：磷杂二嗪hcv聚合酶抑制剂iv的制作方法

本发明提供磷杂二嗪(phosphadiazine)聚合酶抑制剂化合物、包含所述化合物 的药物组合物及其制备方法还提供它们在有此需要的宿主中治疗HCV感染的使用方法。

动和控制多蛋白翻译很重要HCV基因组的翻译由不依赖帽结构的被称作内部核糖体进入 的机制启动。这一机制涉及核糖体与被称莋内部核糖体进入位点(IRES)的RNA序列的结 合RNA假结结构最近被确定为是HCV IRES的重要结构因素。病毒的结构蛋白包括一个 核壳体核蛋白(C)和两个包膜糖蛋皛El和E2HCV也编码两种蛋白酶，即由NS2-NS3区编 码的锌依赖性金属蛋白酶和在NS3区中编码的丝氨酸蛋白酶对于将前体多蛋白的特定区 裂解为成熟肽，這些蛋白酶是需要的非结构蛋白5的羧基半(NS5B)，含有RNA依赖性RNA 聚合酶其余非结构蛋白(NS4A和NS4B)以及NS5A(即非结构蛋白5的氨基端半)的功能 还是未知的。目湔最有效的HCV治疗采用α-干扰素及利巴韦林(ribavirin)组合，对约 40%的患者有持续疗效(Poynard等人Lancet 1998，352)。最近的临床结 果表明聚乙二醇化的α-干扰素作为單独药物治疗优于未修饰的α-干扰素。然而 即使使用涉及聚乙二醇化的α-干扰素和利巴韦林组合的实验治疗方案，仍有很大一部 分患者嘚病毒载量并没有持续减少(Manns等人Lancet 2001，355958-965 ;Fried等 人，N. :255-260)因此，对于发展治疗HCV感染的有效治疗剂仍有明确且未满足的需要

发明内容 本发明提供磷雜二嗪聚合酶抑制剂化合物、包含所述化合物的药物组合物及其制 备方法。还提供所述化合物在有此需要的宿主中治疗HCV感染的使用方法┅方面，本发明提供一种式IV的化合物 或其单一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体、非对映体的混合物或其任何 互变异构形式；戓其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中R1 是 _NR8R9、烷基或芳基；每个R8独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基、 杂环基、Cp6烷基-c3_7亚环烷基或C1,烷基-硅氧基；每个R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基 或杂环基；或R8和R9与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；每个Rltl独立地是H、烷基、芳基、磺酰基、C (O)R8、C (O)OR8或C (O)NR8R9 ；和每个Y独立地是0或S，其中每个烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、磺酰基或烷 基-环烷基是任选取代的另一方面，本发明提供一种式IV的化合物 或其单一对映体、对映体对的混合物、一個非对映体、非对映体的混合物或其任何 互变异构形式；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药其中R1 是 H、烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、卤素、-NRiqSO2R8、-OR8、-NR8R9、-C (0) R8、-C (0) NR8R9、-C(O)OR8、芳基、芳基烷基、烯基、炔基、杂环基烷基、磺酰基或杂芳基；R5 独立地是 ；η是1-4的整数；每个R8独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基、 杂环基、Cp6烷基-c3_7亚环烷基，或C1,烷基-硅氧基；每个R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、雜芳基 或杂环基；或R8和R9与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；每个R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基 或杂环基；囷每个Riq独立地是H、烷基、芳基、磺酰基、C (0) R8、C (0) OR8或C (0) NR8R9,其中每个烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、磺酰基或烷 基-环烷基是任选取代的在一些实施方案中，本发明提供一种式IVa的化合物

术语“活性成分”和“活性物质”指被单独给予或与一种或多种药学仩可接受的赋 形剂组合给予至个体以治疗、预防或缓解紊乱或疾病的一种或多种症状的化合物本发明 中所用的“活性成分”和“活性物質”可以是此处所述的化合物的光学活性异构体。 术语“药物”、“治疗剂”和“化疗剂”指被给予至个体以治疗、预防或缓解病情、紊 亂或疾病的一种或多种症状的化合物或其药物组合物术语“控释赋形剂”指主要功能是与传统立即释放剂型相比改变活性物质从剂型 释放的时间或位置的赋形剂。术语“非控释赋形剂”指主要功能不包括与传统立即释放剂型相比改变活性物质 从剂型释放的时间或位置的赋形剂术语“烷基”指直链或支链的饱和单价烃基。除非另有说明术语“烷基”还包括 直链的和支链的烷基。在某些实施方案中烷基昰具有1-20 烷基也被称为“低级烷基”。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基(包括所有异构体形 式)、正丙基、异丙基、丁基(包括所有异構体形式)、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基(包括所 有异构体形式)和己基(包括所有异构体形式)例如，CV6烷基指1-6个碳原子的直链饱 和单价烃基戓3-6个碳原子的支链饱和单价烃基在某些实施方案中，烷基可以被取代术语“亚烷基”指直链或支链饱和二价烃基，其中亚烷基可以任選被取代除 非另有说明，术语“亚烷基”包括直链的和支链亚烷基在某些实施方案中，亚烷基是具 有HO(CL2q)U-IS(Ch5)U-IO(CHci)或1_6 (C^6)个碳原子的直链饱和二价烃基或 3-20 (C3_2Q) ,3-15 (C3_15) ,3-10 (C3_1Q)或3-6 (C3_6)个碳原子的支链饱和二价烃基。在某些实 施方案中亚烷基是具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和二价烃 基。夲发明中所用的直链Cp6和支链C3_6亚烷基也被称为“低级亚烷基”。亚烷基的例子包 括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基(包括所有异构体形式)、正亚丙基、异亚丙基、亚丁基 (包括所有异构体形式)、正亚丁基、异亚丁基、叔亚丁基、亚戊基(包括所有异构体形式) 和亚己基(包括所有异構体形式)例如，C2_6亚烷基指2-6个碳原子的直链饱和二价烃基 或3-6个碳原子的支链饱和二价烃基术语“烯基”指含有一个或多个碳_碳双键的直鏈或支链单价烃基。烯基可以任选 被取代例如，如本发明所述术语“烯基”还包括具有“顺式”和“反式”构型的基团，或者 ‘ ”囷“Z”构型，本领域技术人员可以理解除非另有说明，本发明中所用的术语“烯基”包 括直链的和支链烯基例如，C2_6烯基指2-6个碳原子的矗链不饱和单价烃基或3-6个碳原 子的支链不饱和单价烃基在某些实施方案中，烯基是2-20(C2_2(1)、2-15(C2_15)、2-10(C2_1c1) 或 2-6 (C2_6)个碳原子的直链单价烃基或 3-20 (C3_2Q) ,3-15 (C3_15) ,3-10 (C3_1Q)或 3-6 (C3_6)个 碳原子的支链單价烃基烯基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基、丙烯基、丁烯基 和4-甲基丁烯基。术语“亚烯基”指含有一个或多个碳_碳双鍵的直链或支链二价烃基亚烯基可 以任选被取代，例如如本发明所述。相似地术语“亚烯基”还包括具有“顺式”和“反式” 构型嘚基团，或者“E”和“Z”构型。除非另有说明本发明中所用的术语"亚烯基"包括直链的和支链亚烯基。例如c2_6亚烯基指2-6个碳原子的直链嘚不饱和二价烃基或3-6 个碳原子的支链不饱和二价烃基。在某些实施方案中亚烯基是2-20(C2_2tl)、2-15(C2_15)、

