实验十、植物寄生线虫与寄生性植物
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[实验十、植物寄生线虫与寄生性植物] 一、目的和要求 识别主要植物线虫病的症状和病原线虫的形态特征。包括雌雄同型及异型线虫；学会识别常见的寄生性植物种类、寄生方式和特点。 二、材料和用具 草莓芽干尖线虫（Aphelenchoides besseyi）或珠蓝线虫；小麦粒线虫（Anguina tritici），破坏性茎线虫（Ditylenchus destructor），寄主甘薯，南方根结线虫（Meleidogyne arenaria），寄主花生等；大豆胞囊线…… [本文关键词:线虫 寄生 交合 菟丝子 胞囊]…
一、目的和要求
识别主要植物线虫病的症状和病原线虫的形态特征。包括雌雄同型及异型线虫；学会识别常见的寄生性植物种类、寄生方式和特点。
二、材料和用具
草莓芽干尖线虫（Aphelenchoides besseyi）或珠蓝线虫；小麦粒线虫（Anguina tritici），破坏性茎线虫（Ditylenchus destructor），寄主甘薯，南方根结线虫（Meleidogyne arenaria），寄主花生等；大豆胞囊线虫（Heterodera glycines）；长针线虫(Longidorus sp.）；毛刺线虫（Trichodorus sp.）。 寄生性线虫病的危害状标本或幻灯片。 线虫的固定液有多种，常用的有FA、FAA和TAF等三种： （1）FA液：福尔马林（36％甲醛）10ml，蒸馏水90ml； （2）FAA液：福尔马林10ml，冰醋酸1ml，蒸馏水89ml， （3）TAF液：三羟基乙胺2mi，福尔马林7m1，蒸馏水91ml。 各主要寄生植物的寄生状态及形态（幻灯片及标本）。 双目解剖镜、显微镜、载玻片、盖玻片、筛子、竹挑针、单面刀片、蒸馏水、乳酚油及棉兰乳酚油或计数皿、酒精灯、火柴、擦镜纸、吸水纸等。
三、内容与方法
1 线虫形态的观察
（1） 粒线虫属（Anguina）观察由小麦粒线虫危害小麦引起的症状，注意小麦受害部位，受害的茎叶有无扭曲或畸形？虫瘿的外形与麦粒有什么区别？ 取虫瘿一个，用刀片切开或挑针挑破，挑取虫瘿内部的白色棉絮状物于载玻片上的水滴中盖上盖玻片，置于低倍镜下镜检，可见到成虫、卵和幼虫。雌虫、雄虫均为线形，雌虫体形较雄虫粗大，往往卷曲，体内的卵巢顶端弯曲。雄虫昆部有交合刺，交合伞几乎包到尾尖。 （2） 茎线虫属（Ditylenchus） 观察甘薯茎线虫（D．destructor）危害甘薯的症状，剖开病薯可见到条点状褐色或白粉干腐症状，挑取少量组织于载玻片的水滴中，加盖玻片镜检，可见到卵、幼虫、成虫等各个虫态。甘薯茎线虫雌雄同型，都是线形，雌虫稍粗大，尾端尖细。注意口针、食道球形态，肠和卵巢平行，单卵巢，卵单行排列。雄虫较细小，尾部可见交合刺、交合伞，交合伞后端距虫体末端有一定间隔。因虫体很小，观察内部器官需用高倍镜。观察示范镜下的雄虫尾部形态。 （3） 滑刃线虫属（Aphelenchoides） 有各种危害状，例如水稻(Rice)干尖线虫（A．besseyi）引起水稻(Rice)干尖线虫病，以剑叶的干尖最明显，剑叶尖端2－6厘米一段变为白色。干枯卷缩，幼穗形成时线虫侵入颖壳内，引起秕粒或不很充实；菊叶线虫（A.ritzemabosi）为害菊的叶片，使叶片组织坏死。 镜检水稻(Rice)干尖线虫或珠蓝线虫，观察口针、食道球的形态特征、雄虫尾部的交合刺，有无交合伞？ （4） 胞囊线虫属（Heterodera）观察大豆胞囊线虫（H．glycines）的危害症状。 挑取病根上的雌虫，肉眼可见到线虫头部已钻入寄主组织，虫体外露，多为柠檬形，黄褐色。