肌缺m再灌注损伤的保护作用.方法健康成年雄性sD大鼠36只.按数字表法随机分为假手术组、手术对照组(对照组)、氢水治疗组(氢水 组),每组12只。似手术组只开胸,不做缺血再灌注处理;对照绢和氧水组在冠状动脉左前降支阻断血 流30 min后行冉灌注24 h,造成心肌缺血冉灌注损伤,氢水组冉灌注5 min前以5 ml/kg腹腔注射氧水。对照组和氧水组再灌注24 h后榆测左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左心室内压最大上 升和下降速率[±(dP/dt)max]等心功能指标;/}1氯化t苯基17lj氯唑(TTC)染色观察心肌梗死面积,HE 染色观察心肌损伤程度.并检测血浆和心肌中丙二醛(MDA)的表达以观察心肌氧化损伤程度,用TUNEL法检测心肌缺血区(areaatrisk.AAR)心肌细胞凋产,分光光度法检测心肌凋广酶easpase?3的表达,免疫组化检测心肌8-羟培鸟嘌呤(8-OHdG)的表达。假手术组在同时间点崩相同方法观察或检测上 述指标。结果与财照组相比,氢水组心肌缺血{l}灌注损伤湿著减轻,心肌组织病理性损伤减轻,脂质和DNA过氧化损伤指标明娃减低.心功能硅若改善.心肌细胞凋f减轻,casp∞e-3表达降低(氢水组 0.278:tO.092,对照组0.507±0.072),心肌梗死面积显著减少。结论氢水nJ以有效减少心肌缺血再灌注损伤。【关键词】过氧化损伤缺血再灌注;心肌梗死;氢饱和生理盐水;血流动力学;丙二醛;心肌细胞;Protectiveeffectofhydrogen-s缸uratedratssaline蛳the injuryinducedb,reperfusion Medical Centerfollowingcardiovascular ischemia in Unit,Dalian 116021,China Corresponding author:SUNHEYah舌f,ZHAO Jia-hua。SUN Q如,罾ofNo.91181Qiang,E-mail:89204030@钾.cornTo investigate the protective effect of hydrogen?saturated salineon【Abstr盹t】Objectivetheinjuryratainduced by reperfusion following cardiac ischemia in Sprague?Dawleywererats.MethodsThirty―six male SDrandomly divided into the sham surgery group,the control group and hydrogen?saturated salinegrouptreatmentgroup.eaeh consisting of 12 animals.The animals in Ihe sham surgerynotreceived thoracic surgery,hut didhaverepeffusion.Following 30?minutews.socclusion of blood flow inthe left anteriorgroupdescending(LAD)coronary artery,24一hour reperfusion saline group,inducing repeffusionperformed in Ihe animals of the controland hydrogen―saturatedinjury following cardiac ischemia.The hydrogen group received ahdominalatainjection of hydrogen?saturated salinesuch∞left ventrieular systolicratesdosage of 5 ml/kg,5 minutes before reperfusion.Cardiac functions.pressure(LVSP).1eft ventdeular diastolic pressure(LVDP),maximalof left intraventricularincreasing and decreasingpressures[±(dP/dt)max]weremonitored intheanimals of Ihe control group and the hydrogen saline group.24 h after reperfusion.The size of cardiac