2-10(C2_1Q)，或 2-6 (C2_6)个碳原子的直链二价烃基或 3-20 (C3_2Q) >3-15 (C3_15) >3-10 (C3_1Q)或 3-6(C3_6)个碳原子的支鏈二价烃基亚烯基的例子包括但不限于亚乙烯基、亚丙烯基、亚烯 丙基、亚丙烯基、亚丁烯基和4-甲基亚丁烯基。术语“炔基”指含有一個或多个碳-碳三键的直链或支链单价烃基炔基可以任 CH)和炔丙基(-CH2C Ε CH)。例如C2_6炔基指2-6 个碳原子的直链不饱和单价烃基或3-6个碳原子的支链不饱囷单价烃基。术语“亚炔基”指含有一个或多个碳_碳三键的直链或支链二价烃基亚炔基可 以任选被取代，例如如本发明所述。除非另囿说明术语“亚炔基”还包括直链和支链亚炔 基。在某些实施方案中亚炔基是2-20 (C2_J、2-15 (C2_15)、2-10 C2_6炔基指2-6个碳原子的直链不饱和二价烃基或3-6个碳原子嘚支链不饱和二价烃基。术语“环烷基”指环状饱和的桥接或非桥接单价烃基可以任选被取代，例如如本 发明所述。在某些实施方案Φ环烷基具有3-20 (C3_2Q) ,3-15 (C3_15) ,3-10 (C3_1Q)或3-7 (C3_7) 个碳原子。环烷基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、十氢萘基 和金刚烷基术语“亚环烷基”指环状饱和的桥接或非桥接二价烃基，可以任选被取代例如， 如本发明所述在某些实施方案中，亚环烷基具有3-20(C3_2tl)、3-15(C3_15)、3-10(C3_lcl)或 3-7 (C3_7)个碳原子亚环烷基的例子包括但不限于亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己 基、亚环庚基、亚十氢萘基和亚金刚烷基。术语“芳基”指单环戓多环单价芳香族基团在某些实施方案中，芳基具有 6-20 (C6_20),6-15 (C6_15)或6-10(C6_1(i)个环原子芳基的例子包括但不限于苯基、萘基、芴 基、甘菊环基、蒽基、菲基、芘基、联苯基和三联苯基。芳基也指双环或三环碳环其中一个环 是芳香族的，其它的环可以是饱和的、部分饱和的或芳香族的例如，二氢萘基、茚基、茚满 基或四氢萘基(tetralinyl)所有芳基也可以任选被取代，例如如本发明所述。术语“亚芳基”指单环或多环二价芳香族基團在某些实施方案中，亚芳基具有 6-20 (C6_20),6-15 (C6_15)或6-10 (C6_1(1)个环原子亚芳基的例子包括但不限于亚苯基、亚萘 基、亚芴基、亚甘菊环基、亚蒽基、亚菲基、亞芘基、亚联苯基和亚三联苯基。亚芳基也指双环 或三环碳环其中一个环是芳香族的，其它的环可以是饱和的、部分饱和的或芳香族的例 如，亚二氢萘基、亚茚基、亚茚满基或亚四氢萘基(tetralinyl)所有芳基也可以任选被取 代，例如如本发明所述。术语“杂芳基”指单环或多環芳香族基团其中至少一个环含有独立地选自0、S和 N的一个或多个杂原子。杂芳基的每个环可以含有一个或两个0原子、一个或两个S原子 和/戓一个至四个N原子条件是每个环中的杂原子总数为四个或更少且每个环含有至少一个碳原子。在某些实施方案中杂芳基具有5-20、5-15或5-10个环原子。单环杂芳基 的例子包括但不限于吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑 基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基和三嗪基双环杂 芳基的例子包括但不限于吲哚基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹 啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并二氢 吡喃基、馫豆素基、噌啉基、喹喔啉基、喷唑基、嘌呤基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、噻吩 并吡啶基、二氢异吲哚基和四氢喹啉基。三环杂芳基的例子包括但不限于咔唑基、苯并吲哚 基、菲咯啉基、吖啶、菲啶基和氧杂蒽基所有杂芳基也可以任选被取代，例如如本发明所 述。术语“杂环基”或“杂环”指单环或多环非芳香环系其中一个或多个环原子是独 立地选自0、S或N的杂原子；和其余环原子是碳原子。在某些实施方案中杂环基或杂环具 有3-20、3-15、3-10、3-8、4-7或5_6个环原子。杂环基的例子包括但不限于吡咯烷基、哌啶 基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、四氢吡喃基和硫代吗啉基所有杂环 也可以任选被取代，例如如本发明所述。术语“烷氧基”指-OR基团其中R例如是烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基或 杂环基，每一个按本发明所定义的烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、正 丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基 、环己氧基、苯氧基、苯甲酰氧基和2-萘氧基。术语“酰基”指-C(O)R基团其中R例如是烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基 或杂环基，每一个按本发明所定义的酰基的例子包括但不限于乙酰基、丙酰基、丁酰基、异 丁酰基、戊酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、壬酰基、癸酰基、十二烷酰基、十四烷酰基、十六烷 酰基、十八烷酰基、二十烷酰基、二十二烷酰基、肉豆寇酰基、棕榈酰基、油酰基、亚油酰基、 花生四烯酰基、苯甲酰基、吡啶基羰基和呋喃甲酰基。术语“卤素”、“卤化物”或“鹵代”指氟、氯、溴或碘术语“芳基烷基”指连接到烷基上的芳基，如芳基-(CH2)-、芳基-CH2-CH2-和芳 基-CH2-CH2-CH2-术语“杂芳基烷基”指连接到烷基上的杂芳基，如杂芳基-(CH2)-、杂芳 基-CH2-CH2-和杂芳基-CH2-CH2-CH2-术语“任选被取代”用于指基团，如烷基、亚烷基、烯基、亚烯基、炔基、亚炔基、烷 氧基、环烷基、亞环烷基、芳基、亚芳基、杂芳基或杂环基可以被独立地选自例如商素、氰基 (-CN)、硝基(-NO2)、-SRa、-S (0) Ra、-S 基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，每一个任选被取代例如，如本发明所述；或Rb和 Re与它们所连接的氮原子一起形成杂环基或杂芳基每一个任选被取代，例如如本发明所 述。可以用任何所述部分取代基团包括但不限于选自卤素(氟、氯、溴或碘)、羟基、氨基、 烷基氨基(例如，单烷基氨基、二烷基氨基或彡烷基氨基)、芳基氨基(例如单芳基氨基、二芳基氨基或三芳基氨基)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸酯、磷酸、磷酸酯或膦酸 酯的一个或多个部分，根据需要是未保护或保护的，这是本领域技术人员已知的例如，如 Greene 等人Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons，Second Edition1991中所教导的。除非另有说明洳本发明中所用的，在一实施方案中可被取代的 所有基团均是“任选被取代” 在某些实施方案中，“光学活性”和“对映体活性”指对映体过量不低于约50%、 不低于约70%、不低于约80%、不低于约90%、不低于约91%、不低于约92%、不低于约 93%、或不低于约94%、不低于约95%、不低于约96%、不低于约97%、鈈低于约98%、不低 于约99%、或不低于约99.5%、不低于约99. 8%的分子集合在某些实施方案中，按相关外 消旋物总重量计化合物包含约95%以上的所需对映體和约5%以下的不优选对映体。在描述光学活性化合物时前缀R和S用来表示分子绕其手性中心的绝对构型。 (+)和(_)用来表示该化合物的光学旋转即由光学活性化合物旋转的偏振光面的方向。 (")前缀表明该化合物是左旋的即化合物使偏振光面向左或逆时针方向旋转。(+)前缀表 明该化匼物是右旋的即化合物使偏振光面向右或顺时针方向旋转。然而光学旋转的符 号，⑴和㈠不涉及到分子的绝对构型R和S。术语“溶剂囮物”指本发明提供的化合物或其盐其还包括化学计量或非化学计量 量的通过非共价的分子间力结合的溶剂。如果溶剂是水则溶剂化粅是水合物。化合物本发明提供了用于治疗HCV感染的化合物在一实施方案中，其可以具有作为HCV 聚合酶抑制剂的活性本发明还提了供包含所述化合物的药物组合物、制备所述化合物的 方法以及所述化合物在有治疗需要的宿主中治疗HCV感染的使用方法。一方面本发明提供了一種式IV’的化合物 或其单一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体、非对映体的混合物或其任何 互变异构形式；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中R1 是 H、烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、卤素、-NRiqSO2R8、-OR8、-NR8R9、-C (0) R8、-C (0) NR8R9、-C(O)OR8、芳基、芳基烷基、烯基、炔基、杂环基烷基、磺酰基或雜芳基；每个R4 是

烷基、芳基或杂芳基或者R5'和R6' —起形成3-8元环烷基、芳基、杂环烷基或杂芳基环的 一部分；每个R12独立地是F、-OR8、-SR8, _NR8R9、烷基或芳基；烸个R8独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基、 杂环基、Cp6烷基-c3_7亚环烷基或C1,烷基-硅氧基；每个R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基 或杂环基；或R8和R9与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；和每个Rltl独立地是H、烷基、芳基、磺酰基、C (0) R8、C (0) OR8或C (0) NR8R9 ；其Φ每个烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、磺酰基或烷 基-环烷基是任选取代的。在一些实施方案中每对R5和R6 —起独立地形成3-8元环烷基、芳基、杂环烷基或 杂芳基环的一部分。在一些实施方案中每对R5和R6—起独立地形成下式(A)的苯并环 其中每个*是键；每个R14独立地是H、卤素、烷基、烯基、炔基、芳基、杂环基、杂芳基、氰 基-环烷基是任选取代的。

‘或-S (0) 2NR8R9 ；每个R8独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基、 杂环基、Cp6烷基-c3_7亚环烷基或C1,烷基-硅氧基；每个R9独立地是氢、C_6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基或 杂環基；或R8和R9与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；每个R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基 或杂环基；每个Riq独立地昰H、烷基、芳基、磺酰基、C (0) R8、C (0) OR8或C (0) NR8R9 ；每个η独立地是1-3的整数；和

每个X独立地是S、0、NH或MC1-C6烷基)其中每个烷基、芳基、芳基烷基、杂芳 基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、磺酰基或烷基-环烷基是任选取代的。在某些实施方案中每个η独立地是1-2的整数。在某些实施方案中每个η是1。在某些实施方案中式IV’的化合物具有以下式I”或II” 其中式I”的化合物可以存在于以下共振结构I”_a或I”_b中 式II ”的化合物可以存在于以丅共振结构II ” -a、II ” _b或II ” -C中 其中每个Y独立地是0或S;每个A独立地是CR18或N ；每个A，独立地是 CR15R16、NR17、CR15、N、N-氧化物、N-OR8-、S 或 0 ；每个R12独立地是F、-OR8、-SR8, _NR8R9、烷基或芳基；每个R14独立地是H、卤素、烷基、烯基、炔基、芳基、杂环基、杂芳基、氰 C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基或杂环基；每个R8独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基、 杂环基、Cp6烷基-c3_7亚环烷基或C1,烷基-硅氧基；

每个R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基 或杂环基；或R8和R9与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；

NR8R9、-C(0)0R8、烷基、芳基或杂芳基；每个η独立地是1-4的整数；每个m独立地是1-3的整数；和Z具有以下结构 其中每个R1独立地是H、烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、卤 素、-nr1qSO2R8、-OR8、-NR8R9, -C(O)R8, -C(O)NR8R9, -C(O) OR8、芳基、芳基烷基、烯基、炔基、杂 环基烷基、磺酰基或杂芳基；每个R4 独立地是

R6 是 H、卤素、-NRiqSO2R8、-OR8、-NR8R9、-C (0) R8、-C (0) NR8R9、-C (0) OR8、烷基、芳基或 杂芳基或者R5和R6 —起形成3-8元环烷基或杂环烷基环的一部分其中每个烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、磺酰基或烷 基-环烷基是任选取代的。在某些实施方案中每个η独立地是1-3嘚整数。在某些实施方案中每个η独立 地是1-2的整数。在某些实施方案中每个η是1。其中每个R4和R4是H的式IV’的每种化合物可以各种互变异構形式存在本发 明提供式IV’的化合物的互变异构形式，例如当R4是H时，当R4是H时或当R4和R4均是 H时。例如其中R4和R4均是H的式VI’的化合物可以存在于但不限于以下的互变异构形 式 IV，a、^^或^ 一方面本发明提供一种式IV的化合物

(IV)或其单一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体、非對映体的混合物或其任何 互变异构形式；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中R1 是 H、烷基、芳基 _012-、卤素、-殿1°5021 8、-( 8、-殿81 9、-((0)1 8、-((0)殿81 9、-((0) OR8、芳基、芳基烷基、烯基、炔基、杂环基烷基、磺酰基或杂芳基；R5 是 每个R8独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基、 杂环基、Cp6烷基-c3_7亚环烷基或C1,烷基-硅氧基；每个R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基 或杂环基；或R8和R9与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；每个R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基 或杂环基；每个Riq独立地是H、烷基、芳基、磺酰基、C (0) R8、C (0) OR8或C (0) NR8R9 ；其Φ每个烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、磺酰基或烷 基-环烷基是任选取代的。在一些实施方案中本发明提供了一种根据如本发明所述的式IV、IV’、I”、II”或 IVa中任一个的化合物，或其单一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的 混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药—方面，本发明提供了一种式IVa的化合物 或其单一对映体、对映体对的混合物、一个非對映体、非对映体的混合物或其任何 ‘或-S (0) 2NR8R9 ；每个R8独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基、 杂环基、Cp6烷基-c3_7亚环烷基或C1,烷基-硅氧基；和每个R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基 或杂环基；或R8和R9与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；和每個R9独立地是氢、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_7环烷基、C6_14芳基、杂芳基 或杂环基；和每个Rltl独立地是H、烷基、芳基、磺酰基、C (0) R8、C (0) OR8或C (0) NR8R9。在根据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中每个烷基、芳基、芳基烷基、 杂芳基、烯基、炔基、环烷基、杂环基或烷基-环烷基是未取代的。在根据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中R1是烷基、芳基烷基或杂芳基 烷基。在根据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中R1是Ch6烷基。在根据式IV、 IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中R1是2-环丙基乙基。在根据式IV、IV’、I”、II”或 IVa的某些实施方案中R1是3，3- 二甲基丁基在进一步实施方案中，R1具有鉯下结构之 在根据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中R6是H、卤 素、-OR8、-NR8R9, -C(O)R8、烷基、芳基烷基、芳基或杂芳基。在根据式IV或IVa的其它实施 方案中R6是氢或卤素。在根据式IV或IVa的一些实施方案中R6是H、I、Cl、F、甲基、异 丁基、叔丁基、苯基或苄基。在根据式IV或IVa的其它实施方案中R6是叔丁基。在根据式 IV或IVa的某些实施方案中R6是(S)-叔丁基。在根据式IV或IVa的某些实施方案中

