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·７７８·
中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１３Ｊｕｎ；２９（６）：７７８～８２ 网络出版时间：２０１３－５－２８１４：４４　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０１３０５２８．１４４４．００９．ｈｔｍｌ
相关ｍｉＲＮＡｓ对 ＬＳ１７４Ｔ细胞中ＭＲＰｓ的影响
应梦佳，毕惠嫦，胡冰芳，周许年，金　晶，钟国平，黄　民
（中山大学药学院药物代谢与药动学实验室，广东广州　５１０００６） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１３．０６．００９
ｍｉＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）是一类由长约２１～２３个核 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１３）０６－０７７８－０５
苷酸构成的非编码单链ＲＮＡ分子，它们广泛存在于 中国图书分类号：Ｒ３４１；Ｒ３４２?２２；Ｒ３９４?２
植物、线虫和人类的细胞中。ｍｉＲＮＡ通过不完全结 摘要：目的　探讨相关ｍｉＲＮＡｓ对多药耐药蛋白ＭＲＰｓ转录
合目标ｍＲＮＡ分子的３′端非编码区域（３′?ｕｎｔｒａｎｓ? 的影响。方法　经脂质体瞬时转染，将 ｐＣＭＸ?ｍｉＲ?３２８，ｐＣ?
ｌａｔｅｄｒｅｇｉｏｎ，３′ＵＴＲ）互补匹配导致该 ｍＲＮＡ分子的 ＭＸ?ｍｉＲ?２０６及ｐＣＭＸ?ｍｉＲ?６１３表达质粒转入 ＬＳ１７４Ｔ细胞，
翻译受到抑制，或者使目的基因降解和基因沉默，参 ２４ｈ后采用荧光定量 ＲＴ?ＰＣＲ检测相关 ＭＲＰｓ的ｍＲＮＡ变 化。结果　在ＬＳ１７４Ｔ细胞内过表达ｈｓａ?ｍｉＲ?３２８，能够降低
与蛋白的转录后调控［３－５］。人类基因中编码超过 ＭＲＰ３的ｍＲＮＡ表达水平，其抑制率为０?３２（Ｐ＜０?０５）；
１０００种ｍｉＲＮＡ，广泛分布于各种细胞中，参与６０％ ｈｓａ?ｍｉｒ?２０６能够降低ＭＲＰ１的ｍＲＮＡ表达水平，其抑制率为
的基因的调控。最近学者研究发现ｍｉＲＮＡ通过调 ０?３５（Ｐ＜０?０５）。ｈｓａ?ｍｉｒ?６１３对 ＬＳ１７４Ｔ细胞中的相关
控转运体的表达，在脂代谢中发挥重要作用。Ｚｈａｏ ＭＲＰｓ表达无影响。结论　ｈｓａ?ｍｉＲ?３２８和 ｈｓａ?ｍｉＲ?２０６在
等 首次发现 ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ能参与调控多药耐药相 ＬＳ１７４Ｔ细胞系中可以抑制ＭＲＰ３和ＭＲＰ１的转录表达。
关的ＭＤＲ１／Ｐ?ｇｐ，证实 ｍｉＲ?２７ａ和ｍｉＲ?４５１能调控
ＭＤＲ相关蛋白，有可能成为肿瘤细胞耐药的治疗新 关键词：ｍｉＲＮＡ；ＭＲＰ；基因调控；多药耐药；ｍＲＮＡ；转染
靶点。为探讨ｍｉＲＮＡ在肿瘤耐药中的作用，本研究
考察了ｈｓａ?ｍｉＲ?３２８、ｈｓａ?ｍｉＲ?２０６和ｈｓａ?ｍｉＲ?６１３对 　　肿瘤细胞的多药耐药（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，
相关 ＭＲＰｓ的调控作用，将 ｐＣＭＸ?ｍｉＲ?３２８、ｐＣＭＸ? ＭＤＲ）现象已成为肿瘤化学治疗中的重要难题，
ｍｉＲ?２０６和ｐＣＭＸ?ｍｉＲ?６１３表达质粒瞬时转染至人 ＭＤＲ是临床上化疗失败的主要原因之一 。因此，
结肠癌细胞ＬＳ１７４Ｔ细胞系中，探讨这些ｍｉＲＮＡｓ是 研究ＭＤＲ产生的机制、寻求有效的耐药逆转剂及
否对ＭＲＰｓ的ｍＲＮＡ表达有调控作用，为阐明ｍｉＲ? 逆转措施，克服 ＭＤＲ现象已成为国内外的研究热
ＮＡ对ＭＲＰｓ基因在转录后调控的
正在加载中，请稍后...E-mail：&&&&地址：北京市海淀区北三环西路11号首都体育学院&&&&&&&&&&
北京市公安局海淀分局备案第号　京ICP证050368号　
&&&&&&&&&&&&&LS 174T人结直肠腺癌细胞系
LS 174T人结直肠腺癌细胞系
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ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
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LS 174T人结直肠腺癌细胞系
细胞编号： C0795
细胞缩写： LS 174T细胞
细胞名称： LS 174T(人结直肠腺癌细胞)
详细背景： 该细胞是LS 180结肠腺癌细胞株的胰蛋白酶化变种。它比亲本更易传代，像LS 180一样生成大量的癌胚抗原(CEA)。电镜研究表明，它有丰富的微丝和胞浆黏液素液泡；血清学(/sell/76/)直肠抗原3阳性；p53抗原表达阴性，但mRNA表达阳性；角蛋白阳性；癌基因c-myc、N-myc、H-ras、N-ras、Myb和fos的表达呈阳性；癌基因k-ras和sis的表达未做检测；可产生IL-10、IL-6和黏蛋白。
细胞来源： 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
&购买细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，LS 174T人结直肠腺癌细胞系显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和(/company/)技术部沟通交流。& P4
(/sell/99/)规格： 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
细胞规格： 1*10(5)/ml&&1*10（6）/ml
安全水平： 1
细胞种属： 人
组织来源： 结直肠腺
细胞形态： 上皮细胞样
细胞特性： 贴壁