制片镜检，大豆胞囊线虫的卵大多不排出体外，整个雌虫体后期变成颜色深褐的卵囊，特称为胞囊（少数可排部分卵于体尾的胶质囊内）。 （5）根结线虫属（Meloidogyne）观察蔬菜根结线虫（M．spp．）或花生、茄科植物根结线虫危害症状，镜检观察雌虫虫体形态。根结线虫属分种的主要依据是：会阴花纹的形态特征，胞囊线虫分种是根据阴门椎周围的形态特征加以区别的。 （6）外寄生线虫 这类线虫只有取食时才将口针穿刺到寄主植物的体内，虫体外露，平时生活于土壤中。由于取食与栖息不在一处，它们经常往返于土壤与植物根系之间，而且取食的植株不固定，一条线虫可以危害多株植物。在它们转移危害时，线虫往往成为其它病害的传播介体，例如烟草环斑病毒（TRSV）就是通过线虫传播的。 剑线虫属（Xiphinema）：齿针很长，基部球大为瘤状，导环位置低。 长针线虫属（Longidorus）：齿针很长，基部球不大，导环位置高。 毛刺线虫属（Trichodorus）：瘤针弯曲，基部渐粗，形似毛刺。
在示范镜下观察比较外寄生线虫头部及口针部的形态特征。
2 线虫的杀死、固定和线虫死活的鉴别 线虫活体的形态特征是线虫工作者初步区分线虫种类的一个重要指标，但是要进一步区分和鉴别它们，必须经过杀死、固定以后才能作仔细的分辨，有的还要经过局部加工处理，使特征部位显示出来才能确定。因此，杀死并很好地固定线虫十分重要，否则就不能将线虫标本很好地保存下来。
2．1 线虫的杀死 少量线虫的杀死是用毛针或竹针将线虫挑放在有水滴的载玻片上，水滴部分在酒精灯火焰上来回移动3-4次，使水滴温度升高，当弯曲的线虫突然伸直时立即停止加热，此时虫体已被杀 。 大量线虫的杀死是将线虫放在表面皿或小玻皿中，加入等量的沸水；也可将盛有线虫液的玻管直接浸入60-65水浴中浸2－3分钟，不断振摇使加热均匀，当线虫僵直时停止加热。 2．2线虫的固定与保存 杀死后的线虫用毛针移放到FAA或TAF固定液中，操作要在解剖镜下完成。福尔马林液可使虫体硬化，不腐败；乙酸则使角质膜膨胀，但乙醇可使表皮皱缩变形。标本在FAA液中不宜保存太久，在TAF液中则可长期保存。 线虫在固定过程中要逐步更换固定液，通常是每隔3－4小时即吸去表层液，约1／ 2的容积，并加进新的固定液，连续换液3-4次后即可长期保存。 2．3线虫死活的鉴别方法 从土壤或种苗材料中分离得到的线虫，有时都不活动，对于它们是否存活需作鉴定，这在药剂处理试验中最为重要。 （1）高锰酸钾染色法：在凹玻片上加一滴0．5-1%的KMnO4液，然后挑放数条线虫在溶液中，经1—2分钟后在显微镜下观察，死线虫已染成棕红色，活虫不易染色。 （2）盐水实验：试蕴：将线虫挑放到凹玻片上的2－5％NaC1液中，经3－5分钟后在显微镜下观察，死虫无反应，活虫则卷曲或活动剧烈。
3 观察半寄生（水寄生）植物的形态和寄生结构
（1）桑寄生属（Loranthus）：绿性植物。观察寄生植物的匍匐茎和吸盘，从受害寄主茎部的剖面，观察寄生植物侵入寄主的情况，能看到假根和次生吸根否？桑寄生属植物可作为中草药，有利尿等作用。 桑寄生（L．parasitica）叶片两面光滑，果实红色。 樟寄生（L．yadorica）叶背密生星状短毛，果实黄色。 （2）槲寄生属(Viscum）：常绿性植物，无主茎，呈二叉分枝，叶片卵圆形对生。在我国危害较重要的有二种，大多在云南、贵州、广西和广东等地。
4 观察全寄生植物的形态特征和寄生结构