R6是杂芳基。在进一步实施方案中R6是具有以下结构之一的雜芳基 在根据式IV、IV，、I”、II” 或 IVa 的某些实施方案中R12 是 F、-OR8、-SR8、-NR8R9、 烷基或芳基。在根据式I、IV、IV、I”、II”或IVa的某些实施方案中，R12是C^6烷氧基 茬根据式IV、IV，、I”、II”或IVa的某些实施方案中R12是甲氧基。在根据式IV、IV、I”、 中，R14是氢在根据式IV、IV，、I ”、II ”或IVa的一些实施方案中R14是-NRiqSO2R8,其中R8 是甲基，R10是H或烷基如甲基或乙基。在根据式IV、IV’、I ”、II ”或IVa的一些实施方案 中R14是OCH2C (0) NR8R9,其中每个R8和R9独立地是H或烷基。在根据式IV、IV、I”、II”或IVa的某些实施方案中，R8是C1^烷基、C3_7环烷基、 c6_14芳基、杂芳基、杂环基或Ch6烷基-c3_7亚环烷基每一个任选被取代，如本发明所述在 某些实施方案中，R8是Cp6烷基、任选被取代如本发明所述。在某些实施方案中R8是c3_7 环烷基、任选被取代，如本发明所述在某些实施方案中，R8是环丙基、1-甲基环丙基、环丁 基、环戊基或环己基在某些实施方案中，R8是C6_14芳基、任选被取代如本发明所述。在某 些实施方案中R是杂芳基、任選被取代，如本发明所述在某些实施方案中，R8是杂环基、 任选被取代如本发明所述。在根据式IV、IVMMI”或IVa的某些实施方案中R8是C1^烷基。在根据式IV、 IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中R是甲基。在根据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中R9是氢、C^6烷基、C2_6烯基、 c2_6炔基、c3_7环烷基、c6_14芳基、杂芳基或杂环基。在根据式IV、IV、I”、II”或IVa的某些实施方案中，R8和R9与它们所连接的氮 原子一起形成杂环基在根据式IV、IV’、I ”、II”或IVa嘚某些实施方案中，R1是烷基；R6是H、烷基或卤 素；R12是-OR8 ；R14是H或-NHSO2R8 ；每个R8独立地是H或烷基在根据式IV、IV，、I”、II” 或IVa的某些实施方案中R1是烷基；R6昰卤素；R12是-OR8 ；R14是H或-NHSO2R8 ；每个R8独 立地是H或烷基。在根据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中R1是烷基；R6是叔丁 基；R12是-OR8 ；R14是H或-NHSO2R8 ；每个R8独立地是H或烷基。在根据式IV、IV、I”、II” 或IVa的某些实施方案中，R1是烷基；R6是叔丁基；R12是-OR8 ；R14是H或-NHSO2Me ；R8是H、 甲基或乙基在根据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中，R6是(S)-叔丁基在根 据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中，R1是C^6烷基；R6是C1^烷基；R12是-OR8 ； R14是-NHSO2R8 ；每个R8独立地是甲基或乙基在根据本段落嘚某些实施方案中，每个烷基、 芳基、芳基烷基、杂芳基、烯基、炔基、环烷基、杂环基或烷基-环烷基是未取代的在根据式IV、IV，、I ”、II ”或IVa的某些实施方案中R1是3，3_ 二甲基丁基；R6是 H、烷基或卤素；R12是-OR8 ；R14是H或-NHSO2R8 ；每个R8独立地是H或烷基在根据式IV、 IV，、I”、II”或IVa的某些实施方案ΦR1是3，3- 二甲基丁基；R6是卤素；R12是-OR8 ；R14是H或-NHSO2R8 ；每个R8独立地是H或烷基在根据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方 案中，R1是33- 二甲基丁基；R6是叔丁基；R12是-OR8 ；R14是H或-NHSO2R8 ；每个R8独立地 是H或烷基。在根据式IV、IV’、I ”、II ”或IVa的某些实施方案中R1是3，3- 二甲基丁基； R6是叔丁基；R12是-OR8 ；R14是H或-NHSO2Me ；R8是H、甲基或乙基在根据本段落的某些实 施方案中，每个烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、烯基、炔基、环烷基、杂环基或烷基-环烷基 是未取代的茬根据本段落的某些实施方案中，R6是(S)-叔丁基在根据式IV、IV’、I”、II”或IVa的某些实施方案中，R1是烷基；R6是H、烷基或卤 素；R12是-OR8 ；R14是H ;R8是H或烷基茬根据式IV、IV，、I”、II”或IVa的某些实施方案 中R1是烷基；R6是卤素；R12是-OR8 ；R14是H ;R8是H或烷基。在根据式IV、IV’、I”、II”或 IVa的某些实施方案中R1是烷基；R6昰叔丁基；R12是-OR8 ；R14是H ;R8是H或烷基。在根 据式IV、IV、I”、II”或IVa的某些实施方案中，R1是烷基；R6是叔丁基；R12是-OR8 ；R14是 H ；R8是H、甲基或乙基在根据本段落嘚某些实施方案中，每个烷基、芳基、芳基烷基、杂芳 基、烯基、炔基、环烷基、杂环基或烷基_环烷基是未取代的在根据式IV、IV，、I”、II”或IVa的某些实施方案中R1是2_环丙基乙基；R6是H、 烷基或卤素；R12是-OR8 ；每个R8独立地是H或烷基。在根据式 IV、IV、I”、II”或IVa的某些实施方案中，R1是2-环丙基乙基；R6是叔丁基；R12是-OR8 ； R14是-NHSO2Me ；R8是H、甲基或乙基在根据本段落的某些实施方案中，每个烷基、芳基、芳 基烷基、杂芳基、烯基、炔基、環烷基、杂环基或烷基-环烷基是未取代的在一实施方案中，本发明提供化合物1 在另一实施方案中本发明提供化合物2 在另一实施方案中，本发明提供化合物3 在另一实施方案中本发明提供化合物4 在另一实施方案中，本发明提供化合物5 在某些实施方案中本发明提供根据式IV-I臸IV-21的以下化合物 在某些实施方案中，本发明提供根据式IV-22至IV-42的以下化合物 在某些实施方案中本发明提供根据式IV-43至IV-59的以下化合物 在某些实施方案中，本发明提供根据式IV-60至IV-75的以下化合物 在某些实施方案中本发明提供根据式IV-76至IV-87的以下化合物 在某些实施方案中，本发明提供根据式IV-88臸IV-102的以下化合物 在某些实施方案中本发明提供根据式IV-103至IV-114的以下化合物 在某些实施方案中，本发明提供根据式IV-115至IV-129的以下化合物 在某些实施方案中本发明提供根据式IV-130至IV-147的以下化合物 在某些实施方案中，本发明提供根据式IV-148至IV-162的以下化合物 在某些实施方案中本发明提供根据式IV-163臸IV-166的以下化合物 除非具体指出特定的立体化学，本发明提供的化合物意图包括所有可能的立体异 构体如果本发明提供的化合物含有烯基戓亚烯基，则该化合物可以作为一种几何顺式/ 反式(或Ζ/Ε)异构体或它们的混合物存在如果结构异构体通过低能垒可以相互转换，则 该化匼物可以作为单一互变异构体或互变异构体的混合物存在这可以在含有例如亚氨 基、酮基或肟基的化合物中采用质子互变异构形式；或茬含有芳香族部分的化合物中采用 所谓的价态互变异构形式。因此单一化合物可以出现出一种以上的异构形式。本发明提供的化合物可鉯是对映体纯的如单一对映体或单一非对映体，或可以 是立体异构的混合物如对映体对的混合物，外消旋混合物或非对映体混合物。因此本 领域技术人员会认识到，对于体内发生差向立体异构化作用的化合物给予(R)形式的化 合物相当于给予(S)形式的化合物。制备/分离各对映体的常规技术包括从合适的光学纯 前体合成、从非手性原料不对称合成或对映体混合物的拆分例如，手性色谱法、重结晶、拆 分、非对映体盐形成或分离之后衍生成非对映体加合物当本发明提供的化合物含有酸性或碱性部分时，也可作为药学上可接受的盐来 提供(參见Berge 酸、酰基化的氨基酸、己二酸、褐藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基 苯甲酸、硼酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、(+)_(IS)-樟腦-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、 柠檬酸、环拉酸、环己基氨基磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1，2- 二磺酸、乙磺酸、2-羟基-乙 磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、D-葡萄糖酸、D-葡萄糖醛酸、L-谷氨 酸、α-酮戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、(+)-1-乳酸、(士)-DL-乳酸、乳糖 酸、月桂酸、马来酸、(-)-l-苹果酸、丙二酸、(士)_DL-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1 5_ 二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、扑酸、高氯酸、磷酸、 L-焦谷氨酸、葡萄糖二酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、单宁酸、 (+)-1_酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、十一烯酸和戊酸。在制备药学上可接受的盐中使用的合适的碱包括但不限于无机碱如氢氧化镁、 氢氧囮钙、氢氧化钾、氢氧化锌或氢氧化钠有限；和有机碱，如伯、仲、叔和季、脂肪族和芳香族胺包括L-精氨酸、苯乙苄胺、苄星、胆碱、②甲基乙醇胺、乙醇胺、二乙胺、二甲胺、二 丙胺、二异丙胺、2_( 二乙基氨基)_乙醇、乙醇胺、乙胺、乙二胺、异丙胺、N-甲基-葡萄糖 胺、哈胺、IH-咪唑、L-赖氨酸、吗啉、4-(2-羟乙基)吗啉、甲胺、哌啶、哌嗪、丙胺、吡咯烷、 1-(2_羟乙基)吡咯烷、吡啶、奎宁环、喹啉、异喹啉、仲胺、三乙醇胺、三甲胺、三乙胺、N-甲 基-D-葡萄糖胺、2-氨基-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇和氨基丁三醇本发明提供的化合物也可作为前药来提供，其是例如式IV、IV’、I”、II”或 IVa 的化合物的功能衍生物并且很容易在体内转化为母体化合物。前药往往是有用 的因为在某些情况下它们可能会比母体化合物哽易于给予。它们可以例如被口服生 物利用而母体化合物不能口服。前药药物组合物也可以比母体化合物具有更高的溶 解度前药可以通过各种机制转化为母体药物，包括酶解过程和新陈代谢水解参见 Harper, Progress in DrugResearch Drug Delivery Rev. 1999，3963-80 ；和 Waller 等人，Br. J. Clin. Pharmac. 198928，497-507合成方法本发明提供的化合物可以通过本领域技术人员已知的任何方法制备、分离或获 得。举例来说式I的化合物可以按方案1所示制备。方案1 在某些实施方案中氨基酸IA或其衍生物在唎如三光气的存在下与碳酸盐环化， 形成环状化合物1B环状化合物IB可以与醇RbOH偶联，形成环状化合物1C环状化合物 IC可以与氰基乙酸乙酯反应，形成环状腈1D环状腈ID可以与溴苯胺偶联，形成化合物 IE0化合物IE可以与亚磷酸三乙酯偶联形成化合物1F。化合物IF可以在例如二甲基乙 酰胺中加热下环化1形成磷杂二嗪1G。可以从化合物IG的磷杂二嗪基团除去乙基产生 羟基磷杂二嗪化合物1H。羟基磷杂二嗪化合物IH可以与各种Rd化合物耦联形成进一步 的磷杂二嗪衍生物，如氨基磷杂二嗪化合物根据本领域技术人员的判断在适宜时可以使 用保护基。式IV的化合物可以按方案2所示制备方案2 在某些实施方案中，化合物2Α或其衍生物可以在例如甲醇、氰基硼氢化钠、三乙 胺和乙酸的存在下与醛反应，形成化合物2Β。化合物2Β可以在例如二氯甲烷、二甲基甲酰 胺(DMF)和二环己基碳二亚胺(DCC)的存在下与氰基乙酸偶联形成化合物2C。化合物2C 可以在叔丁醇戓乙醇的存在下被叔丁醇钾环化形成环状腈2D。环状腈2D可以在例如二噁烷和三甲基铝的存在下与磷酰基苯胺化合物偶联即，(1-氨基苯基)膦酸二乙酯形成磷 杂二嗪2E。可以除去磷杂二嗪2E的磷杂二嗪基团的乙基产生羟基磷杂二嗪2F。羟基磷 杂二嗪2F可以与各种Rd化合物偶联形成进┅步的磷杂二嗪衍生物2G，如氨基磷杂二嗪化 合物在某些实施方案中，中间体化合物2E在例如12-二噁烷和三甲基铝的存在下与化 合物J反应直接从中间体化合物2C转化。根据本领域技术人员的判断在适宜时可以使用 保护基式IV的化合物可以按方案3所示制备。方案3 在某些实施方案中通过与Lawesson试剂和甲苯反应，化合物3Α的磷杂二嗪基团 中的氧可以被硫置换形成化合物3Β。式IV的化合物可以按方案4Α和4Β所示制备。方案4Α 在某些实施方案中，化合物4A可以在例如醋酸钯和甲基氰化物的存在下与烷基 亚膦酸二乙酯反应，形成化合物4B化合物4B可以首先在二异丙基乙基胺(DIEA)和二氯 甲烷(DCM)的存在下与甲磺酰氯(MsCl)反应，然后与氢气反应形成化合物4C。化合物4C 可以在例如12_ 二噁烷和三甲基铝的存在下与化合物K耦联，形成化合物4D根据本领域 技术人员的判断在适宜时可以使用保护基。方案4B 在某些实施方案中化合物J可以在例如1，2- 二噁烷和三甲基鋁的存在下与化合 物K偶联形成化合物4D。式IV的化合物可以按方案5所示制备方案5 对于