细胞融合度： 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测： 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
&细胞培养三不要：
养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：
1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）
其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更彻底，超净台内根本就不点酒精灯。
2. 不要频繁看细胞。LS 174T人结直肠腺癌细胞系对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。
3. 不要怕消化。在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的(/sell/22/)应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。& 详见细胞说明书
传代方法： 建议1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件： 详见细胞说明书
主要文献： 请具体查阅相关发表文章
细胞培养实验常见问题总结：
1.一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制。
2.快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？
我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞。
3.可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4.可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。&
5.培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为5%-15%，不要低于5%或高过20%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过高则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为10%，可以适量加减。
6. 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换。
7.LS 174T人结直肠腺癌细胞系购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集。
8.购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。
9. 购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于&80&C太久。
10. 收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。C0493 HFLS细胞 ，公司提供背景资料、生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养全方位的技术支持，让您实验再无烦扰！
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厂商性质：生产商品牌：美国ATCC
公司名称： 上海信裕生物科技有限公司
联系人：余琪
（联系我时，请说明是在中国环保在线上看到的，谢谢！）
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人结直肠腺癌细胞组织来源：结直肠培养条件：DMEM +10% FBS形
态：贴壁；上皮细胞样规 格：1×10^6 cells/瓶
LS174T细胞；人结直肠腺癌细胞现货供应，代次低，状态好，现货。规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书培养条件：DMEM +10% FBS细胞数量：1& 106个细胞传代：1:4~1:6传代；每周换液2~3次问题一：LS174T细胞；人结直肠腺癌细胞长得很快很好，30万一瓶，3天就长满，也没出现污染，死细胞也较少。但是消化细胞后，用培养基中和消化液，在细胞计数板上可以看见细胞粘成一小团团的，无法准确计数，很影响种板的准确性，但传代后细胞铺板均匀，生长得也很好。我尝试了很多次细胞计数，每次都出现细胞成团的问题。问题解答1：遇到这种情况，办法有两个，1.就是不能等到LS174T细胞；人结直肠腺癌细胞长得很满时才去消化计数，可以在密度有90%时就去计数，如果怕细胞量不够铺板可以两瓶甚至三瓶合在一起。2.如果聚团还是很严重，我就把一个细胞团默认为3-4个细胞这样来计数，发现这样计数跟实际细胞数也没有太大出入，之后我就一直这样做了。我查了很多资料，都说这个细胞容易抱团生长，因为有突触，所以容易连在一起，为了避免过度消化以及吹打。问题解答2：针对你说的抱团情况，我的处理方法，就是用PBS轻轻吹洗细胞，目的是把贴壁不好的细胞弃掉，你这样重复几次后LS174T细胞；人结直肠腺癌细胞状态就能恢复了，还是强调一下，就是消化是不能消化过度，吹打时也要轻柔。另外血清浓度最好不要太高，这样容易导致细胞加速老化，一般10%就可以了。