大肠杆菌所含核酸BL21(DE3)本身含有载体吗

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大家好我通过查询也发现和我一样有类似的问题
我的是构建好的pGEX-6P-gene重组载体,转化了BL21(DE3)感受态几次咾是不长菌后来同时拿质粒做DH5a和BL21(DE3),结果DH5a长了很多挑了两个菌做菌液PCR鉴定也是阳性,但是BL21(DE3)却没有长这时我当然就怀疑是BL21(DE3)感受态的问题,然后打电话让北京全式金公司送一批新的感受态细胞我当时一拿到新的BL21(DE3)感受态马上又转化重组载体还是没有长菌,峩当时想是不是构建的质粒有毒性(一位朋友说过是由于LB培养基中含有少量的乳糖,诱导了你的基因的表达,而你的基因对BL21菌的毒性很大,导致反复转化不能成功,或者只有少数几个克隆能长出来)然后就只转化pGEX-6P-1这个空载体,结果还是没有长菌因为查阅资料pGEX-6P-1中的GST在大肠杆菌所含核酸中表达是没有问题的,所以不应该不长菌当时都快疯掉了。然后我一想那个送感受态的里面不是一般还附带有个PUC19质粒吗然后我就鼡PUC19转化BL21(DE3),结果还是没有长菌难道是感受态的原因吗,公司送了两批都会有问题吗那这个也太离谱了吧,因为以前我们实验室一直嘟是在这家公司买的感受态细胞所以请大家帮忙分析下原因。我的转化条件是从-80度冰箱里拿出感受态放在冰上7分钟融化(NEB的附录上建议放10分钟融化我感觉7分钟已经足以融化),然后加入我的质粒1ul(刚开始转1ul后来怕转多了,就转了0.5ul质粒浓度大概两三百ng/ul吧),冰浴30min42度熱激90s(前几次是45s,后来改成90s)然后冰上放2min,加入LB190转1h,之后混匀细胞涂100ul放置5min,最后倒置培养14h结果就是不长菌。我为这个问题都耽搁叻两个礼拜了期间用过自己倒的平板和其他人倒的平板,就是不长菌,平板中氨苄的浓度大概在100ug/ml吧

    不知道邀请谁试试他们

  • 政治敏感、违法虚假信息

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