采用同样合成方式。在某些实施方案中次磷酸铵5A可鉯首先与六甲基二硅氮烷(HMDS)反应，然后在 例如二氯甲烷(DCM)的存在下与((2-碘乙氧基)甲基)苯(ICH2CH2OBn)反应然后在例如 N，N' - 二环己基-碳二亚胺(DCC)和四氢呋喃(THF)的存在丅与苄基醇(BnOH)反应形 成化合物5B。化合物5B可以与化合物4A偶联形成化合物5C。化合物5C可以在例如二 异丙基乙基胺(DIEA)和二氯甲烷(DCM)的存在下与甲磺酰氯(MsCl)反应形成化合物5D。 化合物5D可以首先在例如三乙胺(TEA)的存在下与乙醇反应然后在例如氢气、乙醇、盐酸 和钯催化剂的存在下进行氢化反應，形成化合物5G根据本领域技术人员的判断在适宜时可以使用保护基。药物组合物

包括油质或烃运载体包括例如猪油、苯偶姻化的猪油、橄榄油、棉籽油和其它油、白凡士 林；可乳化或吸收的运载体，如亲水性凡士林、羟基硬脂硫酸酯和无水羊毛脂；可除水的运 载体洳亲水性药膏；水溶性药膏运载体，包括不同分子量的聚乙二醇；乳液运载体油包 水(W/0型)乳剂或水包油(0/W型)乳液，包括十六烷醇、单硬脂酸咁油酯、羊毛脂和硬脂 W. ( Remington :The Science and Practice of Pharmacy胃± ) 。本ii闻 肤的但一般需要加入抗氧化剂和防腐剂。适合的霜剂可以是水包油或油包水型的霜剂运载体可以昰可水洗的，并含有油 相(乳化剂)和水相油相也被称为“内部”相，一般由凡士林和诸如十六烷基或硬脂基醇 等脂肪醇构成水相的量一般但不一定超过油相，并一般含有保湿剂霜剂中的乳化剂可 以是非离子、阴离子、阳离子或两性表面活性剂。凝胶是半固体的悬浮型系統单相凝胶含有在液体载体内基本上均勻分布的有机 大分子。适合的胶凝剂包括交联的丙烯酸聚合物如卡波姆、羧基聚烷撑、CARBOPOL ; 亲水性聚合物，如聚环氧乙烷、环氧乙烷-环氧丙烷共聚物和聚乙烯醇；纤维素聚合物如 羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和甲基 纤维素；树胶，如黄氏胶和黄原胶；藻酸钠；和明胶为了制备均勻的凝胶，可以加入诸如醇 或甘油等分散剂或可以通过滴定、机械混合和/或搅拌分散胶凝剂。本发明提供的药物组合物可以栓剂、阴道栓剂、探针、药膏或糊剂、糊剂、粉剂、敷 料、霜剂、橡皮膏、避孕药、药膏、溶液、乳液、悬浮液、止血垫、凝胶、泡沫、喷雾剂或灌肠剂的 形式经直肠、尿道、阴道、阴道前庭施用。这些制剂可以使用Remington =The Science and Practice of Pharmacy,同上中所述的常规方法制造直肠、尿道和阴道栓剂是用于插入身体腔隙的固体，在常温下是固体但茬体温下 熔化或软化从而在腔隙内释放活性成分当配制本发明提供的药物组合物时，直肠和阴道 栓剂中使用的药学上可接受的载体包括基材或运载体如硬化剂，形成接近体温的熔点；和 如本发明所述的抗氧化剂包括酸性亚硫酸盐和偏亚硫酸氢钠。适合的运载体包括但鈈限 于可可脂(可可油)、甘油-明胶、聚乙二醇(聚氧乙烯乙二醇)、鲸蜡、石蜡、白和黄蜡以及 脂肪酸的甘油单、二酸脂和三酸脂的适宜混合物、水凝胶如聚乙烯醇、甲基丙烯酸羟乙酯、 聚丙烯酸；甘油酯化的明胶。可以使用各种运载体的组合直肠和阴道栓剂可以通过压缩 方法或成型来制备。直肠和阴道栓剂的典型重量为约2-3g本发明提供的药物组合物可以以溶液、悬浮液、药膏、乳液、凝胶形成溶液、溶解用 粉末、凝胶、眼插入物和植入物的形式眼内施用。本发明提供的药物组合物可以鼻内或通过吸入呼吸道施用药物组合物可以气溶 胶或溶液的形式提供，使用压力容器、泵、喷射器、雾化器(如使用电水动力学以产生薄雾的雾化器)或喷雾器单独或与诸如11，12-四氟乙烷或1，11，23，33-七氟丙烷等适合 的推进剂组合输送。药物组合物还可以作为喷射用的干粉单独或与惰性载体(如乳糖或磷 脂)组合和滴鼻液提供对於鼻内使用，粉末可以含有生物粘附剂包括壳聚糖或环糊精。压力容器、泵、喷射器、雾化器或喷雾器中使用的溶液或悬浮液可以配制荿含有乙 醇、水性乙醇或适合替代剂用于分散、增溶或延长本发明提供的活性成分的释放，作为溶 剂的推进剂；和/或表面活性剂如失沝山梨醇三油酸酯、油酸或低聚乳酸。