infarctwasassessedwithtriphenyhetrazoliumchloride(下rc)staining.Morpk,kgi(tal injuryexpressions ofslresswasmP矗sure(1withHematoxylin and myocsrdiumwereEosin(HE)staining.Themeasuredtoseemakmdiahlehyde(MDA)in the plasma andthe oxidaliveof myocardium.Alxllltusis of cardiac cells in the affe(?tedDOI:10.3760/I?mmj.;^m 作舞肇待:116021I009-6906.201203.015辽’r省夫连,解放军91181豁队医务中心通f^作卉:孙强.电F佾箱89204030@qq.eom万方数据 .184?areawasmeasured“thTUNEL.The expressionof caspase一3wasmonitoredwiththeareaspectropholometficwasmethod。and the expression of8-hydmxy―desoxyguanosine(8-OHdG)in the affectedsurgerymeasured withatinmmnohistology.For the mdmMs in the shamsalnegroup,above indicesweieassessL耐or monitoredthetimepointsand,siththesamemethods.ResultsWhen compared with the control group.following animMs of the hydrogen saline group improvedchanges couldbenoticed:reperfosion lesionininjury for theconsiderably,pathologicalthe affected cardiac tissuelessened,indices of lipid and DNA oxidationdecreased significantly,cardiac function improved considerably。apoptosis of cardiac muscular cells decreased,the expression of easpase-3w.asreduced and the size of cardiac infarction decreasedsiguificantly.ConclusionsHydrogen--saturated saline could effectively alleviate reperfusioninjury following cardiac ischemia.【Key words】Hemodynamies;Reperfusion afterischemia;Cardiacinfarction;Hydrogen―saturated saline; danmgemalond;aldehyde;Cardiac muscular cell;Oxidative目前,血管再通、恢复血流是临床上治疗急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)最有效和2.氢水的制备:在0.4 MPa压力下将氢气在生理盐水巾溶解6 h,经气相色谱检测氢气浓度约为0.77普遍的手段…。尽管恢复血流非常关键,但是血流 再通可以激发活性氧簇(reactiveoxygen species,mmol/L,接近饱和浓度(0.88 mmol/L)的氢水装入铝袋中常压下4。c保存备用(不留死腔)。用y 射线消毒灭菌。 3.样本的制备:(1)血浆样本。缺血再灌注24 后,从右心室采集全血5 ml,肝素抗凝,4℃1000h gROS)的产生,ROS的产生不可避免会驱动细胞坏死和凋亡相关信号通路的开放,从而导致细胞毒作用, 产生致命性的再灌注损伤。AMI后50%以上的最 终梗死面积归冈于再灌注损伤,因此减少再灌注损 伤是保护心肌的一个重点。已有研究证实。2 J,可以通过抑制线粒体呼吸链离心10 min,分离血浆,取上清,一20℃保存,朋于 检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。(2)心 肌样本。缺血再灌注24 h后处死大鼠,取心脏置于酶复合体(mitochondrialrespiratorycomplexI and10%甲醛中同定,石蜡包埋,切片,HE染色,用倒置 显微镜观察其病理改变。