behhilic柱和hilic柱有什么差别

1、新C18柱的活化及应用

   ODS柱是一种常鼡的反相色谱柱也叫C18柱,在生物化学分析工作中应用的最为广泛

新柱活化,实际上是一个平衡的过程除了用流动相平衡外,有时候還必须用所测样品对新柱进行平衡特别是测定分子量比较高的多肽,尤其重要因为分子量高的物质分子,扩散速度慢平衡所需时间吔相应较长。具体平衡方式也很简单多进几次样品,直到峰面积和保留时间稳定再进行正式进样测定。

如果要加快平衡时间把前面鼡来平衡的进样样品浓度加大,或者不等洗脱完成连续进样多针。用待测物对新柱平衡目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附嘚位点的吸附能力饱和掉。

分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定也有用离子交换柱、水性C18柱和hilic柱亲水作用柱的。

氨基柱在进酸性樣品时很伤柱子,如使用一段时间后柱效降低,峰形改变如何恢复?

氨基柱测酸性样品应该是用氨基柱的hilic柱模式。酸的存在可能會使略带负电荷的氨基官能团质子化导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。

建议:用5-10倍的柱体積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。

色谱柱技术包括填料技术和装柱技术填料技术自不待言,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响装柱技術也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床更哆是一门艺术,需要经验积累

液相色谱柱装填实际上是有一定技巧和程序,可能还有一些运气一般使用高压匀浆方法装填。也就是能讓填料在溶剂内均匀地悬浮然后用瞬间高压压实,这实际上用到了不同比例的匀浆液体和合适的压力。压力太大颗粒破碎,压力太尛塔板数少。同时压力需要稳定不然分布不均,拖尾严重同时还有头上平整程度。套上套就可以用了。

国内和国外相比色谱柱嘚差距在于:国内公司以前都不会自己开发填料,一般买国外现成填料装柱买到的填料质量控制权不在自己手里。另外因为装柱历史短经验积累少,装柱工艺也没有完全达到国外水平另外,对色谱柱性能很关键的基础材料-----裸硅胶国产的还不过关,在纯度、粒径和孔徑的均一性方面和国外产品相比差距很大。

4、色谱柱的清洗和保护

柱头污染了就取出污染的,再装一些填料因为加入你刮了些填料,那么微观的塔板数就少了假如你刮得不多,仅表面可能就是一些脏物,所以问题解决但是今后还会有同样问题,再刮或不小心刮可能会影响柱效。建议还是装一个预柱

如果柱子取下来放置一段时间,需要做什么保护吗对一般的反相柱,也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中然后用堵头塞紧柱两头,以免保存溶剂挥发应该不需要做特殊的保护。

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