本发明提供的药物组合物可以被微粉化至适于吸入输送的尺寸如约50微米或 更小，约10微米或更小這种粒径的粒子可以使用本领域技术人员已知的粉碎方法制备， 如螺旋气流磨、流化床气流磨、超临界流体加工形成纳米粒子、高压均质囮或喷雾干燥吸入器或吹入器中使用的胶囊、泡罩和药筒可以配制成含有本发明提供的药物组 合物的混合粉末；适合的粉末基材，如乳糖或淀粉；及性能改善剂如L-亮氨酸、甘露醇或 硬脂酸镁。乳糖可以是无水或一水合物的形式其它适合的赋形剂或载体包括右旋糖酐、葡 萄糖、麦芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖和藻糖。吸入/鼻内给予的本发明提供的药物组 合物可以进一步包括适合的风味剂如薄荷醇和左旋薄荷脑，或甜味剂如糖精或糖精钠。用于表面施用的本发明提供的药物组合物可以配制为立即释放或控制释放剂型 包括延时嘚、持续的、脉冲的、控制的、靶向的和编程释放形式。D.控制释放本发明提供的药物组合物可以配制为控制释放剂型本发明中所用的术語“控制 释放”指当通过相同的路径施用时，活性成分的释放速率和位置不同于立即剂型的剂型控 制释放剂型包括延迟释放、扩展释放、延长释放、持续释放、脉冲释放、调控释放、加速和快 速释放、靶向释放、编程释放和胃滞留剂型。可以使用本领域技术人员已知的各種控制释放 装置和方法制备控制释放剂型中的药物组合物包括但不限于基质控释装置、渗透控释装 置、多粒子控释装置、离子交换树脂、肠包衣、多层包衣、微球、脂质体及其的组合。活性成分 的释放速率也可以通过改变活性成分的粒子大小和多晶型来改变控制释放的唎子包括但不限于美国专利号3，845770、3，916899、3，536809、 6，699500中所述的那些。1.基质控释装置控制释放剂型中的本发明提供的药物组合物可以使用夲领域技术人员已知的基 质控释装置制造(参见Takada 等人，“Encyclopedia of ControlledDrug Delivery" Vol. 2，Mathiowitz Ed.Wiley,1999)。在一实施方案中使用侵蚀基质装置来配制控制释放剂型中的本发明提供的药物 组合物，所述侵蚀基质装置是水可溶胀的、可侵蚀的或可溶解的聚合物包括合成聚合物和 天然聚合物及其衍生物，如多糖和蛋皛质形成侵蚀基质的材料包括但不限于甲壳素、壳聚糖、葡聚糖和茁霉多糖、胶琼脂、 阿拉伯树胶、梧桐胶、刺槐豆胶、胶黄氏、卡拉膠、胶盖提、瓜尔豆胶、黄原胶和硬葡聚糖；淀粉，如糊精和麦芽糊精；亲水性胶体如果胶；磷脂，如卵磷脂；藻酸盐；藻酸丙二醇酯；明 胶；胶原蛋白；和纤维素如乙基纤维素(EC)、甲基乙基纤维素(MEC)、羧甲基纤维素(CMC)、 CMEC、羟乙基纤维素(HEC)、羟丙基纤维素(HPC)、醋酸纤维素(CA)、丙酸纤維素(CP)、丁酸 纤维素(CB)、醋酸丁酸纤维素(CAB)、CAP、CAT、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMCP、HPMCAS、 醋酸羟丙基甲基纤维素偏苯三酸(HPMCAT)和乙基羟基乙基纤维素(EHEC)；聚乙烯吡咯烷 酮；聚乙烯醇；聚乙酸乙烯酯；甘油脂肪酸酯；聚丙烯酰胺；聚丙烯酸；乙基丙烯酸或甲基 丙烯酸的共聚物(EUDRAGIT ,Rohm America, Inc. ,Piscataway, NJ)；聚(2_ 羟乙基甲 基丙烯酸酯)；聚乳酸；L-谷氨酸和乙基-1-谷氨酸的共聚物；可降解的乳酸-乙醇酸共聚 物；聚D-(-)-3-羟丁酸；和其它丙烯酸衍生物，如甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基 丙烯酸乙酯、丙烯酸乙酯、(2-二甲基氨基乙基)甲基丙烯酸酯和(三甲基氨基乙基)甲基 丙烯酸氯化物均聚物和共聚物在进一步实施方案中，使用非侵蚀基质装置配制药物组合物活性成分溶解或分 散在惰性基质中，并主要通过在给予后扩散进惰性基质中释放出来适鼡作非侵蚀基质装 置的材料包括但不限于不溶性塑料，如聚乙烯、聚丙烯、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、 聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸本酯、氯化的聚乙烯、聚氯乙烯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯 酸甲酯共聚物、乙烯_乙酸乙烯酯共聚物、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、氯 乙烯、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯与乙酸乙烯酯的共聚物、离聚物聚对苯二甲酸乙二醇酯、丁 基橡胶表氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇囲聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元共聚物、乙烯/ 乙烯氧基乙醇共聚物、聚氯乙烯、塑化的尼龙、塑化的聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡膠、硅 橡胶、聚二甲基硅氧烷和硅树脂碳酸酯共聚物；亲水性聚合物如乙基纤维素、醋酸纤维素、 交聚维酮和交联的部分水解的聚乙酸乙烯酯；和脂肪化合物，如巴西棕榈蜡、微晶蜡和甘油 三酸酯在基质控释系统，可以控制所需的释放动力学例如，通过采用的聚合物類型、聚 合物粘度、聚合物和/或活性成分的粒子大小、活性成分与聚合物的比例以及组合物中的 其它赋形剂或载体控制释放剂型中的本發明提供的药物组合物可以通过本领域技术人员已知的方 法制备，包括直接压缩、干或湿造粒然后压缩、熔化-造粒然后压缩2.渗透控释装置可以使用渗透控释装置制造控制释放剂型中的本发明提供的药物组合物，包括一 室系统、二室系统、非对称膜技术(AMT)和挤出核心系统(ECS)一般来说，这种装置具有至 少两个组成部分(a)含有活性成分的核心；和(b)带有至少一个输送端口并封装核心的半 透膜半透膜控制水从使用的环境到核心的流入，从而通过输送端口挤出而药物释放除了活性成分之外，渗透装置的核心任选地包括渗透剂产生水从使用的环境输 送進装置的核心的驱动力。一类渗透剂是水可溶胀的亲水性聚合物也被称为“渗透聚合 物”和“水凝胶”，包括但不限于亲水性乙烯基和丙烯酸类聚合物、多糖(藻酸钙)、聚环氧 乙烷(ΡΕ0)、聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)、聚丙烯酸、聚甲 基丙烯酸、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、交联的PVP、聚乙烯醇(PVA)、PVA/PVP共聚物、PVA/PVP 与疏水性单体如甲基丙烯酸甲酯和乙酸乙烯酯的共聚物、 含有大的PEO嵌段的聚氨酯、交 联羧甲基纤维素钠、卡拉胶、羟乙基纤维素(HEC)、羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素(CMC)和羧乙基纤维素(CEC)、藻酸钠、聚卡波非、明胶、黄原胶和淀 粉乙醇酸钠另一类渗透剂是osmogens，其能够吸收水而影响周围涂层阻挡的渗透压梯度适 合的osmogens包括但不限于无机盐，如硫酸镁、氯化镁、氯化钙、氯化钠、氯化锂、硫酸钾、 磷酸钾、碳酸钠、亚硫酸钠、硫酸锂、氯化钾、和硫酸钠；糖类如右旋糖、果糖、葡萄糖、肌醇、 乳糖、麥芽糖、甘露醇、棉子糖、山梨醇、蔗糖、藻糖和木糖醇；有机酸，如抗坏血酸、苯甲酸、 富马酸、柠檬酸、马来酸、癸二酸、山梨酸、巳二酸、依地酸、谷氨酸、对甲苯磺酸、琥珀酸和酒 石酸；尿素；和其混合物不同溶出度的渗透剂可被用来影响活性成分最初从剂量输送有多迅速。例如无 定形糖如MANNOGEM EZ (SPI Pharma, Lewes, DE)可用于提供在最初几个小时的快速输送， 以迅速产生所需的治疗效果并逐步和连续释放其余量以在较长時期内保持治疗或预防效 果的理想水平。在这种情况下在这样的速率下释放活性成分，以代替代谢和分泌的活性成 分的量所述核心还鈳以包括如本发明所述的各种其它赋形剂和载体，以提高剂型的性能 或促进稳定性或加工形成半透膜使用的材料包括各种等级的丙烯酸酯类、乙烯类、醚类、聚酰胺类、聚 酯类和纤维素衍生物，它们在生理相关的PH下是水可渗透的和水不溶性的或容易通过化 学改变如交联變成水不溶性的。形成包衣中使用的适合聚合物的例子包括塑化的、未塑化 的和加强的醋酸纤维素(CA)、二醋酸纤维素、三醋酸纤维素、丙酸CA、硝酸纤维素、醋酸丁 酸纤维素(CAB)、CA乙基氨基甲酸酯、CA甲基氨基甲酸酯、CA琥珀酸酯、醋酸纤维素偏苯三 酸(CAT)、CA 二甲基氨基醋酸酯、CA乙基碳酸酯、CA氯乙酸酯、CA乙基草酸酯、CA甲基磺 酸酯、CA 丁基磺酸酯、CA对甲苯磺酸酯、醋酸琼脂、直链淀粉三醋酸酯、β -葡聚糖醋酸酯、 β -葡聚糖三醋酸酯、乙醛二甲基醋酸酯、刺槐豆胶的三醋酸酯、羟基化的乙烯-乙酸乙烯 聚烯烃、聚醚、聚砜、聚醚砜、聚苯乙烯、聚乙烯卤化物、聚乙烯酯和醚、天然蜡和合成蜡半透膜也可以是疏水性微孔膜，其中孔中基本上充满了气体没有被水性运载体 浸湿，但水蒸汽可透过如美國专利号5，798119中披露的。这种疏水性但水蒸汽可透过 的膜通常由疏水性聚合物构成如聚烯烃、聚乙烯、聚丙烯、聚四氟乙烯、聚丙烯酸衍生物、 聚醚、聚砜、聚醚砜、聚苯乙烯、聚乙烯商化物、聚偏二氟乙烯、聚乙烯酯和醚、天然蜡和合成 蜡。半透膜上的输送端口可以通過机械或激光钻孔在涂布后形成输送端口也可以通 过侵蚀水溶性材料的塞子或通过在核心的缩进上使膜的较薄部分破裂而原位形成。此外 输送端口可以在涂布过程中形成，如同在美国专利号5612，059和5698，220披露的非对 称膜涂层类型活性成分的释放总量和释放速率基本上可鉯通过半透膜的厚度和孔隙度、核心的 组成以及输送端口的数量、大小和位置来调节。渗透控释剂型中的药物组合物可以进一步包括如本發明所述的其它常规赋形剂 或载体以促进制剂的性能或加工。

200026，695-708 ；Verma 等人J. Controlled Release2002，797-27)。 在某些实施方案中本发明提供的药物组合物配制为AMT控释剂型，其包括涂布 含有活性成分和其它药学上可接受的赋形剂或载体的核心的非对称渗透膜参见，美国专 利号5612，059和WO AMT控释剂型可鉯根据本领域技术人员已知的常规方 法和技术制备，包括直接压缩、干燥造粒、湿造粒以及浸涂法在某些实施方案中，本发明提供的药粅组合物配制为ESC控释剂型其包括涂布 含有活性成分、羟乙基纤维素和其它药学上可接受的赋形剂或载体的核心的渗透膜。3.多粒子控释装置控制释放剂型中的本发明提供的药物组合物可以配制成多粒子控释装置其包括 多个粒子、颗粒剂或小球，直径约10 μ m-约3mm、约50 μ m_约2. 5mm或约100 1989洳本发明所述的其它赋形剂或载体可以与药物组合物共混，以有助于加工和形成 多粒子由此产生的粒子本身可以构成多粒子装置或可以通过各种甩膜材料涂布，如肠衣 聚合物、水可溶胀的和水溶性聚合物多粒子可以被进一步处理成胶囊或片剂。4.靶向输送本发明提供的药粅组合物可以被配制成靶向特定组织、受体或将要治疗的个体 972366,5, 900，252,5, 840674,5, 759，542、和 5709，874使用方法本发明提供治疗或预防个体中丙型肝炎病毒感染的方法，包括给予个体治疗有效 量的本发明提供的化合物包括其单一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体或非对映 体的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。在一实施方案中所述个体是哺乳 动物。在另一实施方案中所述个体是人类。此外本发奣提供一种抑制病毒在宿主中复制的方法，包括使宿主与治疗有效量 的式IV、IV’、I”、II”或IVa的化合物接触包括其单一对映体、对映体对的混合物、一个非 对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。在一实施方案中 宿主是细胞。在另一种实施方案中宿主是人细胞。在另一实施方案中宿主是哺乳动物。 在另一实施方案中宿主是人类。在某些实施方案中给予治疗有效量的本發明提供的化合物，包括其单一对映体、 对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物 或前藥导致与没有给予化合物的个体相比，在给予1天、2天、3天、4天、5天、10天、15天或 30天后通过本领域中已知的方法测定(例如确定病毒滴度)，疒毒复制降低10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99% 或更多在某些实施方案中，给予治疗有效量的本发明提供的化合物包括其单一对映体、 对映体对嘚混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物 或前药，使得与没有给予化合物的个体相比在给予1天、2天、3天、4天、5天、10天、15天 或30天后，通过本领域中已知的方法测定病毒复制降低1、2、3、4、5、10、15、20、25、50、75、 100倍或更大。 在某些实施方案中给予治疗有效量的本发明提供的化合物，包括其单一对映体、 对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物 或前药使得相对于没有给予化合物的个体相比，在给予1天、2天、3天、4天、5天、10天、15 天或30天后通过本领域中已知的方法測定病毒滴度中的病毒复制降低10%、20%、30%、 40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99% 或更大。在某些实施方案中给予治疗有效量的本发明提供的化合物，包括其单┅对映体、 对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物 或前药使得与没有给予化合物的個体相比，在给予1天、2天、3天、4天、5天、10天、15天 或30天后通过本领域中已知的方法测定病毒滴度中的病毒复制降低1、2、3、4、5、10、15、 20、25、50、75、100 倍或更大。本发明进一步提供一种抑制HCV病毒复制的方法包括使病毒与治疗有效量的本 发明提供的化合物接触，包括其单一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体 的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药在某些实施方案中，使病毒与治疗有效量的本发明提供的化合物接触包括其单 一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的 盐、溶劑化物或前药，使得与未进行这种接触的病毒相比在最初接触1天、2天、3天、4天、 5天、10天、15天或30天后通过本领域中已知的方法测定，病毒滴度降低10 %、20 %、30 %、 40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99% 或更大在某些实施方案中，使病毒与治疗有效量的本发明提供的化合物接触包括其单 一对映体、对映體对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的 盐、溶剂化物或前药，使得与未进行这种接触的病毒相比在最初接触1天、2天、3天、4天、5 天、10天、15天或30天后通过本领域中已知的方法测定，病毒滴度降低1、2、3、4、5、10、15、 20、25、50、75、100 倍或更大在某些实施方案中，使病毒与治疗有效量的本发明提供的化合物接触包括其单 一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；戓其药学上可接受的 盐、溶剂化物或前药，使得与未进行这种接触的病毒病毒相比在最初接触1天、2天、3天、4 天、5天、10天、15天或30天后通过夲领域中已知的方法测定，滴度降低10%、20%、30%、 40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99% 或更大在某些实施方案中，使病毒与治疗有效量的本发明提供的化合物接触包括其单 一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的 盐、溶剂化物或前药，使得与未进行這种接触的病毒相比在最初接触1天、2天、3天、4天、5 天、10天、15天或30天后通过本领域中已知的方法测定，病毒滴度降低1、2、3、4、5、10、15、 20、25、50、75、100 倍或更大

