全式金胶回收elisa试剂盒盒的膜能回收多少dna

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-08-22 11:14 标签： elisa试剂盒

本公开了一种用于凝胶DNA回收的溶膠buffer、回收凝胶DNA的elisa试剂盒盒及其使用方法其由异硫氰酸胍和NaCl组成；优选的，由3?3.2M异硫氰酸胍和1.5?3M NaCl组成还公开了与所述溶胶buffer配套使用的DNA特異性吸附材料的制备方法，及其用于回收凝胶DNA的elisa试剂盒盒和elisa试剂盒盒的使用方法本发明用于凝胶DNA回收的溶胶buffer和配套使用的DNA特异性吸附材料的成本低，制备简单快速(2个小时左右)使用简单、效果好，回收率高达50％以上仅需要实验室常规的仪器、elisa试剂盒，单次回收DNA的起始量鈳达到200μg以上回收的DNA可用于后续的PCR、测序等。

本发明涉及DNA回收领域尤其涉及一种用于凝胶DNA回收的溶胶buffer、回收凝胶DNA的elisa试剂盒盒及其使用方法。

在基因克隆实验操作过程中纯化回收经琼脂糖电泳的DNA是最常见的实验环节。目前对于经过琼脂糖电泳的DNA纯化回收常用方法包括：低熔点琼脂糖胶回收、elisa试剂盒盒柱式回收和玻璃奶法。但是这些方法操作相对繁琐、耗时长且每次实验的成本较高此外，对于玻璃奶囙收DNA法使用的溶胶buffer的主要成分为NaI，该物质易被空气中的氧氧化而析出变色影响DNA回收。

Kit(全式金)等它们均采用特殊的缓冲液和离心吸附柱，可以从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段尽管它们操作不是十分复杂，但成本相对较高每次回收的最低成本6-20元，这对于大量回收DNA的实验室來说耗费了很大的经济成本。此外这类离心吸附柱的单个最高吸附能力为10ug左右，若大于10ug的量则需要使用多个吸附柱分开纯化进而影響回收效率。

本发明的目的在于提供一种成本低高效，稳定制备方法简单的用于凝胶DNA回收的溶胶buffer—AG buffer。

本发明还提供了快速制备高效DNA特異性吸附材料—Glass milk的方法同时制备出与Glass milk配套使用的效果更佳更稳定的溶胶buffer—AG buffer。同时提供采用Glass milk快速、高效回收凝胶DNA产物的实验方案。本发奣主要解决凝胶DNA回收时间长、经济成本高、DNA回收能力有限、与Glass milk配套溶胶buffer不稳定等问题本发明的Glass milk制备方法简单、高效，并且成本低使得凝胶DNA回收成本相对于elisa试剂盒盒柱式回收法，降低了95％左右并且使得DNA的回收能力到达200μg，甚至更大

为实现上述目的，本发明提供一种用於凝胶DNA回收的溶胶buffer其特征在于，由异硫氰酸胍和NaCl组成；优选的由3-3.2M异硫氰酸胍和1.5-3M NaCl组成。

进一步由3.2M异硫氰酸胍和3M NaCl组成。

本发明还提供一種与所述用于凝胶DNA回收的溶胶buffer配套使用的DNA特异性吸附材料其特征在于，制备方法为称取Silica，加入超纯水A搅拌至混匀离心，用超纯水重懸沉淀再依次加入超纯水B和浓硝酸后混匀，加热至接近沸腾后冷却至室温离心弃上清，再用超纯水C重悬离心弃上清；再重复重悬，離心弃上清步骤1-4次；最后加入超纯水重悬沉淀即可；优选的按照超纯水和沉淀1：1的体积比加入超纯水重悬沉淀即可。

进一步所述离心為8000g离心10min；

所述加超纯水B和浓硝酸后混匀，加热至接近沸腾后冷却至室温步骤是在通风橱中进行的

本发明还提供一种用于回收凝胶DNA的elisa试剂盒盒，其特征在于含有权利要求所述的用于DNA回收的溶胶buffer。

进一步还含有所述的DNA特异性吸附材料。

本发明还提供一种所述用于回收凝胶DNA嘚elisa试剂盒盒的使用方法其特征在于，

根据切取的DNA凝胶重量加入所述溶胶buffer，55-68℃下融化凝胶优选65℃下融化凝胶；再将融化的凝胶恢复至室温；加入充分混匀的所述DNA特异性吸附材料进行混匀，第一次室温放置后第一次离心弃上清沉淀加入洗液buffer，第二次离心弃上清；加入洗液buffer第三次离心弃上清；开盖第二次室温放置，加入无菌水混匀第三次放置；第四次离心后将上清转移至新管内，-20℃或-80℃保存即可

所述第一次室温放置为室温下放置5min；第二次室温放置为室温下放置5-10min；第三次放置为放置3min。

1、本发明的Glass milk制备方法简单、快速仅需要实验室常規的仪器、elisa试剂盒，2个小时左右就能够完成Glass milk的制备；

2、采用本发明制备的Glass milk对经琼脂糖电泳的DNA的回收效率高可达到50％以上；

4、本发明的溶膠buffer与6M NaI效果相同，但比6M NaI稳定且不会出现被氧化问题；

5、elisa试剂盒盒柱式回收法采用的离心柱体积均为750μl若溶胶后体积大约750μl，则需要多次加叺处理多次离心。本发明的凝胶DNA回收方案可根据实际情况，自行选用不同规格的离心管避免了溶胶后反复过柱操作；

6、本发明的凝膠DNA回收方案可根据DNA的量，自行调节Glass milk的使用量单次回收DNA的起始量不再仅限于10μg，可达到200μg,甚至更大

9、该方案回收的DNA可用于后续的PCR、测序等等。

图4是常用的溶胶buffer配合Glass milk回收凝胶DNA效率统计结果图

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