8000 流明、WUXGA、三芯片 DLP 投影机 - RLM-W8 - Barco
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& RLM-RACE法合成双链cDNA
RLM-RACE法合成双链cDNA
1.&酶类及分子量标准
&& 1)& 高保真酶Easy-A high fidelity cloning enzyme,Merck公司Stratagene系列；
&& 2)&Taq DNA Polymerase，上海申能博彩生物技术有限公司；
&& 3)&DL 2000 DNA Marker，宝生物工程（大连）有限公司。
2.&主要试剂（盒）
&& 1)&GeneRacerTM Kit，美国Invitrogen公司；
&& 2)&SuperScriptTM II Reverse Transcriptate，美国Invitrogen公司；
&& 3)&dNTP，上海申能博彩生物技术有限公司；
&& 4)&其他试剂为国产分析纯。
1.&MDF-192型超低温冰箱，日本三洋电机株式会社；
2.&CF43S超净工作台，Gelman公司；
3.& 高速冷冻台式离心机，Heraeus Sepatech公司；
4.&Capsule HF-120型微量离心装置，Millipore公司；
5.&BL150S型电子天平，德国Sartorius公司；
6.&GB 1302型天平，Mettler-Toledo仪器（上海）有限公司
7.&YXQ.WY21-600IIR卧式高压蒸汽消毒器，广州市医疗设备厂；
8.&DYCD-31D型水平电泳槽，北京六一仪器厂；
9.&EPS1001型电泳电源，Amersham Pharmacia公司；
10.&连续可调微量移液器，德国Eppendorf公司；
11.&Primus 25型PCR基因扩增仪，德国MWG公司；
12.&AlphaImager 2200型凝胶图像分析系统，Alpha Innotech公司；
13.&XK96-B微型旋涡混合仪，江苏省姜堰市新康仪器厂。
无菌感染期线虫RNA
1. 总RNA双链cDNA的合成
按照GeneRacerTM Kit 说明书的方法RLM-RACE法合成双链cDNA 。
2. RNA脱磷酸
&& 1)&&脱磷酸反应
&&&&&& &A.&在无菌的1.5 mL离心管中依次加入下列组分建立反应体系（冰上操作）：
10&CIP Buffer
RNaseOutTM (40U/&L)
CIP (10U/&L)
DEPC water
Total Volume
&&&&&& &B.& 轻混反应物，微漩涡，微离，50℃温育1 h，微离后置于冰上。
&& 2)& 沉淀RNA
&&&&&&& A.& 在上述反应液中加入90 &L DEPC H2O和100 &L酚/氯仿，漩涡混匀 30秒；
&&&&&&& B.& 室温18000 rpm高速离心5 min；
&&&&&&& C.& 小心吸取上层水相到一新的离心管内；
&&&&&&& D.& 加入2 &L（10 mg/mL）mussel glycogen ，10 &L 乙酸钠（3 M，pH 5.2），温和混匀，再加入220 &L 95％乙醇，微漩涡混匀；
&&&&&&& E.& 置于-80℃，10 min；或-20℃过夜；
&&&&&&& F.& 4℃条件下，18000 rpm离心20 min，获得沉淀的RNA；
&&&&&&& G.& 小心吸弃上清液，加入500 &L 70％乙醇，上下颠倒混匀，再微漩涡；
&&&&&&& H.&4℃，18000 rpm离心2 min，吸弃上清，再离心几秒，用移液器彻底除去乙醇，风干；
&&&&&&& I.& 沉淀溶于8 &L DEPC H2O中，取1 &L进行1％琼脂糖凝胶电泳检测。
3. mRNA脱帽
&& 1)&脱帽反应
&&&&&& A.&在无菌的1.5 mL离心管中依次加入下列组分建立反应体系（冰上操作）：
10& TAP Buffer
RNaseOutTM (40U/&L)
TAP (40U/&L)
Total volume
&&&&&&& B.& 轻混反应物，微漩涡，微离，37℃温育1 h，微离后置于冰上。
&& 2)&&沉淀RNA
方法同1中2）
4. 脱帽mRNA与RNA Oligo的连接
&& 1)& 连接反应
&&&&&&& A.&加7 &L脱磷酸、脱帽的RNA至GeneRacerTM RNA Oligo中，用吸头混匀，微离收集液体；&&&&&&& B.&65℃温育5 min，冰上致冷，微离；
&&&&&&& C.& 在管中依次加入下述组分建立反应体系：
10& Ligase Buffer
RNaseOutTM (40U/&L)
T4 RNA Ligase (5U/&L)
Total volume
&&&&&&& D.&37℃温育1 h，微离，冰上致冷。
&& 2)& 沉淀RNA