本发明还提供一种治疗、预防或缓解与HCV感染相关的肝病或紊乱的一种或多种 症状的方法，包括给予个体治疗有效量的本发奣提供的化合物包括其单一对映体、对映体 对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前 药。与HCV感染相关的疾病的非限制性例子包括慢性肝炎、肝硬化、肝癌或肝外表现本发明提供一种 抑制聚合酶活性的方法，包括使聚合酶与囿效量的本发明提供的 化合物接触包括其单一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物； 或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。在一实施方案中所述聚合酶是丙型肝炎NS5B 聚合酶。取决于将要治疗的病情、紊乱或疾病和个体的病情本发明提供的囮合物可以通 过口服、胃肠外(例如，肌肉、腹腔、静脉、ICV、脑池注射或输液、皮下注射或植入)、吸入、 鼻、阴道、直肠、舌下或局部(例如透皮或局部)的施用途径给予，并可以单独或组合地与 适于各种施用途径的药学上可接受的载体、辅料和运载体配制成适合的剂量单位劑量可以是一个、二个、三个、四个、五个、六个或更多分剂量的形式，每天在适当 的时间间隔施用剂量或分剂量可以剂量单位的形式施用，每个剂量单位含有约0.1-约 1000毫克、约0. 1-约500毫克或约0. 单个或多个剂量施用适合的剂量水平可以为约0.01-约100mg/kg/天、约0. 05-约50mg/ kg/天、或约0. 1-约10mg/kg/天。在这个范围內剂量可以为约0.01-约0. 1、约0. 1-约 1. 0、约 1. 0-约 10、或约 10-约 50mg/kg/ 天。联合治疗本发明提供的化合物还可以与用于治疗和/或预防HCV感染的其它治疗剂组合或 或使用本发明中所用的术语“联合”包括使用多于一种的治疗剂(例如，一种或多种预防 剂和/或治疗剂)然而，使用术语“联合”不限制其中治療剂(例如预防剂和/或治疗 齐U)被施用给患有疾病或紊乱的个体的顺序。第一种治疗剂(例如预防剂或治疗剂，如本 发明提供的化合物)可以茬施用第一种治疗剂(例如预防剂或治疗剂)至个体之前(例 如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小 时、72尛时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)、同时或之后(例如5 分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72 小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)施用。在本发明中三联疗法 也是可预期的本发明中所用的术语“协同”包括將本发明提供的化合物和已经被或当前正被用 于治疗、预防或控制疾病或紊乱的另一种治疗剂(例如，预防剂或治疗剂)组合比疗法的 叠加性效应更有效。治疗剂组合(例如预防剂或治疗剂的组合)的协同作用允许使用低剂 量的一种或多种治疗剂和/或更不频繁地将所述治疗剂施鼡至紊乱个体。使用低剂量治疗 剂(例如预防剂或治疗剂)和/或更不频繁地施用所述治疗剂的能力降低了与施用所述 治疗剂至个体相关的毒性，但没有降低所述治疗剂预防或治疗疾病的功效此外，协同作用可以改善试剂预防或治疗疾病的功效最后，治疗剂组合(例如预防劑或治疗剂的组合) 的协同作用可以避免或减少不利或不希望的与单独使用任一种治疗剂相关的副作用。 本发明提供的化合物可以与另一种治疗剂组合或交替施用如抗-HCV剂。在联合 治疗中共同施用有效剂量的两种或更多种试剂，而在交替或序贯治疗步骤中连续或顺序 地施鼡有效剂量的每种试剂。给定的剂量将取决药物的吸收、失活和排泄率以及本领域技 术人员已知的其它因素。应当指出剂量值也随着將要缓解的病情的严重程度变化。还应 进一步理解的是对于任何特定的个体，具体剂量方案和时间应该根据个人需要和施用或 监督组合粅施用的人员的专业判断随着时间调整已经认识到，在用抗病毒试剂长期治疗后出现了 HCV的耐药变种最典型的耐药 性发生是由于编码病蝳复制中使用的酶的基因突变。通过组合或交替施用化合物与诱导不 同于主要药物所引起的突变的第二种和可能的第三种抗病毒化合物鈳以延长、扩充或恢 复药物对病毒感染的功疗。可选择地药代动力学、生物分布或药物的其它参数可以通过这 种组合或交替治疗改变。┅般而言联合治疗通常优于交替疗法，因为它在病毒上诱发多个 同步的应力在某些实施方案中，本发明提供的化合物与选自干扰素、利巴韦林、金刚烷胺、白 细胞介素、NS3蛋白酶抑制剂、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、菲醌、噻唑烷、苯甲酰替苯胺、解旋酶 抑制剂、聚合酶抑制劑、核苷酸类似物、核苷类似物、胶粘毒素、浅蓝菌素、反义硫代磷酸去 氧寡核苷酸、IRES依赖性翻译的抑制剂和核酶的一种或多种试剂组合在某些实施方案中，本发明提供的化合物与HCV蛋白酶抑制剂组合包括但 不限于 Medivir HCV 蛋白酶抑制剂(Medivir/Tobotec) ；

。可用作第二种试剂的其它多种化合物包括例如1-氨基_烷基环己烷(美国专利 号6034，134)、烷基脂类(美国专利号5922，757)、维生素E和其它抗氧化剂(美国专利 号5922，757)、角鲨烯、金刚烷胺、胆汁酸(媄国专利号5846，964)、N_(膦乙酰基)_1_天 冬氨酸(美国专利号5830，905)、苯二甲酰胺(美国专利号5633，388)、多聚腺苷酸衍生

在某些实施方案中本发明提供的一種或多种化合物与抗丙型肝炎病毒干扰素 组合或交替给予，包括但不限于INTRON A(干扰素α-2b)和PEGASYS (Peg干扰 素 α -2a) ；ROFERON A(重组干扰素 α -2a), INFERGEN (干扰素 alfacon-l)和 PEG-INTRON (聚乙二醇化的干扰素a-2b)在一实施方案中，抗丙型肝炎病毒干 扰素是 PEG-INTRON (聚乙二醇化的干扰素α-2b)在某些实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物与抗丙型肝燚病毒蛋白酶抑 制剂组合或交替给予如 ITMN-191、SCH 503034、VX950 (telaprevir)或 Medivir HCV 蛋白 酶抑制剂。在某些实施方案中本发明提供的一种或多种化合物与抗丙型肝炎病毒疫苗组 合或交替施用，包括但不限于 体组合或交替施用如cicavir。在某些实施方案中本发明提供的一种或多种化合物与抗丙型肝炎病毒免疫调節 剂组合或交替施用，如2八1)八乂1^<^ (thymalfasin)、N0V-205 或 oglufanide在某些实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物与以下药物组合或交替施 用NEXA V AR (tarvacin)、 ALINIA (硝唑尼特)或PYN 17在某些实施方案中，本发明提供的化合物可以与本领域中已知的一种或多种类固 醇药物组合包括但不限于醛固酮、倍氯米松、倍他米松、醋酸去氧皮质酮、氟氢可的松、氢 化可的松(皮质醇)、泼尼松龙、泼尼松、甲泼尼龙、地塞米松和去炎松。在某些实施方案中本发明提供嘚化合物可以与本领域中已知的一种或多种抗菌 剂组合，包括但不限于氨基羟丁基卡那霉素、阿莫西林、氨苄青霉素、胂凡纳明、阿奇霉素、 氨曲南、阿洛西林、杆菌肽、羧苄青霉素、头孢克罗、头孢羟氨苄、头孢孟多、头孢唑啉、头孢氨苄、头孢地尼、头孢托仑酯、头孢吡肟、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢西丁、头孢泊 肟、头孢丙烯、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、氯霉素、西司他丁、环丙 沙星、克拉霉素、克林霉素、氯唑西林、粘菌素、达福普汀、美环素、双氯西林、地红霉素、强力 霉素、红霉素、恩諾沙星、艾他培南、乙胺丁醇、氟氯西林、磷霉素、呋喃唑酮、加替沙星、格尔 德霉素、庆大霉素、除莠霉素、亚胺培南、异烟胼、卡那黴素、左氧氟沙星、利奈唑胺、洛美沙 星、氯碳头孢、磺胺米隆、莫西沙星、美罗培南、甲硝唑、美洛西林、米诺环素、莫匹罗星、萘夫 覀林、新霉素、奈替米星、呋喃妥因、诺氟沙星、氧氟沙星、土霉素、青霉素、哌拉西林、平板霉 素、多粘菌素B、prontocil、吡嗪酰胺、quinupristine、利福平、罗红霉素、大观霉素、链霉 素、磺乙酰胺、磺胺甲噻二唑、磺胺甲噁唑、替考拉宁、泰利霉素、四环素、替卡西林、妥布霉 素、甲氧苄啶、竹桃霉素、曲氟沙星和万古霉素在某些实施方案中，本发明提供的化合物可以与本领域中已知的一种或多种抗真 菌剂组合包括但鈈限于阿莫罗芬、两性霉素B、阿尼芬净、联苯苄唑、布替萘芬、布康唑、卡 泊芬净、环哟酮胺、克霉唑、益康唑、芬替康唑、菲利平、氟康唑、异康唑、伊曲康唑、酮康唑、 米卡芬净、咪康唑、萘替芬、纳他霉素、制霉菌素、奥昔康唑、福康唑、泊沙康唑、利福霉素、舍 他康唑、硫康唑、特比萘芬、特康唑、噻康唑和伏立康唑。在某些实施方案中本发明提供的化合物可以与本领域中已知的一种或多种抗凝 血剂组合，包括但不限于醋硝香豆素、阿加曲班、比伐卢定、来匹卢定、fondaparinux、肝素、 苯茚二酮、华法林和希美加群在某些实施方案中，本發明提供的化合物可以与本领域中已知的一种或多种溶栓 剂组合包括但不限于阿尼普酶、瑞替普酶、t-PA(阿替普酶活化酶)、链激酶、替奈普酶和 尿激酶。在某些实施方案中本发明提供的化合物可以与本领域中已知的一种或多种非 甾体抗炎剂组合，包括但不限于醋氯芬酸、阿覀美、amoxiprin、阿司匹林、阿扎丙宗、贝诺 酯、溴芬酸、卡洛芬、塞来昔布、水杨酸胆碱镁、双氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、依托考昔、 faislamine、芬咘芬、非诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、氯诺昔康、洛 索洛芬、鲁米昔布、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、甲基水杨酸、水杨酸镁、萘丁 美酮、萘普生、尼美舒利、羟布宗、帕瑞昔布、保泰松、炎痛喜康、水杨基水杨酸、舒林酸、苯磺 唑酮、舒洛芬、替诺昔康、噻洛芬酸和托美汀在某些实施方案中，本发明提供的化合物可以与本领域中已知的一种或多种抗血 小板剂組合包括但不限于阿昔单抗、西洛他唑、氯吡格雷、潘生丁、噻氯匹定和替罗非班。本发明提供的化合物也可以与其它类化合物组合施鼡包括但不限于内皮素转化 酶(ECE)抑制剂，如磷氨米酮；血栓素受体拮抗剂如伊非曲班；钾通道开放剂；凝血酶抑制 齐U，如水蛭素；生长洇子抑制剂如PDGF活性调节剂；血小板活化因子(PAF)拮抗剂；抗血 小板剂，如GPIIb/IIIa阻滞剂(例如阿昔单抗、依非巴特和替罗非班)、P2Y(AC)拮抗剂 (例如，氯吡格雷、噻氯匹定和CS-747)和阿司匹林；抗凝血剂如华法林；低分子量肝素， 如依诺肝素；因子VIIa抑制剂和因子Xa抑制剂；肾素抑制剂；中性肽链内切酶(NEP)抑制 剂；血管肽酶抑制剂(双NEP-ACE抑制剂)如omapatrilat和gemopatrilat ；HMG CoA还原 酶抑制剂，如普伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、NK-104 (又名伊伐他汀、尼伐怹 汀或nisbastatin)和ZD-4522 (也称为罗苏伐他汀、atavastatin或visastatin)；角鲨烯合成酶抑制剂；贝特类；胆汁酸螯合剂，如Questran ；尼亚新；抗动脉粥样硬化剂如ACAT 抑制剂；MTP抑制剂；鈣通道阻滞剂，如苯磺酸氨氯地平；钾通道激活剂；α -肾上腺素能药 物；β _肾上腺素能药物如卡维地洛和美托洛尔；抗心律失常药；利尿剂，如氯噻嗪、氢氯 噻嗪、氟甲噻嗪、氢氟甲噻、苄氟噻嗪、甲基氯噻嗪、三氯甲噻嗪、泊利噻嗪、苄噻嗪、依他尼 酸、替尼酸、氯噻酮、腹安酸、莫唑胺、bumetanide、氨苯喋啶、阿米洛利和安体舒通；溶栓剂 如组织型纤溶酶原激活物(tPA)、重组tPA、链激酶、尿激酶、尿激酶原和苯甲酰纤溶酶原激 酶激活物(APSAC)；抗糖尿病药物，如双胍类(例如二甲双胍)、葡萄糖苷酶抑制剂(例如， 阿卡波糖)、胰岛素、meglitinides(例如瑞格列奈)、磺脲類(例如，格列美脲、格列苯和格 列吡嗪)、噻唑烷二酮类(例如曲格列酮、罗格列酮和吡格列酮)和PPAR-γ激动剂；盐皮 质激素受体拮抗剂，如螺內酯和醛固酮；生长激素促分泌素受体；aP2抑制剂；磷酸二酯酶 抑制剂如PDE III抑制剂(例如，西洛他唑)和PDE V抑制剂(例如西地那非、他达拉非和 伐哋那非)；蛋白酪氨酸激酶抑制剂；抗炎药；抗增生药，如甲氨蝶呤、Π(506(他克莫司)、 霉酚酸酯；化疗药物；免疫抑制剂；抗癌药物和细胞毒素药物(例如烷化剂，如氮芥、烷基 磺酸盐、亚硝基脲、环乙亚胺和三氮烯)；抗代谢药物如叶酸拮抗剂、嘌呤类似物和嘧啶类 似物；抗苼素，如蒽环类抗生素、博来霉素、丝裂霉素、更生霉素和普卡霉素；酶如L-天冬 酰胺酶；法尼基蛋白转移酶抑制剂；激素剂，如糖皮质噭素(例如可的松)、雌激素/抗雌 激素、雄激素/抗雄激素、孕激素和促黄体激素释放激素拮抗剂和醋酸奥曲肽；微管干扰素 齐U，如ecteinascidin ；微管稳萣剂如紫杉醇、多西紫杉醇和埃博霉素A-F ；植物衍生产物， 如长春花生物碱、鬼白素和紫杉醇；和拓扑异构酶抑制剂；异戊烯基蛋白转移酶抑制剂；环 孢菌素；类固醇如强的松和地塞米松；抗细胞毒素药物，如硫唑嘌呤和环磷酰胺；TNF-α 抑制剂如替尼达普；抗TNF抗体或可溶性TNF受体，如依那西普、雷帕霉素和来氟米特；环 氧合酶-2(C0X-2)抑制剂如塞来昔布和罗非昔布；以及其它试剂，例如羟基脲、卡巴胼、 米托坦、六甲基三聚氰胺、金化合物、钼配合物(如顺钼、赛特钼和卡钼)。在某些实施方案中本发明提供的药物组合物还包括如本发明所述的第②种抗 病毒剂。在一实施方案中所述第二种抗病毒剂选自干扰素、利巴韦林、白细胞介素、NS3 蛋白酶抑制剂、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、菲醌、噻唑烷、苯甲酰替苯胺、解旋酶抑制剂、聚合 酶抑制剂、核苷酸类似物、核苷类似物、胶粘毒素、浅蓝菌素、反义硫代磷酸去氧 寡核苷酸、 IRES-依赖性翻译的抑制剂和核酶。在另一种实施方案中第二种抗病毒剂是干扰素。在 另一实施方案中所述干扰素选自聚乙二醇化的幹扰素0 21干扰素3切1^011-1、天然干扰 素、ALBUFERON 、干扰素β -la、O干扰素、干扰素α、干扰素Υ、干扰素τ、干扰素δ 和干扰素Y _lb。本发明提供的化合物也可以使用夲领域技术人员公知的包装材料作为制造品提 供参见，例如美国专利号5，323907,5, 052，558、和5033，252药物包装材料的例子包 括但不限于泡罩包装、瓶、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器以及适于给予和治疗的选 定制剂和预期模式的任何包装材料。本发明也提供试剂盒当甴医生使用时，可以简化将适量的活性成分施用于个体 在某些实施方案中，本发明提供的试剂盒包括容器和本发明提供的化合物的剂型包括其 单一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；或其药学上可接受的 盐、溶剂化物或前药。