免疫组织化学方法染色后行8一羟基鸟嘌呤(8-OHdG)检测。另取心肌缺血区组Ⅲ)来预防ROS的产生并增加细胞活力。然而,目前没有公认有效的方法可通过减少自由基来减轻再 灌注引起的氧化损伤【3 J。最近的研究表明,氢气可 以作为一种新型的抗氧化剂来保护局部腑缺血再灌 注损伤。也有研究表明【4 J,氢气可以有效抑制小 肠、肝脏、心脏缺血再灌注引起的氧化应激损伤。本研究在大鼠缺血冉灌注5 rain前腹腔注射饱和氧生织,制成10%生理盐水匀浆,4℃下3000 r/min离心10min,取上清液,用于检测MDA含量和caspase-3 4.指标检测:(1)心功能参数。对照组和氧水表达水平。组冉灌注24 h后,行左心室插管,由powedab生物理盐水(氢水),观察氧水对于心肌缺血冉灌注损伤 的保护作J}}j。并通过观察心脏『IIL流动力学指标,评估 心肌梗死面积、氧化应激水平等,对氢水保护作用的 机制进行初步探讨。材料与方法信号采集系统获取左心室收缩压(LVSP)、左心室舒 张压(LVDP)、左心室内压最大上升和下降速率 [±(dWdt)max]等心功能指标。(2)心肌梗死面 积。对照组和氧水组缺阻再灌注24 h后,麻醉大鼠,左心室心尖部注射2%伊文思蓝l ml,未染成蓝色部分即为心肌缺血区(areaatrisk,AAR)区域。1.实验动物分组及处理:健康成年雄性SD大 鼠36只,按数字表法随机分为假手术组、手术对照 组(对照组)、氢水治疗组(氧水组),每组12只。假 手术组只开胸,不做缺m冉灌注处理;对照组和氢水 组在冠状动咏左前降支阻断血流30 min后行再灌注24 h。造成心肌缺血再灌注损伤模型,氢水组再灌 注5 rain前以5 ml/kg腹腔注射氢水。AMI建立方处死大鼠,将左心事横切成2 mm厚的肌片,置人I%氯化三苯基四氮唑(m)溶液中。放人37℃恒温箱中15 min,缺Jf『L组织染成红色,心肌梗死面积为梗死区域(白色)占AAR的百分比(红色+白色)。 (3)心肌原位细胞凋亡检测(TUNEL)。取对照组和 氢水组心肌组织切片,行心肌原位细胞凋亡检测(TUNEL),染色遵循试剂盒说明操作。结果判定:光学显微镜下细胞核呈棕褐色为TUNEL阳性染色法见文献[5】。万方数据 细胞。凋亡指数(apoptotie index,AI):(凋亡细胞 数/总细胞数)×100%。(4)心肌损伤程度。对照 组和氢水组心肌组织HE染色,光镜下观察心肌病 理损伤程度;按试剂盒(碧云天生物技术研究所)说 明书检测血浆和心肌中MDA含量.用TUNEL法检 测心肌缺血区心肌细胞凋亡,分光光度法检测心肌 凋亡酶caspase-3表达,免疫组织化学染色检测心肌 8-OHdG表达,以观察心肌氧化损伤程度。假手术 组在同时间点用相同方法观察或检测上述指标。 5.统计学处理:数据以均数±标准差(i±s)表示,用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理,用单因表2各组MDA含量和caspase-3表达 测定结果(各组n=12,i±s)注:MDA为丙二醛。与假手术组比较‘P<0.05;与对照组比较bp<0.054.心肌病理结果:HE染色后,光镜下可见对照 组和氢水组均有心肌中性粒细胞渗入、坏死、出血。 但是氢水组心肌中性粒细胞渗入、坏死、出血和间隙 细胞较对照组明显减少。见图l。素方差分析评价组间差异,两两比较采用Student. Newman-Keuls检验。P<O.05为差异有统计学意义。结 果1.血流动力学检测结果:对照组LVDP高于假 手术组和氢水组(P<0.05),假手术组和氢水组比 较无统计学差异。对照组和氢水组LVSP均低于假 手术组(P<0.05),氢水组高于对照组(P<0.05)。 对照组和氢水组±(dP/dt)max均低于假手术组 (P<0.05)。氢水组高于对照组(P<0.05)。见表1。注:A为假手术组,B为对照组.C为氢水组 田l各组大鼠心肌病理图(免疫组织化学染色×400)5.心肌细胞原位凋亡检测结果:免疫组织化学裹1各组大鼠左室心功能检测结果(各组n=12,i±5)染色后,对照组和氢水组心肌缺血区均出现大量 TUNEL阳性细胞(图2)。检测结果表明,氢水组 TUNEL阳性细胞率为(15.2-l-1.3)%,对照组为 (24.3±1.5)%,氢水组较对照组明显减少(P<0.05)。洼:LVDP为左心室舒张压,LVSP为左心室收缩压,+(dP/dt) max为左心室内压最大上升速度,一(dP/dt)max为左心室内压最大 下降速度。与假手术组比较‘.P<0.05;与对照组比较5P<0.052.心肌梗死面积:假手术组一t5肌梗死面积为0, 对照组为(32.11±4.40)%,氢水组为(8.97± 3.49)%。