成衣染色机荧光红染色产生色渍

衣服被染色怎么退去?浅蓝色染上红色。_百度知道关注今日:26 | 主题:131542
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【求助】单标FITC却出现红色荧光的特异性染色?
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这个帖子发布于4年零47天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
如题,昨日做单标FITC的免疫荧光染色,染神经元胞体。结果在荧光显微镜下红色视野却发现了特异性染色,绿色视野也有,而且能merge到一起出现黄色。话说不应该有红色荧光呀,我只用了FITC标记的二抗,然后用DAPI染核。这是什么原因,该怎么解释?求各位大神指点迷津哇~~
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这个和流式是不是原理类似啊?流式中FL1(绿)和FL2两(红)种通道的吸收荧光光谱波长有重叠。
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chenyun2012 如题,昨日做单标FITC的免疫荧光染色,染神经元胞体。结果在荧光显微镜下红色视野却发现了特异性染色,绿色视野也有,而且能merge到一起出现黄色。话说不应该有红色荧光呀,我只用了FITC标记的二抗,然后用DAPI染核。这是什么原因,该怎么解释?求各位大神指点迷津哇~~请翻一翻google 看看FITC是什么,再看看绿色和红色是什么。
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tk57ml 请翻一翻google 看看FITC是什么,再看看绿色和红色是什么。回复tk57ml:我没有明白您问的啥意思~~~我使用的荧光显微镜用蓝光激发FITC标记的组织出现绿色,用绿光激发TRITC标记的组织出现红色。而我只用了FITC,没有用TRITC,却在绿光激发下看到了红色荧光,意思就是绿光激发FITC出现红色。查了下说的是拖尾效应,用共聚焦可以避免,可是实验条件如此,不知从实验方法上能否避免?
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chenyun2012 edited on
我没有明白您问的啥意思~~~我使用的荧光显微镜用蓝光激发FITC标记的组织出现绿色,用绿光激发TRITC标记的组织出现红色。而我只用了FITC,没有用TRITC,却在绿光激发下看到了红色荧光,意思就是绿光激发FITC出现红色。查了下说的是拖尾效应,用共聚焦可以避免,可是实验条件如此,不知从实验方法上能否避免?您明明明白了我的意思。理论上为啥不该出现的萤光却出现的原因之一夜被您自己找出来了。一抗的特异性有多好不好说,试一试降低背景看看吧。比如降低一抗浓度
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楼主,我也遇到了同样的问题,我还要做FITC和PE的双染,单用FITC就出现了红色荧光,那和PE出现的真正的红色荧光没法区分呀。楼主怎么解决这个问题的,求指教呀~非常感谢!
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春天的熊 楼主,我也遇到了同样的问题,我还要做FITC和PE的双染,单用FITC就出现了红色荧光,那和PE出现的真正的红色荧光没法区分呀。楼主怎么解决这个问题的,求指教呀~选择两个激发光波长相隔比较远的荧光二抗,可能就不会有这种问题吧
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丁香园版主
春天的熊 楼主,我也遇到了同样的问题,我还要做FITC和PE的双染,单用FITC就出现了红色荧光,那和PE出现 ...那么我想您至少得剪掉这个红色的背景!
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flower香 选择两个激发光波长相隔比较远的荧光二抗,可能就不会有这种问题吧谢谢!我觉得不是这个问题,因为FITC在蓝光所在波长激发是不会出现红色荧光的,是不是自发荧光之类的,刚开始做不太熟练
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杨阳hysno1 那么我想您至少得剪掉这个红色的背景!谢谢!我也想去掉,可是怎么去掉呀,按照楼上说的降低一抗浓度么?
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有图片吗?交流一下,我觉得是红细胞自发荧光,因为我现在也出现这种情况!
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春天的熊 杨阳hysno1 那么我想您至少得剪掉这个红色的背景!谢谢!我也想去掉,可是怎么去掉呀,按照楼上说的降低一抗浓度么?请问,您实验中是否试过降低一抗浓度?效果如何?二抗浓度用降低吗?
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