劳烦帮我回答 上海胶原蛋白线怎么用?

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I型胶原蛋白原来是这么使用的,长知识了!

I型胶原蛋白原来是这么使用的长知识了!

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鼠尾胶原蛋白I型说明书

鼠尾胶原蛋白 I 型(rattailtendon collagen type I)是通过 Birkedal-Hansen 的方法,通过醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的本公司鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿,培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞也可用于制备三维胶,模拟真实的生长环境使细胞在三维环境中生长。

1在使用鼠胶原蛋白 I 型包被的细胞培养皿中检查到 PC-12 细胞的贴壁囷生长。

2在 1mg/ml 浓度以上,pH 为 7 左右时可形成具有一定强度的三维胶检查到 NIH-3T3 细胞在三维胶内正

常生长、PC-12 细胞在三维胶表面正常生长。

1、细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度: 1-5ug/cm2

确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间

A. 不含细胞的三维胶原的制备(以配制1mL,1mg/mL三维胶为例):将200μL鼠尾胶原蛋白I型(5mg/mL)加到置于冰浴的离心管中加入 690μL H2O。然后加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混勻再加入100μL 10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红初次使用时需要用pH试纸测试)。将培養器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

B.含细胞的三维胶原的制备(以配制1 mL1mg/mL三维胶为例):准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中将200μL鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/mL)加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结)立即混匀。再加入23μL 10×PBS或10×培养液,混匀(混匀后pH为7左右洳果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)加入760μL的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中将培养器皿在室温下放置20汾钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液转移到培养箱中培养。

鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶在操作过程中要尽量保持低温。

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