（1）菟丝子属（Cuscuta）：观察寄生在大豆上的菟丝子（C．chinensis）寄的茎呈什么颜色？叶片的发育情况如何？菟丝子的花里喇叭状（属旋花科）。果实的颜色怎样？剥开果实，每个果实内的种子有多少？大小和形状是否有规则？ 将缠绕在寄主体上的菟丝子解开，如所用的材料是新鲜标本，可以看见菟丝子的吸根固着在寄主茎的表面，吸根是什么形状？如果用的是干标本，在解开它的缠绕茎时，干而脆的吸根往往被折断，但可以用放大镜在寄主茎的表面观察到吸器着生处的痕迹的外貌及其排列情况。 在显微镜下观察被菟丝子寄生的大豆茎的横切面（切片），观察形态和解剖结构。注意寄与寄生的导管和筛管相连部位的结构情况，绘图。 （2）列当属（Orobanche）∶ 列当的花冠是唇形的，果实是蒴果，种子很小。观察为害瓜类的埃及列当（O.aegyptica）或向日葵列当（O．cumana）的标本,注意形态特征。
四、作业与思考题
绘小麦粒线虫雌虫、雄虫体形图，注意交合刺、交合伞。绘滑刃线虫雄虫尾部图，注意有无交合伞？绘菟丝子形态图，绘菟丝子吸根形态解剖图。
（1）植物寄生线虫的致病特点是什么？ （2）根结线虫和胞囊线虫为害根部时，症状有何不同？ （3）哪一种方法鉴别线虫死活简便？ （4）比较观察到的寄生性种子植物的形态特征及寄生性。 （5）寄生性种子植物怎样传播扩散？ （6）植物寄生在植物上，这是生物的进化现象还是退化现象？ （7）被寄生的寄主植物会不会枯死？为什么？
五、所需学时 3学时。
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植物病原类型及病害症状观察 ………………………………………………………
根肿菌门、卵菌门、接合菌门菌物形态特征观察 …………………………………
子囊菌门菌物形态特征观察 …………………………………………………………
担子菌门菌物形态特征观察 …………………………………………………………
半知菌形态特征观察 （一） …………………………………………………………
半知菌形态特征观察 （二） …………………………………………………………
植物病原细菌形态及其所致病害症状特点观察
…………………………………
植物病原线虫形态观察
……………………………………………………………
非侵染性病害症状观察
……………………………………………………………
消毒与灭菌技术
……………………………………………………………………
培养基的制作技术
…………………………………………………………………
病原物的分离和培养
………………………………………………………………
病原物的越冬 （夏）形态与孢子萌发
……………………………………………
种子带菌检验和种子消毒
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[实验十、植物寄生线虫与寄生性植物]一、目的和要求
识别主要植物线虫病的症状和病原线虫的形态特征。包括雌雄同型及异型线虫；学会识别常见的寄生性植物种类、寄生方式和特点。
二、材料和用具
草莓芽干尖线虫（Aphelenchoides besseyi）或珠蓝线虫；小麦粒线虫（Anguina tritici），破坏性茎线虫（Ditylenchus destructor），寄主甘薯，南方根结线虫（Meleidogyne arenaria），寄主花生等；大豆胞…… [本文关键词:线虫 寄生 交合 菟丝子 胞囊]…
一、目的和要求
识别主要植物线虫病的症状和病原线虫的形态特征。包括雌雄同型及异型线虫；学会识别常见的寄生性植物种类、寄生方式和特点。
二、材料和用具
