何首乌饮对衰老大鼠生精细胞胰岛素通路IRS1、IGF-1、IGFBP3基因表达的影响
　　目的:探讨何首乌饮对衰老大鼠生精细胞胰岛素信号通路IRS1、IGF-1、IGFBP3基因表达的影响。方法:一、体内实验1.实验分组及处理选用30只清洁级12月龄Wistar雄性大鼠随机分为:青年对照组(YCG),自然衰老组(NAG),何首乌饮组(SWYG),每组各10只。青年对照组适应性饲养一周后取材;自然衰老组在饲养到16月龄后灌胃等量蒸馏水60何首乌饮组在饲养到16月龄后,灌胃何首乌饮(4.8 g/100 g)60自然衰老组和何首乌饮组均于18月龄时取材,备用。2.观察睾丸组织IRS1、IGF-1、IGFBP3基因表达采用免疫荧光染色观察IRS1、IGF-1、IGFBP3在睾丸组织的表达位置,Western blot和实时荧光定量PCR检测睾丸组织IRS1、IGF-1、IGFBP3蛋白和mRNA表达的变化。二、体外实验1.细胞的分离、纯化、培养和鉴定组合酶法分离细胞,Percoll梯度密度离心和差异贴壁法纯化细胞,利用苏丹Ⅳ染液鉴定支持细胞并计算支持细胞的纯度;分别利用碱性磷酸酶染色、孚耳根染色、HE染色鉴定生精细胞。2.衰老模型的建立将培养至7 d的生精细胞,加入终浓度为50μmol/L的H2O2和100μmol/L FeSO4,连续干预8 h,换液,继续培养72采用β-半乳糖甘酶特异性染色试剂盒检测实验各组中生精细胞β-半乳糖甘酶的表达情况,以判断衰老模型是否建立成功。3.实验分组及处理根据实验目的分为:正常对照组(NCG),将培养至7 d的生精细胞,继续培养80衰老模型组(AMG),将培养至7 d的生精细胞,加入终浓度为50μmol/L的H2O2和100μmol/L的FeSO4,连续干预8 h,换液,继续培养72何首乌饮组(SWYG),将培养至7 d的生精细胞,加入终浓度分别为50μmol/L的H2O2和100μmol/L FeSO4,连续干预8 h,换液,加入终浓度为10%的何首乌饮含药血清,继续培养72h。4.采用westernblot和实时荧光定量pcr检测基因irs1、igf-1、igfbp3在生精细胞的蛋白表达变化以及其mrna的相对表达水平。结果:一、体内实验结果1.免疫荧光检测结果irs1阳性产物发红色荧光,定位在细胞膜,细胞核采用dapi染色呈蓝色,irs1阳性产物主要表达在精母细胞、支持细胞和肌样细胞。与青年对照组相比,自然衰老组irs1阳性率明显降低(p&0.01),何首乌饮干预后,与自然衰老组相比,何首乌饮用药组irs1阳性率明显升高(p&0.01)。igf-1阳性产物发绿色荧光,定位在细胞质,细胞核采用dapi染色呈蓝色,igf-1阳性产物主要表达在精子细胞。与青年对照组相比,自然衰老组igf-1阳性率明显降低(p&0.01),何首乌饮干预后,与自然衰老组相比,何首乌饮用药组igf-1阳性率明显升高(p&0.01)。igfbp3阳性产物发绿色荧光,定位在细胞质,细胞核采用dapi染色呈蓝色,igfbp3阳性产物在精原细胞和少量间质细胞均有表达。经统计分析,与青年对照组相比,自然衰老组igfbp3阳性率明显升高(p&0.01),何首乌饮干预后,与自然衰老组相比,何首乌饮用药组阳性率明显降低(p&0.01)。2.westernblot检测结果结果显示,与青年对照组相比,自然衰老组igfbp3表达明显增加(p&0.01),irs1、igf-1表达明显减少(p&0.01);与自然衰老组相比,何首乌饮用药组igfbp3表达量明显减少(p&0.01),irs1、igf-1表达量明显增加(p&0.01)。3.qrt-pcr检测结果结果显示,与青年对照组相比,自然衰老组igfbp3mrna表达明显上调(p&0.01),irs1、igf-1的表达明显下调(p&0.01);与自然衰老组相比,何首乌饮用药组igfbp3表达明显下调(p&0.01),irs1、igf-1的表达明显上调(p&0.01)。以上结果表明,何首乌饮可以通过调节胰岛素信号通路关键基因irs1、igf-1、igfbp3的表达延缓大鼠睾丸组织的衰老,为了进一步分析何首乌饮对衰老大鼠生精功能的调控机制,我们采用支持细胞和生精细胞共培养的方法,检测基因irs1、igf-1、igfbp3在生精细胞的表达变化。二、体外实验结果:1.苏丹Ⅳ染色结果显示支持细胞纯度可达90%以上。2.β-半乳糖甘酶特异性染色结果β-半乳糖甘酶特异性染色结果显示,β-半乳糖苷酶阳性产物定位在生精细胞质中。衰老模型组β-半乳糖苷酶阳性率明显高于正常对照组(P&0.01);何首乌饮含药血清干预后,与衰老模型组相比,何首乌饮组阳性率明显降低(P&0.01)。3.Western blot检测结果Western blot检测生精细胞IRS1、IGF-1、IGFBP3蛋白表达结果显示,与正常对照组相比,衰老模型组IRS1、IGF-1表达下调,IGFBP3表达上调(P&0.01),何首乌饮含药血清干预后,与衰老模型组相比,何首乌饮组IRS1、IGF-1表达上调,IGFBP3表达下调(P&0.01)。