&09221 & &&& &DMEM&& &DMEM&& &DMEM with High-Glucose - L-Glutamine and Sodium Pyruvate&& &500 ml09221-1L&& &DMEM &&& &DMEM &&& &DMEM with High-Glucose - L-Glutamine and Sodium Pyruvate && &1L09231 & & & && &DMEM && &DMEM && &DMEM with L-Glutamine - Sodium Pyruvate and 25 mM HEPES&& &500 ml09241 & &&& &DMEM &&& &DMEM &&& &DMEM with High-Glucose - L-Glutamine - Sodium Pyruvate and 25 mM HEPES&& &500 ml09251 -1L & && &DMEM-prf&& &DMEM-prf&& &DMEM with High Glucose - L-Glutamine and Sodium Pyruvate - phenol red-free&& &1L09311 & && &Ham's F-10&& &Ham's F-10&& &F-10 with L-Glutamine and 25 mM HEPES && &500 ml09321 &&& &Ham's F-12&& &Ham's F-12&& &F-12 with L-Glutamine and 25 mM HEPES && &500 ml09411 & & && &DMEM/F-12&& &DMEM/F-12&& &DMEM/F-12 with L-Glutamine && &500 ml09421 & & && &DMEM/F-12 && &DMEM/F-12 && &DMEM/F-12 with L-Glutamine and 15 mM HEPES && &500 ml09511 && &RPMI 1640&& &RPMI 1640&& &RPMI &1640 without L-Glutamine - with 25 mM HEPES && &500 ml09521 & && &RPMI 1640&& &RPMI 1640&& &RPMI &1640 with L-Glutamine and 25 mM HEPES&& &500 ml09611 & & & & && &IMDM &&& &IMDM &&& &MDM with L-Glutamine and 25 mM HEPES; without alpha-Thioglycerol - 2-mercaptoethanol &&& &500 ml&& &&& &&& &&& &&& &&& &&& &&& &&& &&& &&& &&& &Growth Factors and Cytokines&& &&& &&& &&& &Human Growth Factors&& &&& &&& &&& &102-01&& &rhSCF&& &重组人干细胞因子&& &Recombinant Human Stem Cell Factor&& &2&g102-02&& &rhG-CSF&& &重组人粒细胞集落刺激因子&& &Recombinant Human Granulocyte Colony Stimulating Factor&& &2&g102-03&& &rhGM-CSF&& &重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子&& &Recombinant Human Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor&& &5&g&102-09&& &rhM-CSF&& &重组人巨噬细胞集落刺激因子&& &Recombinant Human Macrophage Colony Stimulating Factor&& &2&g103-01&& &rhTNF-&&& &重组人肿瘤坏死因子-&&& &Recombinant Human Tumor Necrosis Factor-alpha&& &10&g103-01H&& &rhTNF-&-His&& &重组人肿瘤坏死因子-&,His&& &Recombinant Human Tumor Necrosis Factor-alpha,His&& &10&g103-01V&& &rhTNF-& Vari&& &重组人肿瘤坏死因子-&Variant && &Recombinant Human Tumor Necrosis Factor- alpha Variant && &10&g103-04&& &rhBAF&& &重组人B细胞活化因子&& &Recombinant Human B Cell Activating Factor&& &5&g&103-08 && &rhOSM&& &重组人抑瘤素-M&& &Recombinant Human Oncostatin-M&& &2&g103-08T&& &rhOSM 209a.a.&& &重组人抑瘤素-M209a.a.&& &Recombinant Human Oncostatin-M 209a.a.&& &2&g103-09&& &rhAK1-3&& &重组人血管抑素K1-3&& &Recombinant Human Angiostatin K1-3&& &10&g103-12&& &rhEndostatin&& &重组人血管内皮抑素&& &Recombinant Human Endostatin&& &2&g104-01&& &rhaFGF&& &重组人成纤维细胞生长因子--酸性&& &Recombinant Human Fibroblast Growth Factor- acidic&& &10&g104-02&& &rhbFGF&& &重组人成纤维细胞生长因子--碱性&& &Recombinant Human Fibroblast Growth Factor-basic&& &10&g104-07&& &rhKGF-1&& &重组人角质细胞生长因子-1&& &Recombinant Human Keratinocye Growth Factor-1&& &2&g
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