方法同1中2），最后加11 &L DEPC H2O，取1 &L进行电泳检测。
5. 反转录第一链cDNA
&& 1)& 依次加入下述组分于上述10 &L连接体系中：
GeneRace Oligo dT Primer
RNaseOutTM (40U/&L)
&& 2)&65℃温育5 min，冰上致冷2 min，微离；
&& 3)&依次加入下述组分于上述13 &L混合体系中：
5& First Strand Buffer
RNaseOutTM (40U/&L)
SuperScriptTM III RT (200U/&L)
Total volume
&& 4)&吸头混匀，微离，50℃温育1 h；
&& 5)&70℃，15 min终止反应，冰上冷却2 min，微离心（室温，18000 rpm）；
&& 6)&混合反应物中加入1 &L的RNase H（2 U）, 37℃温育20 min；
&& 7)&微离，直接用于PCR扩增或-20℃贮存。
6. PCR扩增dscDNA
以反转录第一链cDNA为模板，按以下组分，建立PCR反应体系：
10&PCR buffer
dNTP Mix (10 mmol/L)
GeneRacerTM 3& Primer (10 &mol/L)
GeneRacerTM 5& Primer (10 &mol/L)
RT template
Easy-A high fidelity cloning enzyme
Total volume
充分混匀，按以下程序进行PCR扩增：95℃热变性2 min，迅速加入高保真酶，再94℃变性2 min进入循环，94℃变性30 秒，65℃退火30秒，68℃延伸2 min，25个循环后于68℃继续延伸10 min。扩增产物以琼脂糖凝胶电泳检测，置于-20℃保存备用。
adsfasdfasdkfasdfRealm数据库的简单介绍和使用
时间： 00:26:10
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&&&& 收藏：0
标签：&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&给大家介绍一个数据库操作的框架Realm，本文主要以iOS 平台的使用场景为例。
realm是一个跨平台移动数据库引擎，支持iOS、OS X（Objective-C和Swift）以及Android；
核心数据引擎由C++打造，并不是建立在SQLite之上的ORM, 拥有独立的数据库存储引擎；
据官方称性能上比sqlite, coredata牛逼，而且使用起来更加简单, 更易入门。
下载地址：
使用教程：
辅助工具：
1、Realm Browser：可视化访问 Realm 数据库。
2、Xcode插件：可以快速创建Realm可存储模型对象。
开始Realm实战：
为了帮助您更好地理解 Realm 的使用，下面我们将会对 Realm 的相关术语和主要类进行一个大致的介绍：
RLMRealm&： RLMRealm 是框架的核心所在，是我们构建数据库的访问点，就如同 Core Data 的管理对象上下文（ managed &object context ）一样。出于简单起见， realm 提供了一个名为 defaultRealm 的单例，在本教程中我们就仅使用这个单例来完成我们所需的功能。当然，我们也可以导入外部已经编写好的 realm 数据库文件，也可以在我们不需要将数据保存在硬盘上时使用 “ 内存实例对象 ” （ in-memory realm instance ），此外，还可以同时使用多个数据库文件。
RLMObject&：这是我们自定义的 realm 数据模型。创建数据模型的行为将会影响到数据库的结构。要创建一个数据模型，我们只需要继承 RLMObject ，然后设计我们想要存储的属性即可。
关系 (Relationships)&：通过简单地在数据模型中声明一个 RLMObject 类型的属性，我们就可以创建一个 “ 一对多 ” 的对象关系。同样地，借助 RLMArray 我们还可以创建 “ 多对一 ” 和 “ 多对多 ” 的关系。
写操作事务 (Write Transactions)&：数据库中的所有操作，比如创建、编辑，或者删除对象，都必须在事务中完成。 “ 事务 ” 是指位于 beginWriteTransaction() 以及 commitWriteTransaction() 操作之间的代码段。
查询 (Queries)&：要在数据库中检索信息，我们需要用到 “ 检索 ” 操作。检索最简单的形式是对 RLMObject 对象发送 allObjects() 消息。如果需要检索更复杂的数据，那么还可以使用断言（ predicates ）、复合查询以及结果排序等等操作。