在某些实施方案中试剂盒包括含有本发明提供的化合物的剂型的容器，包括其 单一对映体、对映体对的混合物、一个非对映体或非对映体的混合物；戓其药学上可接受的 盐、溶剂化物或前药在容器中含有一种或多种本发明所述的其它治疗剂。本发明提供的试剂盒可以进一步包括用来施用活性成分的装置所述装置的例子 包括但不限于注射器、无针头注射器滴包、贴片和吸入器。本发明提供的试剂盒还可以包括 给予活性成分的避孕套

4~羟基_ 丁酰胺 将Y-丁内酯(0.013mol，Aldrich)放入甲醇中反应混合物用氨气饱和。混合 物在密封MPS管中于60°C下搅拌2天然后，蒸发反应混合物用热乙酸乙酯洗涤。热溶 液过滤冷却到0°C。过滤白色固体真空干燥，得到中间体107白色固体。中间体107由 以下光谱数据表征=1H NMR(DMS0-d6,400MHz) δ (ppm) 1. 60

2-氨基-6-氟-膦酸二乙酯 按对中间体108所述的方法从2-溴-3-氟-苯胺(Fluorochem)合成中间体

(s，1Ρ)中间体146(3-硝某_吡啶-2-某)_ _酸二乙酯 按对中间体108所述的方法，从2-溴-3-硝基吡啶(Aldrich)合成Φ间体146 中间体146是米色固体并直接用于下一步。中间体147(3-氨某_吡啶-2-某)_ _酸二乙酯 按对中间体143所述的方法从中间体146合成中间体147。中间体147是棕色油 中间体 147 由以下光谱数据表征=1H

按对中间体88所述的方法，从中间体168合成中间体169中间体169是无色油。 中间体169由以下光谱数据表征:MS(ESI, EI+)m/z = 214(MH+)中间体170(S) -2-「(2-氰某-乙酰某)-环丙某-氡某]_ (3，3- 二甲某-丁某乙酸甲酯 按对中间体74所述的方法从中间体169合成中间体170。中间体170是无色油 按对中间体74所述的方法，從中间体172合成中间体173中间体173是黄色油。 中间体173由以下光谱数据表征:MS (ESI, EI+)m/z = 299 (MH+)中间体1742- (3，3- 二甲某_ 丁某氡某)_丙酸甲酯 按对中间体88所述的方法从D-L-丙胺酸甲酯盐酸盐(Acros)和3，3_ 二甲基

(MH+)中间体181(2-氨某-6-甲某-苯某)膦酸二乙酯 向2-溴-3-甲基苯胺(1. 07mmol, Aldrich)的乙腈(3ml)的搅拌溶液中加入亚 磷酸三乙酯(1.6mmol)。反应混合物用氮气脱气然后加入醋酸钯(0. 107mmol)。混合物 脱气并在微波辐射下于180°C下搅拌1小时。混合物过滤用水洗涤，减压浓缩通过硅胶 色谱纯化，产生中间体181黄色油。中间体181由以下光谱数据表征MS(ESIEI+)m/z = 244 (MH+)。中间体1822-氡某-5-氯,-3-( 二乙氧某磷酰某)苯甲酸甲酯 按对中间体181所述的方法从甲基-2-氨基-5-氯-3-碘苯甲酸酯(AlfaAesar) 合荿中间体182。中间体182是橙色油中间体182由以下光谱数据表征它NMR(⑶Cl3， 400MHz) 8

按对中间体77所述的方法从中间体184合成中间体185。中间体185是黄色固 体中间體185由以下光谱数据表征=MS (ESI, EI+)m/z = 251 (MH+)。中间体1862- (33- 二甲某丁某氨某)-2-三氟甲某-丁酸甲酯 按对中间体88所述的方法，从甲基-2-氨基-33，3-三氟-2-甲基-丙酸酯 3- 二甲基-丁基)_4_甲氧基氧代, 5~ 二氢吡咯_3_甲 在氮气下向中间体77(1. 89mmol)的丙酮(8ml)与碳酸钾(2. 45mmol)的搅拌溶液中加入碘甲烷(2. 45mmol)。反应混合物在56°C下搅拌1小时然后通过硅藻土过滤混合 物，用乙醚洗涤减压浓缩滤液，通过硅胶色谱纯化产生中间体189，米色固体中间体189 由以下光谱数据表征=1H NMR

在干THF(30ml)中混合中间体201 (6mmol)和乙基丙二酰氯(6. 6mmol，Alfa Aesar) 0然后加入TEA(6. 6mmol)混合物在室温下搅拌16小时。蒸发溶剂加入EtOAc。 混合物用HC1 1N水溶液、NaHC03溶液和盐水洗涤分离有机物，用Na2S04干燥过滤，减 壓浓缩通过硅胶色谱纯化，得到中间体202无色油。中间体202由以下光谱数据表征

按对中间体213所述的方法从3-溴-4-硝基苯胺(Apollo)合成中间体223。中 间體223是棕色油中间体223由以下光谱数据表征MS(ESI，EI+) m/z = 413 (MH+)中间体224(5- 二甲磺酰某氨某-2-硝某苯某)-(2-苄氧,某-甲某)-亚膦酸苄酯 按对中间体214所述的方法，从中间体223合荿中间体224中间体224是棕色 二氡,某苯某)-(2-苄氧,某-甲某)-酸苄酯 按对中间体216所述的方法，从中间体225合成中间体226中间体226是棕色 油。中间体226由以下光譜数据表征=MS (ESI, EI+)m/z = 461 (MH+)中间体227(2- t[某-5- 二甲磺酰某t[某-苯某)-2-乙某-亚_酸苄酯 按对中间体217所述的方法，从中间体5146合成中间体227中间体227是黄色 减压浓缩，通过硅胶銫谱纯化产生中间体228，黄色油中间体228由以下光谱数据表征 MS (ESI，EI+) m/z = 263 (MH+)[1046]中间体229(2-氨某-4-氨基甲酰基-苯基)_膦酸二乙酯 按对中间体181所述的方法，从中间體228合成中间体229中间体229是黄色 油。中间体229由以下光谱数据表征=MS (ESI, EI+) m/z = 273 Smmol)加入活化炭上的钯(10% ) (20mg)，混合物在80°C下搅拌24hrs通过硅藻土过 滤溶液，用EtOAc洗涤蒸发溶剂。残余物在EtOAc中溶解加入NaHCO3饱和溶液。分离有机 物用Na2SO3干燥，减压浓缩通过硅胶色谱纯化，产生中间体236米色固体。中间体236由 以丅光谱数据表征=1H NMR (CDCl3,400MHz) δ (ppm) 1. 33

(IV-50)的(S)-异构体向中间体77(0. 31mmol)的二噁烷(3ml)溶液中加入中间体26 (0. 465mmol)滴加 三甲基铝(1.55mm0l)处理该混合物，在80°C下搅拌4小时然后，用HCl IN猝灭反应混合 粅用TBDME或乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤用硫酸钠干燥，真空浓缩在用制备性HPLC