4.qRT-PCR检测结果qRT-PCR检测生精细胞IRS1、IGF-1、IGFBP3在mRNA水平的改变,与正常对照组相比,衰老模型组IRS1、IGF-1的表达明显下调(P&0.01),IGFBP3的表达上调(P&0.01);何首乌饮含药血清干预以后,与衰老模型组相比较,IRS1、IGF-1的表达明显上调(P&0.01),IGFBP3的表达有所下调(P&0.01)。结论:1.何首乌饮可以通过提高衰老大鼠睾丸组织胰岛素通路关键基因IRS1、IGF-1的表达,抑制IGFBP3的表达,延缓大鼠睾丸组织的衰老。2.何首乌饮能够降低衰老标志物β-半乳糖苷酶在生精细胞的表达。3.何首乌饮可以通过促进生精细胞胰岛素通路关键基因IRS1、IGF-1的表达,抑制IGFBP3的表达,延缓大鼠生精细胞的衰老。综上所述,何首乌饮通过调节胰岛素信号通路关键基因IRS1、IGF-1、IGFBP3的表达延缓大鼠睾丸组织生精细胞的衰老。……
[关键词]：;;;;
[文献类型]：硕士论文
[文献出处]：河北大学2017年
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《中华人民共和国增值电信业务经营许可证》益肾生精胶囊对邻苯二甲酸二丁酯致生殖功能损伤Wistar雄性大鼠睾丸结构和功能的影响;;;;
　　目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯所致不育症的可能病理机制,观察益肾生精胶囊对邻苯二甲酸二丁酯所致Wistar雄性大鼠生殖功能受损的干预调节,以揭示其治疗邻苯二甲酸二丁酯所致不育症的可能作用机理。方法:本实验将100只Wistar雄性大鼠随机分为空白组20只和邻苯二甲酸二丁酯造模组80只。于造模4周后,行模型评价。并随机分为模型组、生精胶囊组、益肾生精胶囊高、中、低剂量组,和空白组共6组。药物干预4周。4周后,处死各组大鼠,检测精子活力、浓度、畸形率,放射免疫法检测血清睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素水平;光镜观察睾丸形态结构。结果:与空白组相比,模型组大鼠睾丸组织结构有明显的病理学改变,精子活力、密度、畸形率;血清睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素水平有统计学意义(P&0.01);与模型组相比,生精胶囊组、益肾生精胶囊高、中剂量组大鼠睾丸组织损伤有不同程度的恢复,精子活力、浓度、畸形率;血清睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素水平有统计学意义(P&0.01,);与益肾生精胶囊高剂量组相比,除模型组外的各组大鼠睾丸组织结构定量分析,精子活力、密度、畸形率;血清睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素水平差异有统计学意义(P&0.01)。结论:邻苯二甲酸二丁酯可致大鼠精子活力、浓度降低,精子畸形率增高;可致大鼠睾丸形态结构损伤;邻苯二甲酸二丁酯可致血清T、LH水平降低,FSH水平增高;生精胶囊、益肾生精胶囊可不同程度的提高邻苯二甲酸二丁酯所致生殖功能受损大鼠精子活力、浓度,降低精子畸形率,提高血清T、LH水平,降低血清FSH水平;改善睾丸形态结构。……
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[文献类型]：会议论文
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欺诈色情恶意营销违法信息砷对大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-3表达及血清中黄体生成素浓度的影响--《环境与健康杂志》2014年08期
砷对大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-3表达及血清中黄体生成素浓度的影响
【摘要】：目的研究亚慢性砷中毒对大鼠睾丸生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase-3)表达及血清黄体生成素(LH)的影响。方法将40只健康成年清洁级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为对照组(蒸馏水)组和0.4、2、10 mg/kg亚砷酸钠染毒组,每组10只,采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒14周。测定大鼠血清LH浓度及生精细胞caspase-3阳性率。结果与对照组比较,各剂量亚砷酸钠染毒组大鼠生精细胞caspase-3阳性率均较高,2、10 mg/kg亚砷酸钠染毒组大鼠血清LH浓度均较低,差异有统计学意义(P0.01,P0.05);且随着亚砷酸钠暴露剂量的升高,大鼠生精细胞caspase-3阳性率呈上升趋势,血清LH浓度呈下降趋势。结论砷暴露导致的生精细胞caspase-3表达增加可能是其雄性生殖毒性效应的机制之一。
【作者单位】：
【基金】：
【分类号】：R114
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