RLMResults&：这个类是执行任何查询请求后所返回的类，其中包含了一系列的 RLMObjects 对象。和 NSArray 类似，我们可以用下标语法来对其进行访问，并且还可以决定它们之间的关系。不仅如此，它还拥有许多更强大的功能，包括排序、查找等等操作。
1.简单的数据操作
1.1准备: 创建数据模型, 继承自RLMObject
创建对象的方式：1. 普通创建；2. 通过父类RLMObject中的方法快速创建&initWithValue。
请注意，所有的必需属性都必须在对象添加到 Realm 前被赋值，由于Realm 在自己的引擎内部有很好的语义解释系统，所以 Objective?C 的许多属性特性将被忽略，如nonatomic, atomic, strong, copy 和 weak 等。 因此为了避免误解，官方推荐在编写数据模型的时候不要使用任何的属性特性。
1.2 使用RLMRealm对象, 保存指定模型
有3种写入方式，首先获取RLMRealm对象：RLMRealm *realm = [RLMRealm defaultRealm];
写入方式1 &：
//开启写入事务
[realm beginWriteTransaction];
//添加模型对象
[realm addObject:stu];
//提交写入事务
[realm commitWriteTransaction];&
写入方式2：
[realm transactionWithBlock:^{
& & & &&[realm addObject:stu];
写入方式3：
[Stu createInRealm:realm withValue:@{@"stu_id": @22, @"name": @"马冬梅2", @"age": @666}];
1.3 使用RLMRealm对象, 更新指定模型
方式1：在事务中直接更新对象
[realm beginWriteTransaction];
stu.name = @"土豆";
[realm commitWriteTransaction];
方式2：根据主键进行更新
//1. 要求操作的模型, 必须实现方法+ (NSString *)primaryKey 返回主键//2. 在事务中调用方法 [realm addOrUpdateObject:stu2];
方式3：根据主键进行更新//1. 要求操作的模型, 必须实现方法+ (NSString *)primaryKey 返回主键//2. 在事务中调用方法
[Stu createInRealm:realm withValue:@{@"stu_id": @22, @"name": @"马冬梅2", @"age": @666}];
1.4 使用RLMRealm对象, 删除数据
删除指定的对象(在事务中)
[realm deleteObject:stu]; 注意: 必须是从realm数据库中获取的模型对象, 而不是自己创建的 RLMObject *obj = [realm objectWithClassName:@"Stu" forPrimaryKey:@2];
删除所有对象(在事务中)
[realm deleteAllObjects];
1.5 使用RLMRealm对象, 查询数据
这里引出链式查询的概念：在查询结果的基础上, 进行二次查询，如下：
[stus objectsWhere:@"address beginswith ‘北京‘"];
[stus sortedResultsUsingProperty:@"name" ascending:YES];
注意:查询出来的结果对象是懒加载, 只有真正访问时, 才会加载相应对象, 所以, 这里的分页, 其实就是从所有集合中分页获取即可。代码演示：
RLMResults&Dog *& *dogs = [Dog allObjects];
for (NSInteger i = 0; i & 5; i++) {
Dog *dog = dogs[i];
RLMResults&Stu *& *stus = [Stu objectsWhere:@"name = ‘马冬梅‘"];查询所有：[Stu allObjects]；注意事项： 1. 所有的查询（包括查询和属性访问）在 Realm 中都是延迟加载的，只有当属性被访问时，才能够读取相应的数据 2. 查询结果并不是数据的拷贝：修改查询结果（在写入事务中）会直接修改硬盘上的数据。 3. 一旦检索执行之后, RLMResults 将随时保持更新
2.支持的数据类型
支持的类型包括：BOOL, bool, int, NSInteger, long, long long, float, double, NSString, NSDate, NSData, NSNumber。
缺点是不支持集合类型，其解决方案是&序列化成NSData进行存储 &或者&转换成RLMArray&RLMObject&进行存储
对一关系& & &当一个对象持有另外一个对象时, 比如人有一个宠物??