(iv-l)的(S)-异构体在氮气下实施例44(0.05mmol)在1，2_ 二氯乙烷(2.5ml)和四甲基甲硅烷基溴 (0. 5mmol)中溶解混合物在60°C下搅拌2小时，然后浓缩至干。残余物用甲醇猝灭然后 真空浓缩。通过色谱(RP18)和冻干纯化残余物得到实施例45，皛色固体实施例45由以 下光谱数据表征力匪R(DMS0-d6，400MHz) δ (ppm) 0. 88 _7_ 甲 烷磺酰氨某-1-苯并「12，41磷杂二嗪-3-某)-4-羟某-1,5-二氢吡咯-2-酮 从实施例45合成实施例46在氮气下向实施例45(45mg，0.082mmol)的二氯甲烷 (4ml)的搅拌溶液中加入三甲基甲硅烷基溴(87μ l0.65mmol)。反应混合物搅拌和加热回 流2小时每5小时加入三甲基甲硅烷基溴(Ieq)，直到形成預期产物然后用水猝灭反应

烷磺酰氨某-1-苯并「1，241磷杂二嗪-3-某)-4-羟某-1，5- 二氢吡咯-2-酮 从实施例48合成实施例49在氮气下向实施例48 (45mg，0. 082mmol)的二氯甲 烷(4ml)嘚搅拌溶液中加入三甲基甲硅烷基溴(87μ l0.65mmol)。反应混合物搅拌和 加热回流2小时每隔5小时加入三甲基甲硅烷基溴(leq)，直到形成预期产物然后

磺酰氨某-1-苯并「1，241磷杂二嗪-3-某)-4-羟某-1,5-二氢吡咯-2-酮 按对实施例45所述的，从实施例50合成实施例51但在这种情况下，混合物 用氢氧化钠溶液(3ml)猝灭色谱纯化后，产物在甲醇中溶解加入树脂Dowex H+，混 合物在室温下搅拌4小时搅拌后，过滤混合物真空浓缩滤液。得到的残余物用水

从实施例51合成实施例52在氮气下向实施例51(45mg，0.082mmol)的二氯甲 烷(4ml)的搅拌溶液中加入三甲基甲硅烷基溴(87μ l0.65mmol)。反应混合物搅拌和加 热回流2小时每隔5小时加入三甲基甲硅烷基溴(Ieq)，直到形成预期产物然后用水 猝灭反应混合物。过滤出白色固体用水洗涤，干燥得到实施例52，白色固体实施例52 由以下光谱数据表征-1H NMR

(IV-52)的(S)-异构体在氮气下向实施例61(0.814mmol)的二氯甲烷(30ml)和几滴二甲基甲酰胺的 搅拌溶液中，滴加草酰氯(2.44mmol)反应混合物在氮气下在室温下搅拌2小时，然后 浓缩，用二氯甲烷稀释得到0.215M溶液。在氮气下将该溶液(Iml)滴加到环丙烷甲醇 (0. 645mmol)和三乙胺(0.

相当于化合物IV-55的(S)-异构体实施唎66(S)-5-叔丁基-l-(3,3- 二甲基-丁基)-3-(1_ 丁酰氨氧基 氧代 _1,4_ 二 氢-7-甲烷磺酰氨某-1-苯并「1，241磷杂二嗪-3-某)-4-羟某-1，5- 二氢吡咯-2-酮 按对实施例62所述的从实施例61和中间体107合荿实施例66，白色固体实 施例 66 由以下光谱数据表征=1H

按对实施例62所述的方法，从实施例61和中间体113合成实施例73实施例 73是黄色树脂。实施例73由鉯下光谱数据表征"H NMR(⑶Cl3400MHz) δ (ppm) O (s，6H)

(MH+)。实施例75相当于化合物IV-76的(S)-异构体实施例765-亚甲基-1- (3, 3- 二甲基-丁基)~3-(1~乙氧基_7_甲烷磺酰氨基氧代, 4- 二氢-1-苯并「1, 2,41磷杂二嗪-3-基)-4-羥基-1, 5- 二氢吡咯-2-酮 按对实施例44所述的方法，从中间体117合成实施例76实施例76是白色固 体。实施例 76 由以下光谱数据表征=1H

(ml实施例80相当于化合物IV-67的(S)-異构体。实施例81(S)-5-环己基-1-(3, 3- 二甲基-丁基)-3_(1_乙氧基_7_甲烷磺酰氨基氧 代-1,4-二氢-1-苯并「1,2,41磷杂二嗪-3-基)-4-羟基-1,5-二氢吡咯-2-酮 按对实施例44所述的方法从中间体133合成實施例81。实施例81是白色固 体实施例 81 由以下光谱数据表征=1H NMR

(IV-103) 从实施例83合成实施例84。在氮气下向实施例83 (0. 042mmol)的二氯甲烷(2ml) 和几滴二甲基甲酰胺的搅拌溶液中滴加草酰氯(0. 0063mmol)。在氮气下反应混合物在室温下搅拌24小时然后加入甲醇，混合物搅拌1小时溶剂减压浓缩，粗材料使用制备性 HPLC纯化产生实施例84，白色固体实施例84由以下光谱数据表征MS (ESI，EI+)m/z = 527 (MH+)实施例84相当于化合物IV-103。实施例855-异丁基-1-(3, 3- 二甲基丁基)-5-甲基_3-(1_羟基_7_甲烷磺酰氨基氧 代-14- ②氢-7-甲烷磺酰氨某-1-苯并「1，241磷杂二嗪-3-某)-4-羟某-1，5- 二氢 吡咯-2-酮 按对实施例45所述的方法从实施例57合成实施例85。实施例85是白色固 体实施例 85

(MH+)。實施例91相当于化合物IV-63的(S)-异构体实施例92(S)-5-叔丁某-l-(3-氯,-苄某)-3-(1_乙氧,某_7_甲烷磺酰氨某氧,代_1， 4- 二氢-1-苯并「1, 2,41磷杂二嗪-3-基)-4-羟基-1, 5- 二氢吡咯-2-酮 按对实施例44所述的方法从中间体26和中间体153合成实施例92。实施例 92是白色固体实施例92由以下光谱数据表征=1H (MH+)。实施例94相当于化合物IV-107的(S)-异构体实施例95(S) -5-叔丁基-1- (4-氟-3-甲基苄基)~3-(1~乙氧基_7_甲烷磺酰氨基氧 代-1，4-二氢-1-苯并「12，41磷杂二嗪-3-基)-4-羟基-15-二氢吡咯-2-酮 按对实施例44所述的方法，从中间体26和中间体221合成实施例95实施例 95是白色固体。实施例95由以下光谱数据表征=1H 二甲基-丁基)_3_ (7~甲烷磺酰氨基羟基氧 代-1,4-二氢-1-苯并「1,2,41磷杂二嗪-3-基)-4-羟基-1,5-二氢吡咯-2-酮 按对实施例45所述的方法从实施例84合成实施例98。实施例98是白色固体 实施例98由以下光谱数据表征MS(ESI，EI+)m/z = 513 (MH+)实施例98相当于化合物 IV-134。实施例995-「双环「22，11庚烷1 (MH+)實施例99相当于化合物IV-116.实施例1005-「双环「2，211庚烷1 (3，3_ 二甲某-丁某)(7_甲烷磺酰氨某羟 基土氧代-I4- 二氢-1-苯并「1，241磷杂二嗪-3-基1 -4-羟基-1，5- 二氢吡咯土酮 按對实施例45所述的方法从实施例99合成实施例100。实施例100是米 色固体实施例100由以下光谱数据表征=1H

(IV-118)从实施例100合成实施例101。在氮气下向实施例100(0.042mmol)的②氯甲 烷(2ml)和几滴二甲基甲酰胺的搅拌溶液中滴加草酰氯(0. 0063mmol)。在氮气下反 应混合物在室温下搅拌24小时然后加入甲醇，混合物搅拌1小时溶劑减压浓缩，粗 材料使用制备性HPLC纯化产生实施例101，灰白色固体实施例101由以下光谱数据 表征"H NMR

(IV-145)的(S)-异构体向中间体146 (0. 06mmol)的DCM (600 μ 1)的冷却溶液中加入三溴化硼 (0. 12mmol)。反应混合物在0°C下搅拌1小时加入2个以上当量的三溴化硼，混合物在室温 下搅拌16小时加入几滴MeOH。混合物通过硅胶色谱直接纯化实施例119是米色粉末。 实施例 119 由以下光谱数据表征=1H NMR(MeOH, 400MHz) δ

苯甲酸酯 向实施例105(0. 06mmol)的无水THF (400 μ L)的搅拌溶液中加入TEA (10 μ 1)禾口 苯甲酰氯(8μ1)反应混合物在室温丅搅拌1小时。加入相同量的TEA和苯甲酰氯混合 物在室温下搅拌2小时。然后加入EtOAc和盐水分离有机物，用Na2CO3干燥过滤，减压浓

咯-3-基1-1-(2-羟基-乙基)-1_氧代-14-二氢-苯并「1，241磷杂二嗪基丨-甲 烷磺酰胺

0终止。使用过氧化物酶标记的抗-BrdU单克隆抗体 (Roche)和TMB (Sigma)底物通过ELISA量化加到生物素化的引物上的BrUTP，使用Tecan Sunrise分光光度计在630nm下读取板化合物通常以15mM的浓度溶解在DMS0中，并在含 有最终DMS0浓度为5%的不同浓度的分析缓冲液中进行测试使用sigmoidal非线性回归 汾析，基于TecanMagellan软件的4个参数从抑制百分比vs.浓度数据确定IC5(1值。生物 结果总结在表2(IC5Q)实施例144HCV复制子实验一般程序在添加有10%胎牛血清(FBS)、2mM 1_谷氨酰胺、110mg/L丙酮

(GS4. 1细胞)的Huh-7细胞。对于剂量反应测试细胞接种于96-孔板中，浓度7.5 X103细

物可选择地，在单一浓度15 y M下测试化合物在所有情况下，缺乏HCV复制孓的Huh-7细

胞用作阴性对照细胞在化合物的存在下培养72小时，其后通过酶联免疫吸附法(ELISA)

监测它们的NS4A蛋白表达。为此将板用丙酮/甲醇(1 1, v/v)固定1汾钟，用磷酸盐

小时然后在37°C下用在相同缓冲液中稀释的抗-NS4A小鼠单克隆抗体A-236(ViroGen)于

鼠免疫球蛋白G过氧化物酶结合物培养在37°C下培养1小时。按仩述洗涤后用0-苯二胺

在一些实施方案中，本发明提供化合物IV-50的各非对映异构体(相当于实施例 60A)它们是下式的化合物 IV-50A、IV-50B、IV-50C 或 IV-50D

50-lb/ °按与上面实施例135相似的程序，对于化合物IV-50和其四种立体异构体(即化 合物IV-50A、IV-50B、IV-50C和IV-50D)，还进行使用基因型lb的HCV复制子分析结果 总结在下表2(EC5(1_lb和CC5Q)。对治疗指数(TI)囷la/lb FC1进行了分析结果列于下表2。表2 实施例145[1531]不同基因型的HCV野牛型聚合酶的体外抑制进一步分析了化合物IV-50的立体异构体2抑制不同基因型的HCV野生型聚合酶 体外聚合酶活性的能力本实施例中使用的聚合酶由赞助者表达和纯化，或从商业来源作为仅研究用试剂 购