大肠杆菌表达系统与蛋白纯化洗脫液表达纯化
大肠杆菌表达系统遗传背景清楚目的基因表达水平高,培养周期短抗污染能力强等特点
是分子生物学研究和生物技术产
業化发展进程中的重要工具。因此熟练掌握并运用大肠杆菌表达系统的基本原理和常规操作是对每一个研究生来说是非常必要
的本章节介绍了实验室常用的大肠杆菌表达系统的构成特点,归纳了利用大肠杆菌表达系统纯化重组蛋白纯化洗脱液的基本流程和详细
操作步骤並且结合笔者的操作经验,总结了初学者在操作过程中可能遇到的问题和解决策略
大肠杆菌表达系统的选择与构建
根据启动子的不同这些载体大致可以分为热诱导启动子,如
等和另外一类就是广泛使用的
等根据表达蛋白纯化洗脱液质的类型可分为单纯表达
载体和融合表達载体。融合表达是在目标蛋白纯化洗脱液的
端添加特殊的序列以提高蛋白纯化洗脱液的可溶性,促进蛋白纯化洗脱液的正确折叠
实現目的蛋白纯化洗脱液的快速亲和纯化,或者实现目标蛋白纯化洗脱液的表达定位常用的用于亲和纯化融合标签包括
的螯合作用而实现親和纯化,其中
端不影响目标蛋白纯化洗脱液的活性因此纯化过程中大多不需要去除。目前常使用的表达载体主要是
标签外还原性谷胱甘肽
转移酶是另一种实验室常用的融合标签。它可以通过还原性谷胱甘肽琼脂糖亲和层析
很多时候能够促进目标蛋白纯化洗脱液的正确折叠提高目标蛋白纯化洗脱液表达的可溶性,因此对
标签表达易形成包涵体的蛋白纯化洗脱液,可以尝试用
融合表达来改进当然,
结核分枝杆菌rv1018c基因的功能鉴定,结核分枝杆菌,非结核分枝杆菌,结核分枝杆菌复合群,结核分枝杆菌菌落,分枝杆菌,草分枝杆菌,注射用母牛分枝杆菌,鸟分枝杆菌,耻垢分枝杆菌