1. 在Dog中, 遵循指定协议方法
RLM_ARRAY_TYPE(Dog)
RLM_ARRAY_TYPE 宏创建了一个协议，从而允许 RLMArray&Dog& 语法的使用。
2. 在Person中, 定义属性
@property (nonatomic, strong) RLMArray&Dog *&&Dog& *
注：虽然可以给 RLMArray 属性赋值为 nil，但是这仅用于“清空”数组，而不是用以移除数组。这意味着您总是可以向一个 RLMArray 属性中添加对象，即使其被置为了 nil。
举例：人拥有狗, 狗又有相应的主人?实现方法：
1. Dog中定义属性
@property (readonly) RLMLinkingObjects *
2. 实现协议方法, 标明链接关系
+ (NSDictionary&NSString *,RLMPropertyDescriptor *& *)linkingObjectsProperties {
@"master": [RLMPropertyDescriptor descriptorWithClass:NSClassFromString(@"Stu") propertyName:@"dogs"]
未完待续。。。标签：&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
&&国之画&&&& &&&&chrome插件&&
版权所有 京ICP备号-2
迷上了代码！// Create object
Person *author = [[Person alloc] init];
author.name
= @"David Foster Wallace";
// Get the default Realm
RLMRealm *realm = [RLMRealm defaultRealm];
// You only need to do this once (per thread)
// Add to Realm with transaction
[realm beginWriteTransaction];
[realm addObject:author];
[realm commitWriteTransaction];
Book *cheeseBook = ... // Book stored in Realm
// Delete an object with a transaction
[realm beginWriteTransaction];
[realm deleteObject:cheeseBook];
[realm commitWriteTransaction];
// Delete all objects from the realm
[realm beginWriteTransaction];
[realm deleteAllObjects];
[realm commitWriteTransaction];
// Update an object with a transaction
[realm beginWriteTransaction];
author.name = @"Thomas Pynchon";
[realm commitWriteTransaction];
// Creating a book with the same primary key as a previously saved book
Book *cheeseBook = [[Book alloc] init];
cheeseBook.title = @"Cheese recipes";
cheeseBook.price = @9000;
cheeseBook.id = @1;
// Updating book with id = 1
[realm beginWriteTransaction];
[Book createOrUpdateInRealm:realm withValue:cheeseBook];
[realm commitWriteTransaction];
Realm的对象查询返回一个对象。它包含了一系列的。有一个与NSArray很相似的interface（接口）并且对象可以通过索引（index）下标获取。 但不同于NSArrays的是，是归类的&&它只能容纳一种类型
根据种类获取对象
从realm中获取对象的最基本方法就是&, 它返回一个，里面是查询的子类的所有实例。
// Query the default Realm
RLMResults *dogs = [Dog allObjects]; // retrieves all Dogs from the default Realm
// Query a specific Realm
RLMRealm *petsRealm = [RLMRealm realmWithPath:@"pets.realm"]; // get a specific Realm
RLMResults *otherDogs = [Dog allObjectsInRealm:petsRealm]; // retrieve all Dogs from that Realm
谓词/条件查询
如果你对&很熟悉的话, 那么你就已经知道怎么在realm里面查询了。,,&&和&都提供很好的方法来查询特定的：只需要传递相应地NSPredicate实例，谓词字符串，谓词格式字符串，就可以获取你想要的实例啦。就和NSObject一样。
举个例子，下面的代码就是对上面的拓展。 通过调用[&objectsWhere:]， 获得了默认realm数据库中的所有颜色是黄褐色的，名字开头是&B&的狗的实例。
// Query using a predicate string
RLMResults *tanDogs = [Dog objectsWhere:@"color = 'tan' AND name BEGINSWITH 'B'"];
// Query using an NSPredicate object
NSPredicate *pred = [NSPredicate predicateWithFormat:@"color = %@ AND name BEGINSWITH %@",
@"tan", @"B"];
tanDogs = [Dog objectsWithPredicate:pred];
可以参看Apple的&了解更多关于如何创建谓词
在很多情况下，我们都希望获取或者查询返回的结果都能按照一定条件排序。所以，支持使用指定的属性对数据列进行排序。Realm允许指定一个排序要求并且根据一个或多个属性进行排序。举例来说， 下面代码调用了[RLMObject objectsWhere:where:]对返回的数据&dogs&进行排序，排序的条件是名字的字母表升序:
// Sort tan dogs with names starting with "B" by name
RLMResults *sortedDogs = [[Dog objectsWhere:@"color = 'tan' AND name BEGINSWITH 'B'"]
sortedResultsUsingProperty:@"name" ascending:YES];
Realm查询引擎的一个独特属性就是它能够进行简单快捷的链式查询， 而不需要像传统数据库一样的麻烦。
举个例子来说，假如你要所有黄褐色的小狗的结果序列，然后从中查找名字开头是&B&的小狗。 你可以发送如下的请求。
RLMResults *tanDogs = [Dog objectsWhere:@"color = 'tan'"];
RLMResults *tanDogsWithBNames = [tanDogs objectsWhere:@"name BEGINSWITH 'B'"];
更多内容请参看官网：
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