流黄是不是罗丹明123 流式

丁基罗丹明B_百度百科
丁基罗丹明B
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别名 :丁基玫瑰红B;四乙基罗丹明丁酯
英文名: Butyl rhodamine B
分子式: C32H39ClN2O3
分子量: 535.13
性质: 粉红色。溶于、和丙酮,不溶于。 用以形成缔合物。光度测定镓、金和锑。有机杂质沉淀剂。 本品应密封于阴凉处干燥保存。|/|/|/|/|/|
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细胞凋亡后的罗丹明123染色问题
看到很多资料上显示说:细胞凋亡后用罗丹明123染线粒体跨膜电位,荧光强度是降低的。可是我做的怎么是升高呢?另外我查了罗丹明123的资料,上面说罗丹明带阳离子,进入正常线粒体后会发生荧光猝灭而使荧光降低。照这样说的话,凋亡后线粒体跨膜电位降低,线粒体内的负离子减少,猝灭的罗丹明会减少,因此荧光强度就应该是增加,是不是这样呢?wolf1005 wrote:看到很多资料上显示说:细胞凋亡后用罗丹明123染线粒体跨膜电位,荧光强度是增加的。可是我做的怎么是升高呢?另外我查了罗丹明123的资料,上面说罗丹明带阳离子,进入正常线粒体后会发生荧光猝灭而使荧光降低。照这样说的话,凋亡后线粒体跨膜电位降低,线粒体内的负离子减少,猝灭的罗丹明会减少,因此荧光强度就应该是增加,是不是这样呢?这个问题我也正在迷惑中,不过我想知道的是你从哪里看到说罗丹明带阳离子,进入正常线粒体后会发生荧光猝灭而使荧光降低的呢?是说的罗丹明123吗?我没有看到过这样的说法,只是看到说罗丹明123由于带阳离子所以当线粒体膜电位存在的时候就会聚集到线粒体上,而当膜电位下降的时候,聚集的罗丹明123就减少,从而发光强度降低。不过我想搞清楚的是,为什么罗丹明在线粒体上的时候才发光呢?希望知道的战友可以赐教,谢谢!是否因为你的R123浓度太高,我至今没有发现凋亡细胞荧光增强的时候。或者是凋亡并没有发生呢?cfhan wrote:是否因为你的R123浓度太高,我至今没有发现凋亡细胞荧光增强的时候。或者是凋亡并没有发生呢?请问你们的浓度是多少呢?凋亡肯定发生了,我们用的是典型的凋亡刺激因子TNF,另外也看到了凋亡小体,就是不知道为什么,我观测的罗丹明123都在线粒体上,请问您看到R123会到细胞浆里面去吗?我用的浓度是0.1uM的,有时候更低一些。不过说到TNF,我也做过,发现大多数公司50ng的TNF并不能明显的诱导肿瘤细胞凋亡,只要sigma的TNF才是有效的。说明大多数公司TNF效价是不够标准的。另外一点在很多情况下是促进存活的,尤其是低效价的。你的结果正好说明存活效益,侧面反应TNF不够标准效价。最后一般TNF诱导凋亡需要蛋白合成inhibitor:CHX来辅助。
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