草莓芽干尖线虫（Aphelenchoides besseyi）或珠蓝线虫；小麦粒线虫（Anguina tritici），破坏性茎线虫（Ditylenchus destructor），寄主甘薯，南方根结线虫（Meleidogyne arenaria），寄主花生等；大豆胞囊线虫（Heterodera glycines）；长针线虫(Longidorus sp.）；毛刺线虫（Trichodorus sp.）。 寄生性线虫病的危害状标本或幻灯片。 线虫的固定液有多种，常用的有FA、FAA和TAF等三种： （1）FA液：福尔马林（36％甲醛）10ml，蒸馏水90ml； （2）FAA液：福尔马林10ml，冰醋酸1ml，蒸馏水89ml， （3）TAF液：三羟基乙胺2mi，福尔马林7m1，蒸馏水91ml。 各主要寄生植物的寄生状态及形态（幻灯片及标本）。 双目解剖镜、显微镜、载玻片、盖玻片、筛子、竹挑针、单面刀片、蒸馏水、乳酚油及棉兰乳酚油或计数皿、酒精灯、火柴、擦镜纸、吸水纸等。
三、内容与方法
1 线虫形态的观察
（1） 粒线虫属（Anguina）观察由小麦粒线虫危害小麦引起的症状，注意小麦受害部位，受害的茎叶有无扭曲或畸形？虫瘿的外形与麦粒有什么区别？ 取虫瘿一个，用刀片切开或挑针挑破，挑取虫瘿内部的白色棉絮状物于载玻片上的水滴中盖上盖玻片，置于低倍镜下镜检，可见到成虫、卵和幼虫。雌虫、雄虫均为线形，雌虫体形较雄虫粗大，往往卷曲，体内的卵巢顶端弯曲。雄虫昆部有交合刺，交合伞几乎包到尾尖。 （2） 茎线虫属（Ditylenchus） 观察甘薯茎线虫（D．destructor）危害甘薯的症状，剖开病薯可见到条点状褐色或白粉干腐症状，挑取少量组织于载玻片的水滴中，加盖玻片镜检，可见到卵、幼虫、成虫等各个虫态。甘薯茎线虫雌雄同型，都是线形，雌虫稍粗大，尾端尖细。注意口针、食道球形态，肠和卵巢平行，单卵巢，卵单行排列。雄虫较细小，尾部可见交合刺、交合伞，交合伞后端距虫体末端有一定间隔。因虫体很小，观察内部器官需用高倍镜。观察示范镜下的雄虫尾部形态。 （3） 滑刃线虫属（Aphelenchoides） 有各种危害状，例如水稻(Rice)干尖线虫（A．besseyi）引起水稻(Rice)干尖线虫病，以剑叶的干尖最明显，剑叶尖端2－6厘米一段变为白色。干枯卷缩，幼穗形成时线虫侵入颖壳内，引起秕粒或不很充实；菊叶线虫（A.ritzemabosi）为害菊的叶片，使叶片组织坏死。 镜检水稻(Rice)干尖线虫或珠蓝线虫，观察口针、食道球的形态特征、雄虫尾部的交合刺，有无交合伞？ （4） 胞囊线虫属（Heterodera）观察大豆胞囊线虫（H．glycines）的危害症状。 挑取病根上的雌虫，肉眼可见到线虫头部已钻入寄主组织，虫体外露，多为柠檬形，黄褐色。制片镜检，大豆胞囊线虫的卵大多不排出体外，整个雌虫体后期变成颜色深褐的卵囊，特称为胞囊（少数可排部分卵于体尾的胶质囊内）。 （5）根结线虫属（Meloidogyne）观察蔬菜根结线虫（M．spp．）或花生、茄科植物根结线虫危害症状，镜检观察雌虫虫体形态。根结线虫属分种的主要依据是：会阴花纹的形态特征，胞囊线虫分种是根据阴门椎周围的形态特征加以区别的。 （6）外寄生线虫　这类线虫只有取食时才将口针穿刺到寄主植物的体内，虫体外露，平时生活于土壤中。由于取食与栖息不在一处，它们经常往返于土壤与植物根系之间，而且取食的植株不固定，一条线虫可以危害多株植物。在它们转移危害时，线虫往往成为其它病害的传播介体，例如烟草环斑病毒（TRSV）就是通过线虫传播的。 剑线虫属（Xiphinema）：齿针很长，基部球大为瘤状，导环位置低。 长针线虫属（Longidorus）：齿针很长，基部球不大，导环位置高。 毛刺线虫属（Trichodorus）：瘤针弯曲，基部渐粗，形似毛刺。
在示范镜下观察比较外寄生线虫头部及口针部的形态特征。
2 线虫的杀死、固定和线虫死活的鉴别 线虫活体的形态特征是线虫工作者初步区分线虫种类的一个重要指标，但是要进一步区分和鉴别它们，必须经过杀死、固定以后才能作仔细的分辨，有的还要经过局部加工处理，使特征部位显示出来才能确定。因此，杀死并很好地固定线虫十分重要，否则就不能将线虫标本很好地保存下来。