氢水组比对照组明显减少,差异有统计学 意义(P<O.05);氢水组比假手术组心肌梗死面积 增加,但差异无统计学意义。 3.MDA含量和easpase?3表达水平:对照组和 氢水组血浆和心肌中MDA含量较假手术组显著升 高(P<O.05),氢水组血浆和心肌中MDA含量显著 低于对照组(P<0.05)。对照组和氢水组心肌缺血 区cmpase-3表达较假手术组显著升高(P<0.05), 氢水组较对照明显降低(P<0.05)。见表2。蕊囊l 飘l注:A为假手术组.B为对照组,c为氢水组圈2各组大鼠心肌TUNEL染色结果(x400)6.心肌8-OHdG检测结果:对照组和氢水组心 肌缺血区均出现大量的8-OHdG阳性细胞,见图3。 检测结果表明.氢水组8-OHdG阳性细胞数占 (49.7±7.3)%,对照组占(98.8±12.6)%,氢水 组较对照组明显减少(P<0.05)。万方数据 ?186?减少再灌注损伤。黧黯黧本研究证实氢水可以有效减轻大鼠缺血再灌注 损伤,此种心肌保护作用可能与之前报道的大脑损 伤模型中分子氢选择性清除活性氧(ROS)有关旧1。 ROS是再灌注后已缺血区心肌产生的,ROS的产生 是一种致死性的再灌注损伤。活性氧02’和H:0: 可以被机体的抗氧化系统清除,而目前没有酶可以 有效清除毒性作用更强的?OH和ON00’。氢气被 证明可以去除以上2种毒性ROS【6】。氢气分子是 电中性的。且分子量比氧气分子小,易于穿透细胞膜 进入细胞核和细胞器如细胞核及线粒体中,而线粒 体是产生ROS的主要部位¨J。 本研究发现,氢水可有效改善大鼠缺血再灌注 损伤后引起的心功能下降,同时可减少心肌梗死面 积,降低血清和心肌中MDA的浓度,减轻心肌缺血 区细胞凋亡和DNA氧化应激损伤。组织学分析提 示。氢水组心肌缺血区域出血、坏死、白细胞渗入明 显减轻。 8-OHdG可作为评价体内细胞氧化损伤的高灵 敏性生物标记物哺]。本研究表明,氢水组心肌缺血 区域8-OHdG阳性细胞数相比对照组明显减少,说 明氢水可以减少再灌注损伤引起的DNA脂质过氧 化损伤。笔者推测,再灌注发生即刻,氢气减少了 ROS的产生。稳定了线粒体膜电位,维持了ATP合 成,避免了DNA损伤。降低了脂质过氧化。从而保护 了心肌。发挥保护作用的最根本机制可能是抑制了 线粒体通透性转换孔的开放n1。有报道称,大量心 肌细胞坏死可以导致心肌缺血和再灌注后心脏结构 的破坏,减轻心肌细胞凋亡可以减少再灌注以后心 肌梗死面积的扩大¨…。本研究发现,氢水治疗可以 抑制下游凋亡酶easpase-3的激活,并减少心肌细胞 凋亡。提示再灌注5 rain前腹腔注射氢水可以有效本实验室的前期研究证实,氢水对低氧一缺血大 鼠模型有神经保护作用【llJ。本研究采用再灌注5min前腹腔注射氢水的方法,与氢气吸入有类似的效果¨“,且具有以下优势:首先,氢气是易燃易爆气 体,空气中氢气浓度超过4.6%就容易发生爆炸,吸 入2%氢气,溶解在血液中最高只能提高2%的分压 水平,而腹腔注射氢水只需吸入氢气1/50的量;此 外,腹腔注射氢水可以实现浓度和剂量的精确控制。 综上所述,氢水具有生产简单、易于使用、安全 经济的特点,腹腔注射氢水可以有效减轻大鼠心肌 缺血再灌注损伤,因此有可能成为未来患者心肌保 护的新方法。参考文献 [1]UgaldeH。Ugalde D.MunozM.Angioplastycomparedtothmmbolysis∞the initim repeffusion therapy in acute myocardial infarction.RevMed Chil,2011,139(11):1396-1402.[2]Burwell LS.Nadtochiy SM,Tompkian AJ.et a1.Direct evidence for S-nitroⅫion of mhechondrial complex I.Biochem J,2006, 394(Pt 3):627-634.P.Penna C.foehemia/reperfusion jnjury mechanmms:Role 0f mitoeboodria and[3]Permlli MG.Pagliamandcardioprotectivereactive oxygenspecies.W砌d J Cardiol。2011.3(6):186―200.[4]toward hydrogen medicine:potential of molecular hydrogen for preventive and thempoudc印pllcations. 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