2．1 线虫的杀死 少量线虫的杀死是用毛针或竹针将线虫挑放在有水滴的载玻片上，水滴部分在酒精灯火焰上来回移动3-4次，使水滴温度升高，当弯曲的线虫突然伸直时立即停止加热，此时虫体已被杀 。 大量线虫的杀死是将线虫放在表面皿或小玻皿中，加入等量的沸水；也可将盛有线虫液的玻管直接浸入60-65水浴中浸2－3分钟，不断振摇使加热均匀，当线虫僵直时停止加热。 2．2线虫的固定与保存 杀死后的线虫用毛针移放到FAA或TAF固定液中，操作要在解剖镜下完成。福尔马林液可使虫体硬化，不腐败；乙酸则使角质膜膨胀，但乙醇可使表皮皱缩变形。标本在FAA液中不宜保存太久，在TAF液中则可长期保存。 线虫在固定过程中要逐步更换固定液，通常是每隔3－4小时即吸去表层液，约1／ 2的容积，并加进新的固定液，连续换液3-4次后即可长期保存。 2．3线虫死活的鉴别方法 从土壤或种苗材料中分离得到的线虫，有时都不活动，对于它们是否存活需作鉴定，这在药剂处理试验中最为重要。 （1）高锰酸钾染色法：在凹玻片上加一滴0．5-1%的KMnO4液，然后挑放数条线虫在溶液中，经1—2分钟后在显微镜下观察，死线虫已染成棕红色，活虫不易染色。 （2）盐水实验：试蕴：将线虫挑放到凹玻片上的2－5％NaC1液中，经3－5分钟后在显微镜下观察，死虫无反应，活虫则卷曲或活动剧烈。
3 观察半寄生（水寄生）植物的形态和寄生结构
（1）桑寄生属（Loranthus）：绿性植物。观察寄生植物的匍匐茎和吸盘，从受害寄主茎部的剖面，观察寄生植物侵入寄主的情况，能看到假根和次生吸根否？桑寄生属植物可作为中草药，有利尿等作用。 桑寄生（L．parasitica）叶片两面光滑，果实红色。 樟寄生（L．yadorica）叶背密生星状短毛，果实黄色。 （2）槲寄生属(Viscum）：常绿性植物，无主茎，呈二叉分枝，叶片卵圆形对生。在我国危害较重要的有二种，大多在云南、贵州、广西和广东等地。
4 观察全寄生植物的形态特征和寄生结构
（1）菟丝子属（Cuscuta）：观察寄生在大豆上的菟丝子（C．chinensis）寄的茎呈什么颜色？叶片的发育情况如何？菟丝子的花里喇叭状（属旋花科）。果实的颜色怎样？剥开果实，每个果实内的种子有多少？大小和形状是否有规则？ 将缠绕在寄主体上的菟丝子解开，如所用的材料是新鲜标本，可以看见菟丝子的吸根固着在寄主茎的表面，吸根是什么形状？如果用的是干标本，在解开它的缠绕茎时，干而脆的吸根往往被折断，但可以用放大镜在寄主茎的表面观察到吸器着生处的痕迹的外貌及其排列情况。 在显微镜下观察被菟丝子寄生的大豆茎的横切面（切片），观察形态和解剖结构。注意寄与寄生的导管和筛管相连部位的结构情况，绘图。 （2）列当属（Orobanche）∶ 列当的花冠是唇形的，果实是蒴果，种子很小。观察为害瓜类的埃及列当（O.aegyptica）或向日葵列当（O．cumana）的标本,注意形态特征。
四、作业与思考题
绘小麦粒线虫雌虫、雄虫体形图，注意交合刺、交合伞。绘滑刃线虫雄虫尾部图，注意有无交合伞？绘菟丝子形态图，绘菟丝子吸根形态解剖图。
（1）植物寄生线虫的致病特点是什么？ （2）根结线虫和胞囊线虫为害根部时，症状有何不同？ （3）哪一种方法鉴别线虫死活简便？ （4）比较观察到的寄生性种子植物的形态特征及寄生性。 （5）寄生性种子植物怎样传播扩散？ （6）植物寄生在植物上，这是生物的进化现象还是退化现象？ （7）被寄生的寄主植物会不会枯死？为什么？
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